Cucurbita Pepo L. Seedsのエタノール抽出物は、慢性ストレスラットの神経内分泌障害と炎症マーカーおよびHSP70の副腎発現を修飾します

1プリンセス・ヌーラ・ビント・アブドゥラマン大学（PNU）、リヤド、サウジアラビア、医学部基礎科学科、

2エジプト、マンスーラのマンスーラ大学医学部医学組織学および細胞生物学科

3組織学部、医学部、メノフィフィア大学、シェビン・エルクム、エジプト、

4サウジアラビア、ブライダ、カシム大学、ウナイザ医科医科学大学基礎医学科

5サウジアラビア、ジェッダ、キングアブドゥルアズィーズ大学理学部生物科学科

6サウジアラビア、タブーク、タブーク大学応用医学部医学研究所技術科

7キングアブドゥルアズィーズ大学理学部生化学科、サウジアラビア、ジェッダ、

8エジプト、アシュート、アシュート大学医学部組織学および細胞生物学科、

9Yousef Abdullatif Jameel予言的医療アプリケーション（YAJCPMA）の議長、医学部、キングアブドゥルアズィーズ大学、ジェッダ、サウジアラビア、

10キングアブドゥルアズィーズ大学病院（KAUH）血液学/小児腫瘍学科、キングアブドゥルアズィーズ大学医学部、ジェッダ、サウジアラビア、

11エジプト、ダミエッタ、ダミエッタ大学医学部医学組織学科

詳細情報：ali.ma@wecistanche.com

バックグラウンド：カボチャ（Cucurbita pepo L.）は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗疲労作用、および抗うつ作用のような効果があると説明されています。 The副腎ストレス時に恒常性を維持する重要なストレス応答器官です。

目的：この研究は、Cucurbitaの投与の有効性を評価することを目的としましたpepo L.（CP）抽出物は、行動、生化学的、および構造的変化を緩和します。副腎慢性的な予測不可能な軽度のストレス（CUMS）への曝露によって誘発され、この影響の背後にあるメカニズムを調査します。 材料と方法：40匹のオスのアルビノラットを4つのグループ（n -10）に分けました：コントロール、CUMS、フルオキセチン治療、およびCP治療グループ。 行動の変化、コルチコステロンレベル、炎症誘発性サイトカインTNF-およびIL -6、および酸化剤/抗酸化剤プロファイルは、実験の最後に血清で評価されました。副腎腺は、組織病理学的および免疫組織化学的評価のために処理された。 カスパーゼ-3とKi67および熱ショックタンパク質70（HSP70）の遺伝子発現は、RT-PCRを使用して副腎で評価されました。

結果：CP抽出物は、コルチコステロンレベルを大幅に低下させました（p <0 .001）、不動時間（p <0 .001）、および未治療群と比較したcums誘発性うつ病に関連する炎症性および酸化性の変化。="">副腎組織病理学的変化とアポトーシスの有意な減少（p <0 .001）および血清中の抗酸化物質レベルの有意なアップレギュレーション。

キーワード：カボチャ、ストレス、うつ病、カスパーゼ-3、ki67、Hsp70、アポトーシス

副腎のためのカンカニクジュヨウの投与量をクリックしてください

前書き

世界中で2億6400万人以上のあらゆる年齢の人々がうつ病に苦しんでいます（WHO、2020年）。 うつ病の人のパフォーマンスは、一般的に学校、職場、そして家族で貧弱です。 うつ病は自殺につながる可能性があります。 そのため、15-歳から29-歳までの2番目に多い死因と見なされています（WHO、2020年）。 哺乳類は、これらのイベントに対する適切な生理学的反応を活性化することにより、ストレスの多いイベントを乗り切ることができます。 副腎は視床下部-下垂体-副腎皮質（HPA）軸の一部であり、ストレス時に恒常性を維持する交感神経-副腎髄質軸です（Ulrich-Lai et al。、2006）。 熱ストレスにさらされると、副腎皮質でHSP70が急速に発現することが報告されています（Huang et al。、2001）。 これらのタンパク質は、細胞内輸送、抗原提示、アポトーシス、および他の多くの作用を共有しています（Khar et al。、2001）。 外因性ホルモンまたは内因性ホルモンへの干渉は、発達の重要な時期に、視床下部の神経内分泌回路によって調節される生理学的および行動的経路に永続的な影響を与える可能性があることが説明されています（Gore and Patisaul、2010）。 神経内分泌かく乱は、内分泌かく乱の概念を拡張して、統合生理学の全幅を含むように説明されました。 したがって、それはホルモンの動揺以上のものです（Waye and Trudeau、2011）。 神経内分泌の調節、代謝、および食事/マイクロバイオータの変化は、炎症およびうつ病を発症する素因の引き金と見なされます（Huang et al。、2019）。 神経精神障害の1つであるうつ病と炎症には双方向の関係があると仮定されていました。 うつ病は炎症反応を促進しますが、炎症はうつ病を含む神経精神障害を促進します（Bauer and Teixeira、2019）。 古典的な抗うつ薬であるフルオキセチンは、うつ病の治療のために市場で入手可能な薬の1つです。 現在、これは新たな神経内分泌破壊因子と見なされています。

