カンクサの有効成分の分析とカエルの隔離された心臓に対するその効果
Apr 03, 2023
Zaoyan 1、2、Wang Shifeng 1 * Wang Yuzhou 11 新疆パミール高原の生物資源と生態学の主要研究室、カシュガル大学生命地理科学部、カシュガル、新疆 844006、中国。 2. 新疆宜里市霍城県江蘇中学校 835200
[概要]目的:カンクサに含まれるフェニルエタノイド、多糖類、ベタインの含有量、それらの抗酸化能力、およびカエルの孤立した心臓に対するそれらの影響を研究する。 方法:フェニルエタノールグリコシドとベタインは超音波抽出によって抽出され、多糖類は熱水抽出によって抽出され、それらの含有量は紫外可視分光光度法によって測定され、それらの抗酸化能力はDP⁃PH法によって測定されました。 カエルの心臓潅流法を用いた BL{0}N 生体情報収集・分析システムを使用して、摘出されたカエルの心臓に対するカンクイの抽出物の効果が測定されました。 結果:フェニルエタノールアミン配糖体、多糖類、ベタインの含有量は23.5パーセント22%、25でした。 3%、1。 それぞれ18パーセント、DPPH 1%、93のクリアランス率は78.5パーセントでした。 42%、66。 52%。 水抽出物およびベタイン抽出物はカエルの心臓に対して抑制作用を有するが、フェニルエタノールアミン抽出物はカエルの心臓に対して有意な作用を及ぼさないが、多糖類抽出物はカエルの心臓に対して興奮作用を有する。 結論: 3 つの抽出物にはいずれも特定の抗酸化作用があり、カエルの心臓にも重大な影響を及ぼします。
【キーワード】カンクイ; フェニルエタノール配糖体; 多糖類; ベタイン; カエルの心臓灌流
カンクイ一般的にCunyunおよびTiandayunとして知られる、Orobaceae科の絶滅危惧種です。 草目に属し、高さは0 4 - 1です。 6m、ほとんどが地下。 主に内モンゴル、甘粛、新疆などに分布しており、内モンゴルに比較的多い。 カンクサは、ハロキシロンアンモデンドロンの根に寄生し、ハロキシロンアンモデンドロンから栄養を得る寄生植物です。 として知られている "砂漠高麗人参", 薬効が高く、古代中国では希少な漢方薬です。

砂漠に住むキスタンシュ
Cistanche tubulosa は新疆南部地域に自然に分布しており、Cistanche tubulosa と Cistanche desserticola では植物の形態に大きな違いがあります。 1960 年代に、カンクサが薬としてカンクの代わりに使用され始めました。 1990 年代に、カンカ チューブロサは中国薬局方 (2005 年版) に掲載され、フェニルエタノイド配糖体を多く含むカンカの品種が世界に提供されました。

フェニルエタノール配糖体はCistanche desserticolaの主な有効成分です
カンクサ・デスティコーラが含まれていますフェニルエタノイド配糖体、エキノシドおよびアクテオシド、イリドイドおよびその配糖体、リグナンおよびその配糖体、揮発性成分、およびその他の化合物(主にアルカロイド、糖など). フェニルエタノール配糖体カンクサ植物の主な有効成分の1つであり、強力な紫外線吸収能力があり、抗酸化作用、抗ウイルス作用、抗炎症作用、抗菌作用、抗腫瘍作用があります。 近年、Tu Pengfei らは、 [4]研究グループは、Cistanche 属に含まれるフェニルエタノイド配糖体がアルツハイマー病、パーキンソン病、心筋虚血の治療効果があることを研究・発見し、その作用機序を明らかにし、Cistanche の新たな臨床応用や開発・利用の根拠を提供しました。 Hou Xiaotian [5] は、フェニルエタノイド配糖体が身体に対して抗腫瘍効果を有し、腫瘍細胞のオートファジー死を誘導することによって H22- 担持マウスの皮下移植腫瘍の増殖を阻害できることを発見しました。 多糖類は多糖類とも呼ばれる高分子化合物です。 カンクサ多糖体には、免疫活動を調節し、神経を保護し、骨粗鬆症に抵抗する機能があります。 スンユンら。 [6] は、Cistanche desserticola 多糖体が肺のコラーゲンの増加と弾性コラーゲンの減少を制御し、体の抗酸化機能を調節できることを発見しました。 王暁琴ら。 [7] は、Cistanche desserticola 多糖体が細菌や真菌の増殖に対して一定の阻害効果があることを発見しました。 ベタインはアルカロイドおよび第四級アンモニウム化合物です。 カンクサのベタインには抗酸化作用があり、優れた抗腫瘍効果や老化防止効果もあります。 張静ら。 [8] は、砂糖濃度が増加すると、Cistanche desserticola のベタイン含有量が増加することを発見しました。 チェン・ウェイジュンら [9]は、新疆ウイグル自治区のカンクイのさまざまな加工品中のベタイン含有量が大きく異なることを発見した。 カンクイは海外では性機能障害や健忘症の治療薬または改善薬として使用されています。