フルオキセチンのこの効果は、哺乳類の主な治療標的ではなく、副作用です（León-Oleaet al。、2014）。 したがって、神経内分泌状態に副作用のない、より安全な抗うつ薬が必要です。 カボチャ（Cucurbita pepo L.）は、世界中で栽培されている経済的に重要な種です。 それらはフェノール類、フラボノイド、アミノ酸、炭水化物、およびビタミンが豊富であるため、栄養面および健康面での利点があります（Wang et al。、2002）。 いくつかの調査研究は、カボチャが抗糖尿病、抗癌、抗酸化、抗炎症、抗疲労、および抗うつ薬のような効果などの広範な生物活性を持っていることを明らかにしました（Wang et al。、2012; Zhang et al。、2012;Nawirska-Olszańskaet al。、2013; Kim Nr et al。、2016）。 伝統医学、主にアーユルヴェーダシステムと中国医学は、果物や種子の果肉など、カボチャのさまざまな部分を使用してきました（Perez Gutierrez、2016年）。 Sweetme Sweet Pumpkin（SSP）とCucurbita moschata Duchの抗うつ効果は、強制水泳試験（FST）によって誘発されたうつ病の動物モデルを使用したインビボ研究で以前に試験され、フルオキセチンと比較されました（Kim Nr et al。、2016） 。 比較的最近のレビューの1つは、カボチャの種などの抗うつ薬のスコアが47％であり、抗うつ薬のような効果があると説明されていることをまとめたものです（Lachance and Ramsey、2018）。 最近、DottoとChachaは、うつ病に対するカボチャの種の改善効果を確認するために、より多くの動物および臨床試験に基づく調査研究を実施することを承認しました（Dotto and Chacha、2020）。 これらの報告は、副腎への慢性ストレスの影響を軽減するカボチャの有効性をテストすることを奨励していました。 したがって、この研究は、慢性的な予測不可能な軽度のストレス（CUMS）によって誘発される行動、生化学的、および副腎の構造の緩和に対するCucurbita pepo L.（CP）抽出物の経口投与の効果を評価し、この影響の背後にあるメカニズムを調査するために行われました。 。

材料および方法

カボチャの抽出と投与量

Cucurbita pepo L.（バウチャー標本：AQJ _95）は、サウジアラビアのジェッダの地元の市場から購入しました。 それらは、キングアブドゥルアズィーズ大学の植物標本室で、植物標本とKSAの植物相を使用して特定されました（Chaudhary、2001）。 バウチャー標本は植物標本室に保管されました。 CPは著者によって特定され、キングアブドゥルアズィーズ大学理学部の植物学者によって検証されました。 CPの抽出は、以前の研究（Wang et al。、2012）に従って行われました。 皮をむいた生果実をスライサーで切断し、凍結乾燥機（FD5508; ilShinBioBase Co.、Ltd.、Korea）で乾燥させた後、電気粉砕機で粉砕した。 粉末を40-メッシュのふるいに通して微粉末を得、密閉容器に保管した。 乾燥粉末（50 g）を450 mlの80％エタノールと混合し、シェーカー（JSSI -100 T; JS Research Inc.、Compact Shaking Incubator。、Korea）内で37℃で1日間放置しました。その後、2日目に綿とろ紙でろ過しました。 この抽出プロセスを37度で2回繰り返し、エタノール抽出物を得ました。

CPの構成要素の識別

PEの化学組成は、直接キャピラリーカラムTG-5MS（Thermo Scientific、Austin、TX、United States）を備えた微量ガスクロマトグラフィーGC-TSQ Evo 8 0 0 0質量分析計（Thermo Scientific、Austin、TX、United States）を使用して分析しました。 30m×0.25mm×0.25µmの膜厚）。 カラムオーブン温度を最初に50度に設定し、次に5℃/分で250℃に上げて2分間保持し、次に最終温度300度に25度/分で上げて2分間保持しました。 インジェクターとMSトランスファラインの温度はそれぞれ270℃と260℃に保たれました。 ヘリウムを1ml/分の一定流量でキャリアガスとして使用しました。 溶媒遅延は4分で、オートサンプラAS1300とGCを組み合わせたPTVインジェクタのスプリットレスモードを使用して、3 µlの希釈サンプルを自動的に注入しました。 EI質量スペクトルは、フルスキャンモードでm / z 50〜650の範囲にわたって70eVのイオン化電圧で収集されました。 イオン源温度は250度に設定しました。 成分は、それらの質量スペクトルを、抽出物中の未知の成分の化学組成を識別および研究するために使用されるWILEY09およびNIST14質量スペクトルデータベースの質量スペクトルと比較することによって識別されました（Wiley、2006; Mikaia et al。、2014）。 分析はThermoScientifific™Xcalibur™2.2ソフトウェアを使用して定性的なタイプで行われ、すべての値は相対的なパーセンテージで報告されました（Abd El-Kareem et al。、2016）。

実験計画

この研究は、サウジアラビアのジェッダにあるキングアブドゥルアズィーズ大学医学部の生物医学研究倫理委員会によって承認されました（参照番号{{0}}）。 この研究では、体重15 0 – 200 g、2–3か月齢の40匹のオスのアルビノラットをKing Fahd Medical Research Center（KFMRC）から入手しました。 実験を開始する前に、ラットを実験室条件に1週間順応させた。 CUMSに曝露されないままにされた対照群として10匹のラットが割り当てられた。 他の30匹のラットは、ストレスへの慣れを防ぐために、1日の異なる時間に異なるタイプのストレッサーを含むCUMSの手順に4週間さらされました。 CUMSの手順は、以前の研究（Ayuob et al。、2016; Ali et al。、2017）で完全に説明されており、表1に示されています。CUMSに曝露されたラットは3つのグループに分けられました（n10）。 未処理グループ（CUMS）は、ビヒクル0.03パーセントのカルボキシメチルセルロース（CMC-Na）を2週間強制経口投与されました。 FLU治療群は、薬理学的検証に使用される抗うつ薬であるFLU（Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co.、Ltd.、Amman、Jordan）を受け取り、胃管栄養法（Li et al。、2014）。 Wang et al。によれば、CP治療群は、蒸留水に溶解したCP抽出物を100 mg/kgの用量で2週間強制経口投与した。 （2012）。

行動変化の評価

ラットに対するCUMSの効果を確認するために、4週間後にFSTを実施しました（Ali et al。、2017）。 この試験中、各ラットを、25±2℃で15cmの水を入れたガラス状の円筒形容器（高さ20cm、直径14cm）に入れた。行動ソフトウェア（Noldus Information Technology、EthoVision）を使用してラットを6分間ビデオ撮影した。 XT®）、および6分間の不動に費やされた合計時間は、実験グループを知らない技術者によって測定されました。 マウスを浮かせておくために必要なわずかな動きを除いて、四肢を動かさずにラットが費やした合計時間（秒）を、6分間の「不動時間」と決定した。

生化学的技術

行動試験を終えてから24時間後、100％酸素中の4％イソフルラン（SEDICO Pharmaceuticals Company、カイロ、エジプト）で麻酔した後、ラットの眼窩内洞から血液サンプルを採取しました。 その後、ラットを頸椎脱臼により安楽死させた。 血液サンプルを3、000 rpmで15分間、4℃で遠心分離して血清を得、生化学的評価のために-18℃に保った。 コルチコステロン（ALPCO Diagnostics、Orangeburg、NY、United States）のレベルは、製造元の指示に従って酵素結合免疫吸着測定キットを使用して評価しました。 製造元の指示に従って、TNF-およびIL -6（Quantakin R＆Dシステム、USAキット）は、酵素免疫測定法を使用して評価されました。 各サンプルの光学密度は、450nmに設定されたマイクロプレートELISAリーダーを使用して2回測定しました。 チオバルビツール酸反応性物質（TBARS）アッセイキット（Biodiagnostic;エジプト）を使用して、535 nmでのマロンジアルデヒド（MDA）のレベルを分光光度計で測定しました（Gamal et al。、2018）。 スーパーオキシドジスムターゼ（SOD）のレベルは、SODアッセイキット（Biodiagnostic; Egypt）（Packer、2002）を使用して測定しました。 グルタチオンペルオキシダーゼ（GPX）レベルの評価は、GPXキット（Randox Labs、クラムリン、英国）を使用して実行されました。 カタラーゼ（CAT）の活性を定量化するために、アッセイキット（Biodiagnostic; Egypt）を使用して、アッセイとすべてのサンプルの検量線を作成しました。 この方法は以前に説明されています（Gamal et al。、2018）。

定量的リアルタイムPCR

組織サンプルからのRNA抽出は、TriFast™試薬（PeqLab、ドイツ、カタログ番号：{{0}}）を使用して、製造元のプロトコルに記載されているように行いました。 NanoDrop 2 0 0 0 c分光光度計（Thermo Scientific、United States）を使用して、精製されたRNAの濃度を推定しました。 各サンプルから抽出されたRNAは、RT-qPCR用のSensiFAST™cDNA合成キット（Bioline USA Inc.、米国、カタログ番号：BIO -65053）を使用して、製造元の指示に従って逆転写されました。 合成されたcDNAは、qRT-PCRに利用されるまで-80度で保存されました。 qRT-PCR反応は、Applied Biosystems 7500リアルタイムPCR検出システム（Life technology）でSensiFAST™SYBR Lo-ROXキット（Bioline USA Inc.、米国、カタログ番号：BIO -94002）を使用して実行しました。 、 アメリカ）。 この研究で使用されたラットの遺伝子特異的プライマーは、Primer3ソフトウェア（v.0.4.0）によって設計され、NCBI/Primer-BLASTプログラムを使用してそれらの特異性がチェックされました。 その後、プライマーはWillowfort™（英国）から購入しました。 プライマーはGAPDH（5'-TGCACCACCAACTGCTTAGC -3'、5'-GGC ATGGACTGTGGTCATGAG -3'）、カスパーゼ-3（フォワード5- TGT ATGCTTACTCTACCGCACCCG -3、リバース5-GCGCAAAGTGACTGGATGAACC -3）、HSP70（5'-ACGAGGGTCTCAAGG GCAAG -3'、5'-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG -3'）。 Ki67（順方向5- AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA -3、逆方向5- AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA 3）。 PCR混合物は次のように調製しました：10 µlのSensiFASTTM SYBR Lo-ROXミックス、0.8 µlのフォワードプライマー、0.8 µlのリバースプライマー、2 µlのテンプレートcDNA、および6.4 µlのヌクレアーゼフリー水。 反応混合物を、９５度で２分間保持するように事前にプログラムされたサーマルサイクラーに移し、続いて、９５度で１５秒間、次いで６０度で３０秒間の４０サイクルを行った。 テンプレートを含まないネガティブコントロール反応は、各実験で実行されました。 PCR産物の特異性を証明するために融解曲線分析を実施し、各反応のCt値を増幅プロットから取得しました。 組織サンプルにおける各遺伝子発現の相対的定量化は、内部対照遺伝子としてGAPDHを用いた比較閾値（ΔΔCt）法を使用して計算されました。 全体的な倍率変化については、2-ΔΔCt算術式によって計算および線形化されました。

組織学的手法

実験の終わりに、そしてラットに麻酔をかけた後、腹部を開き、右副腎を切り出した。 パラフィンブロックを得るために、副腎を1 0パーセントの中性緩衝ホルマリンで固定し、さらにプロセスを実行しました。 4-μmの厚さのパラフィン切片を調製し、ヘマトキシリンおよびエオシン（H＆E）で染色しました。 さらに、他のパラフィン切片は、ストレプトアビジン-ビオチン-ペルオキシダーゼ技術を使用して免疫組織化学的に染色されました。 スライドを4度で一晩インキュベートした後、細胞増殖を実証するためにモノクローナル抗Ki67（Dako Cytomation、米国、希釈率1：1、000）とインキュベートしました。 さらに、アポトーシスの検出には、ポリクローナル抗カスパーゼ-3抗体（Santa Cruz Biotechnology、米国、希釈率1：1、000）を使用しました。 熱ショックタンパク質-70（HSP70）（Dako、Carpinteria、CA、United States、希釈率1：1、000）に対するポリクローナル抗体も利用しました。 Dako染色システムからの対応するビオチン化コンジュゲート二次抗体を使用しました。 二次抗体のみで染色されたスライドは、ネガティブコントロールとして使用されました。 核はヘマトキシリンで対比染色された。 茶色の細胞質染色は陽性反応と見なされた。 染色された切片は、デジタルカメラとコンピューターに接続されたオリンパス顕微鏡BX -51（オリンパス）を使用して検査および写真撮影されました。 抗体免疫反応性の半定量分析は、ProPlus画像分析ソフトウェアによって行われました。 免疫陽性反応のパーセンテージ領域は、倍率400倍で30フィールドで評価されました。 Zhou et al。によって説明されているように、陽性細胞は面積1.0mm2あたりでカウントされました。 （2016）。 各スライドから少なくとも5つのフィールドを調べ、各動物の平均を計算しました。 形態計測分析のために、各動物で4つの切片を調べた（倍率×100）。 副腎の異なるゾーンの厚さはマイクロメートルで測定されました。 副腎皮質の厚さは、髄質と副腎嚢の間の距離を直線で測定することによって得られ、副腎皮質の各象限で1回の測定が行われます。

統計分析

結果

行動の結果

GC-MSを使用したCP抽出物分析の結果

生化学的評価

血清中のコルチコステロンレベル

コルチコステロンレベルは、対照ラットと比較して、CUMSに曝露された未治療ラットで有意に増加しました（p <{{0}}。001）が、FLUおよびCPで治療されたラットは有意な減少を示しました（p <0.001）血清コルチコステロンレベルで。

血清中のTNF-およびIL-6レベル

血清中のMDA、SOD、GPX、およびCATレベル

Ki67、カスパーゼ-3、およびHSP70の遺伝子発現

RT-PCRは、コントロールグループと比較してCUMSグループの副腎でわずかに高いKi67遺伝子発現を示しましたが、FLUおよびCP治療グループのそれはCUMS曝露グループのそれと比較して有意に高い発現を示しました（図3E） 。 カスパーゼ-3に関しては、その遺伝子発現は、コントロールグループと比較してCUMSグループの副腎で有意に増加しました（p<0。001）。 cp治療群は、cums曝露群と比較して有意な減少を示しました（図3f="" hsp70遺伝子発現に関しては、cums群の副腎で有意に高い（p=""><>

組織病理学的評価

討論

現代社会は明らかに、日常の問題、健康管理、および仕事関連の問題から生じる可能性のあるストレスに満ちています。 これらのストレッサーは、いわゆるストレス関連障害を引き起こす可能性があります（Clayton and Mccance、2014）。 この研究では、Cucurbita pepo L.の果肉と皮のエタノール抽出物を使用して、CUMSによって誘発される抑うつ行動と副腎への影響を軽減する可能性を調査しました。 これはによって証明されました

血清コルチコステロンレベルの有意な増加であり、FST中の不動時間の延長によって確認されました。 これらの調査結果は、以前に報告された調査結果と一致していました（Tang et al。、2015）。 TNF-とIL-6の両方がうつ病の病因に関与していることが報告されました（Taraz et al。、2015; Pedraz-Petrozzi et al。、2020）。 IL -6またはTNF-受容体を欠損したマウスは、抑うつ行動に耐性があることが報告されています（Viana et al。、2010）。 したがって、これらはこの研究で評価され、TNF-およびIL -6の両方がCUMSに4週間曝露されたラットの血清で有意に増加したことが観察され、それらが抑制されたことを示しています。 この発見は沼川らによって支持されました。 （2014）行動的絶望のあるマウスおよびTarazetal。 （2015）うつ病の患者。 この研究では、カボチャ抽出物の投与は抑うつ行動の改善と関連しており、FSTの不動時間の有意な減少によって明らかであり、コルチコステロンおよび炎症性サイトカインTNF-およびIL-6の有意な減少によって確認されました。血清。 これらの調査結果は、Kim Nretalによってサポートされました。 （2016）28日間のSSPが鬱病のラットの炎症性サイトカインのレベルを減少させたことを報告した人。

カボチャの抗炎症作用は、オレイン酸、パルミチン酸、エストラジオールなどのカボチャの活性化合物に起因する可能性があります。 オレイン酸、パルミチン酸、およびリノール酸のダウンレギュレーションは、うつ病で説明されました（Conklin et al。、2010;Martínetal。、2010）。 オレイン酸を介した神経保護は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（PPAR-）の活性化を介した抗炎症効果に関連していることが報告されています（Song et al。、2019）。 それに加えて、パルミチン酸はホスホリパーゼA（2）を阻害することが報告されているため、抗炎症性化合物と見なされています（Aparna et al。、2012）。 エストラジオールは、この研究で検出されたカボチャの化合物の1つでした。 エストラジオールは、抗炎症効果を誘発し、その後、抑うつ行動を緩和することが報告されています（Xu et al。、2015）。 エストラジオールが抗うつ効果を誘発できるもう1つのメカニズムは、脳由来神経栄養因子（BDNF）の発現のアップレギュレーションと、脳内のER-の活性化によるERKリン酸化です（Yang et al。、2010）。 この研究では、MDAの血清レベルが上昇し、CUMSに曝露されたラットではSOD、GPX、およびCATレベルが低下しました。 以前の研究では、CUMSへの曝露後に同様の変化が記録されており、これらの生化学的変化が酸化ストレスとHPAの障害をもたらすと付け加えました（Nabavi et al。、2015）。 Liu T.etal。 （2015）また、うつ病の発症は、体内の抗酸化物質の含有量が少ないことに起因する可能性があることを報告しました。

カボチャ果実抽出物の抗酸化特性が頻繁に報告されました（Bahramsoltani et al。、2017）。 さらに、Cucurbita pepo L.の果肉と皮は、種子などの他の部分よりも高い抗酸化活性を処理することが報告されています（Oyeleke et al。、2019）。 カボチャ抽出物の投与は、以前の多くの研究で、マウスの血清中のSODとGPXのレベルを大幅に増加させ、MDAを減少させました（Guo-Hua et al。、2000; Dang、2004）。 したがって、カボチャの抗酸化作用は、この研究で明らかな抗うつ効果の背後にある可能性があります。 これは、KimNrらの観察と一致しています。 （2016）。 抗炎症作用、抗酸化作用、抗疲労作用のある天然物にも抗うつ薬のような効果があることが報告されています（Jeong et al。、2015）。 これらの以前の活動はすべて、カボチャで証明されました。 この研究のCUMSグループで観察された副腎皮質細胞の細胞質空胞化の増加は、コルチゾール合成の基礎を形成する脂質の需要の増加に起因する可能性があります。 Cigankovaetal。 （2005）長期にわたる実験的な超動的が皮質細胞の複数の細胞質脂肪滴の合体をもたらしたことを観察しました。 これらの脂肪滴には、ステロイドホルモン合成の主要な前駆体であるコレステロールが含まれています。

しかし、Koldysheva and Lushnikova（2008）は、ストレスが副腎皮質の細胞、特にZFの脂肪滴の有意な減少をもたらしたことを報告しました（Koldysheva and Lushnikova、2008）。 身体的ストレスにさらされると、痛みの刺激が視床下部に伝達され、下垂体門脈系へのCRH分泌を引き起こし、ACTH分泌を増加させ、ZFおよびZRの受容体を刺激してコルチゾール分泌を増加させることが説明されました（Pattietal。 、2018）。 CUMSに暴露されたラットで観察された肥厚した副腎被膜と小柱は、固定化ストレスへの暴露による線維芽細胞によるコラーゲン合成の増加の結果として以前に報告された（El-Desouki et al。、2011; Altayeb and Salem、2017）。 CUMSに曝露されたラットの副腎の多くの細胞は、深く染色された核を示し、カスパーゼ-3免疫組織化学的染色によって確認されたアポトーシスを受けたことを示しています。 Altayeb and Salem（2017）は、ラットの副腎に対する固定化ストレスの影響を研究しているときに、同様の観察結果を報告しました。 Liu Q.etal。 （2015）は、この研究でCUMSに曝露した後に明らかな過剰な酸化ストレスが、「アポトーシス関連遺伝子」の発現レベルを変更し、Bcl -2、Bax、およびカスパーゼのシグナル伝達経路を介して細胞のアポトーシスと変性を誘導することを報告しました-3。 このメカニズムは、カスパーゼ-3遺伝子発現の有意なアップレギュレーションを明らかにしたRT-PCRによるこの研究で確認されました。

文献を検討したところ、さまざまな組織でカスパーゼ-3を介したアポトーシスに対するペポカボチャの直接的な影響はありませんでした。 副腎で検出されたカスパーゼ-3陽性アポトーシス細胞の減少は、この研究で記録されたCucurbitapepoの抗酸化作用に起因しているようです。 これは、重要な抗酸化作用を持つ他の植物やハーブで行われた多くの以前の研究によって裏付けられています（Banagozar Mohammadi et al。、2019; Ghazizadeh et al。、2020）。 この研究は、CUMSへの曝露が副腎皮質のKi 67-陽性細胞を増加させたことを示しました。これは、ZFで有意に明らかであり、増殖細胞の数が増加したことを示し、その結果、この層の厚さが大幅に増加しました。 一方、Ki 67-陽性の増殖細胞の数は、CUMSに応答して延髄でわずかに減少しました。 これらの観察結果は、Ulrich-Laiらの観察結果と一致していました。 （2006）延髄が過形成ではなく細胞肥大を示したのに対し、慢性可変ストレスへの曝露後、外側のZFでのみKi67-陽性細胞核の増加を報告した。 さらに、Laborie et al。、（2003）は、慢性ストレスへの曝露後の延髄機能の一般的な増加を報告しました。

慢性ストレスが髄質肥大につながる可能性があることを示唆しています。 この研究では、カボチャ抽出物の投与により、細胞増殖が有意に増加しました。これは、CUMSと比較して、Ki67遺伝子のアップレギュレーションと、ほぼすべてのゾーンおよび副腎髄質での免疫発現によって明らかです。 これは、この研究で記録された腺ゾーンの厚さの増加を説明しました。 また、CUMSへの曝露によって誘発されるアポトーシス効果を補償する可能性があります。 この発見は、KimHyらによってサポートされています。 （2016）Ki67のmRNA発現の有意なアップレギュレーションと、SSP、ストリーミング、およびCucurbitamoschataDuchとその主成分である-カロチンで処理されたBALB/cマウスの脾臓から分離された脾臓細胞の増殖を報告しました。 本研究では、CUMSへの曝露により、副腎のすべてのゾーンでHSP70の遺伝子発現と免疫発現が有意に増加しました。 それと一致して、鄭等。 （2008）また、ストレスの多い条件への曝露後の増強されたHSP70発現が、炎症性転写因子である核因子-カッパB（NF-カッパB）の活性化を阻害することによって炎症性応答を調節することを証明した。 さらに、HSP70はアポトーシスと壊死を直接妨害する可能性があります（Yenari et al。、2005）。 最近では、Lietal。 （2019）熱ストレスへの暴露後のブタ副腎組織におけるHSP70発現のアップレギュレーションを報告しました。これは、副腎損傷におけるHSP70の役割を示し、炎症反応との関連性を強調しています。

ストレスに応答したHSP70の迅速な誘導は、細胞保護プロセスに不可欠であると考えられています。 私たちの研究では、CUMSに曝露されたラットをカボチャで治療すると、アポトーシスと炎症反応の低下に関連するHSP70発現のわずかな低下に関連していました。 これは、カスパーゼ-3を介したアポトーシスの減少と炎症性サイトカインの放出をもたらしたため、FLUとCPの両方によって誘発された比較的高レベルのHSP70の有益な効果を示している可能性があります。 熱ショックタンパク質ファミリーに対するカボチャの効果はこれまでに説明されていませんでしたが、この研究で使用されたカボチャの主成分であるオレイン酸は、ヒトTリンパ球細胞株（Martins De Lima）におけるHSP60の発現をダウンレギュレートすると説明されました。 et al。、2004）、これは私たちの研究結果を支持しています。 抗うつ薬様物質としてのペポカボチャの提案された作用機序を図7に要約します。この研究の限界の中には、CPの抗うつ効果の詳細なメカニズムをさらに調査することができないというものがありました。そうすることをお勧めします。 結論として、この研究は、副腎への組織病理学的影響だけでなく、CUMSによって誘発される行動および生化学的変化を軽減するためのCucurbitapepoL.抽出物の有効性の科学に基づく証拠を提供します。 これらの効果は、アポトーシスとHSP70発現のダウンレギュレーションによって明らかであり、CucurbitapepoL.抽出物の抗酸化作用と抗炎症作用によって媒介されるようでした。 この研究および他のいくつかの最近の研究は、Cucurbita pepoの抗うつ薬のような効果を文書化し、そのメカニズムを調査しましたが、ヒトにおけるこの効果を確認するには、臨床研究を含むさらなる研究が必要です。

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参考文献

Abd-El-Kareem、MSMA、Rabbih、MAEF、Selim、ETM、Elsherbiny、EAE-M。、およびEl-Khateeb、AY（2016）。 バジル精油中のいくつかの揮発性成分の同定と調査のための半経験的計算と組み合わせたGC/EIMSの適用。

Altayeb、Z.、およびSalem、M.（2017）。 成体ラットの副腎皮質に対する固定化ストレスの影響およびビタミンEJMedの改善的役割の可能性に関する光学および電子顕微鏡研究。 組織学1、44–56。

Aparna、V.、Dileep、KV、Mandal、PK、Karthe、P.、Sadasivan、C.、およびHaridas、M.（2012）。 N-ヘキサデカン酸の抗炎症特性：構造的証拠と速度論的評価。 化学。 Biol。 ドラッグデ 80、434–439。

Bahramsoltani、R.、Farzaei、MH、Abdolghaffari、AH、Rahimi、R.、Samadi、N.、Heidari、M.、etal。 （2017）。 Cucurbita Moschata Duchesneフルーツピールの植物化学物質、抗酸化剤および火傷の治癒活性の評価。 イランJ.ベーシックメッド。 科学 20、798〜805。 doi：10.22038 / IJBMS.2017.9015

Banagozar Mohammadi、A.、Torbati、M.、Farajdokht、F.、Sadigh-Eteghad、S.、Fazljou、SMB、Vatandoust、SM、etal。 （2019）。 セリシンは、前頭前野および海馬における酸化ストレス、神経炎症、およびアポトーシスの調節を介して、拘束ストレスによって誘発される抑うつおよび不安のような行動を緩和します。

バウアー、ME、およびテイシェイラ、AL（2019）。 精神障害における炎症：何が最初に来るのか？ アン。 N.YAcad。 科学 1437、57–67。

Chaudhary、S.（2001）。 サウジアラビア王国の植物相：図解リヤド：農業水省、国立植物標本館、国立農業水研究センター、2。リヤド：解剖学と形態。

Cigankova、V.、Zibrin、M.、Bod A、K.、およびHolovska、K.（2005）。 日本のウズラの副腎に対する長期実験的下垂体の影響：および超微細構造研究。 BULLETIN-VETERINARY INSTITUTE PULAWY 49、449。

Clayton、M.、およびMccance、K.（2014）。 「ストレスと病気」、病理生理学では、成人と子供の病気の生物学的根拠。 編集者のK.Mccance、S。Huether、V。Brashers、およびN.Rote。 第7版 （米国：カナダエルゼビア）。

Conklin、SM、Runyan、CA、Leonard、S.、Reddy、RD、Muldoon、MF、およびYao、JK（2010）。 大うつ病性障害のある個人の前帯状皮質におけるN-3およびN-6多価不飽和脂肪酸の加齢に伴う変化。 プロスタグランジンロイコット。 エッセント。 酪酸82、111–119。

Doron、R.、Lotan、D.、Versano、Z.、Benatav、L.、Franko、M.、Armoza、S.、etal。 （2014）。 ストレスへの曝露中または曝露後のエスシタロプラムまたは新規ハーブ混合物治療は、コルチコステロンおよびBDNF修飾を通じて不安様行動を軽減します。

Dotto、JM、およびChacha、JS（2020）。 機能性食品成分としてのカボチャ種子の可能性：レビュー。 科学的Afr。 10、e00575。

デューク、JA（1992）。 GRASハーブおよび他の経済的植物の植物化学成分のハンドブック。 [オンライン]。 ボカラトン：FL：CRCプレス。

El-Desouki、N.、El-Refaiy、A.、Abdel-Azeem、H.、およびEl-Baely、M.（2011）。 固定化の効果の組織学的および超微細構造的研究

アルビノラットの副腎皮質へのストレスとジアゼパムの改善的役割。 J.エジプト。 ゲル。 Soc。 Zool 62、25〜45。 Gamal、M.、Moawad、J.、Rashed、L.、Morcos、MA、およびSharawy、N.（2018）。

敗血症誘発性脳機能障害におけるレドックスホメオスタシスの妨害におけるテトラヒドロビオプテリンの関与の可能性。 脳の解像度。 1685、19–28。

ゴア、AC、およびパティサウル、HB（2010）。 神経内分泌破壊：歴史的ルーツ、現在の進歩、将来への質問。 フロント。 ニューロエンドクリノール。 31、395〜399。

Guo-Hua、X.、Zhi-Hong、H.、およびYong-Fangl、W.（2000）。 カボチャ多糖類の抗腫瘍効果と免疫力の可能性に関する研究。 J.武漢Prof.Med。 Coll。 28、1〜4。

Hema、R.、Kumaravel、S.、およびAlagusundaram、K.（2011）。 MurrayaKoenigiiの生物活性成分のGC/MS測定。 混雑する。 科学 7、80〜83。 Huang、L.、Mivechi、NF、およびMoskophidis、D.（2001）。 主要なストレス誘発性Hsp70分子の調節と機能への洞察

シャペロンインビボ：hsp70.1またはhsp70.3遺伝子の標的遺伝子破壊を伴うマウスの分析。 モル。 セル、バイオル。 21、8575〜8591。

Huang、Q.、Liu、H.、Suzuki、K.、Ma、S.、and Liu、C.（2019） 私たちが食べるものを私たちの気分に結びつける：食事療法、食事療法の抗酸化物質、およびうつ病のレビュー。 酸化防止剤8、376。doi：10.3390 / antiox8090376

チョン、HJ、キム、JH、キム、NR、ユウ、MS、ナム、SY、キム、KY、他 （2015）。 スティレンの抗うつ効果。 アーチ。 薬。 解像度 38、1223〜1231。

Jonnalagadda、SC、Suman、P.、Morgan、DC、およびSeay、JN（2017）。 「チャプター2 -治療薬としてのベツリンおよびベツリン酸誘導体の合成と応用に関する最近の進展」、天然物化学の研究。 編集者R.AttaUr（エルゼビア）。 Khar、A.、Ali、AM、Pardhasaradhi、BY、Varalakshmi、CH、Anjum、R.、およびKumari、AL（2001）。 ストレス反応の誘発はヒト腫瘍細胞をレンダリングします

クルクミン媒介アポトーシスに耐性のある系統：活性酸素中間体の役割。 細胞ストレスシャペロン6、368–376。 doi：10.1379 / 1466-1268（2001）006<0368:iosrrh>2.0。co;2菊池徹、安藤秀樹、前川晃、有江秀樹、山田徹、田中亮（2015）。 ズッキーニ（Cucurbita Pepo L.）種子からの2つの新しいEnt-kauraneタイプのジテルペングリコシド。 Fitoterapia 107、69–76。 doi：10.1016 / j.fifitote.2015.09.019 Kim、HY、Nam、SY、Yang、SY、Kim、HM、およびJeong、HJ（2016a）。 カボチャ

MoschataDuch。 そして、その有効成分であるカロチンは、脾細胞とマクロファージの活性化を通じて免疫応答を効果的に促進します。 免疫薬剤。 免疫毒性物質。 38、319–326。

Koldysheva、EV、およびLushnikova、EL（2008）。 全身温熱療法後のラット副腎皮質の超微細構造の再編成。 ブル。 Exp。 Biol。 Med。 145、650〜655。

メチラポン誘発糖質コルチコイド枯渇は、非コリン作動性シナプス間活性化により、ラット副腎におけるチロシンヒドロキシラーゼおよびフェニルエタノールアミンN-メチルトランスフェラーゼ遺伝子発現を調節する J.ニューロエンドクリノール。 15、15〜23。

Lachance、LR、およびRamsey、D.（2018）。 抗うつ食品：うつ病の証拠に基づく栄養素プロファイリングシステム。 World J. Psychiatry 8、97–104。