近くのシスタンケサプリメント
カエルの心臓灌流は、心臓を観察し、心臓病の治療薬を研究するための非常に優れたモデルを提供します。 現在、中国ではカンクサに含まれるフェニルエタノールアミン配糖体、多糖類、フラボノイドなどの有効成分の含有量や抗酸化力についてさまざまな研究が行われているが、カンクサから抽出された有効成分の健康に対する効果については報告されていない。孤立したカエルの心臓。
1 材料と方法
1。 1 材料
この記事で使用したサンプルは、Cistanche 属に属する Cistanche tubulosa です。 新疆ウイグル自治区の新疆南部に生息する独特のキスタンチェ・デザートティコラで、主にタリム盆地の南端に分布し、タマリクス・チネンシスの根に寄生している。カシ県シューレ県のカシ・ミート・ユー・フルーツ株式会社が提供。
1。 2 主な薬剤と器具
エキナセチン標準、グルコース参照、ベタイン参照、D101 マクロ多孔性吸着樹脂、DP ⁃ PH (1,1-ジフェニル-2-トリニトロフェニルヒドラジン)、活性炭、レイナック塩 (レーリー塩)、アンスロンなどデュアル周波数CNC超音波洗浄器、ロータリーエバポレーター、紫外可視分光光度計、BL-420N生体信号取得・解析システム、張力トランスデューサーなど
1。 3つの方法
1。 3。 1 フェニルエタノール配糖体の抽出、精製、および抗酸化物質の定量

カンサス粉末
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呉紅雷の抽出方法 [11] を参考に、カンクサの粉末 10 g を 40 メッシュのふるいに通して秤量し、原料液比 1:16、周波数 45 kHz、出力 160 で 40 分間 2 回抽出します。 W、気温67度。 濾液を合わせて吸引濾過を行った後、ロータリーエバポレーターで蒸発させます。 酢酸エチルと水で飽和させたn-ブタノールを同一容器内で用いて抽出し、濃縮、希釈を3回繰り返します。 湿ったマクロ多孔性吸着樹脂を 0 9 g 量り、濾紙で乾燥させ、三角フラスコに入れ、希釈したサンプル溶液 8 mL をフラスコに加え、18 度の恒温水槽で 10 時間、150 回振り混ぜます。 /h.
フェニルエタノイド配糖体の標準曲線の測定: エキナセチン標準物質 10mg をメタノールに溶解し、25 mL に希釈し、よく振盪します。 それぞれ 0 5 mL、1 を吸います。 0 mL、1。 5 mL、2。 0 mL、2。 5mLを25mLメスフラスコに入れ、メタノール溶液で目盛りまで希釈します。 メタノールをブランク対照として使用し、その UV 吸収値を 334 nm の波長で測定しました。
Wu Honlei の抗酸化試験方法 [11] を参照して、まず 2 を加えます。5mg の DPPH 標準を無水エタノールに溶かし、100 mL の定容にし、よく振ってから新聞紙に包み、暗所に保管します。 精製試料溶液 2 mL を試験管に分注し、調製したLDDPPH 溶液 2 mL を滴下し、517 nm における吸光度を測定し、Ai 値として測定します。 エタノール 2 mL を試験管に分注し、精製した試料溶液 2 mL を加え、同じ波長での吸光度を Aj 値として測定します。 2 mL のLDDPPH 溶液をピペットで試験管に入れ、さらに 2 mL の無水エタノールを加え、無水エタノールをブランク対照としてこの波長での吸光度も測定します。
テストするサンプルの DPPH クリアランス率の式によると、次のようになります。
K = [1 - (Ai - Aj) / Ac] × 100% .
1。 3.2 多糖類の抽出方法と抗酸化物質の定量
Wang Xiaoqinらの抽出方法を参照してください。 [7] カンクサから多糖類を抽出する。 粉末 3g を量り、ビーカーに入れ、95% エタノールを加えて 24 時間浸し、残留物を濾過し、乾燥させます。 その後、熱湯を使用して抽出し、恒温水槽で 85 度に調整し、2 時間ずつ 2 回抽出します。 プロセス中、少量の水を継続的に追加できます。 再度濾過し、濾液を保持し、濾液を2回合わせ、蒸発させ、元の体積の1/5まで濃縮し、4倍体積の95パーセントエタノールを加え、よくかき混ぜ、冷蔵庫で24時間冷蔵する。 沈殿用遠心分離機は、遠心速度を3000r/minに設定し、時間を10分間とした。 セバージュ法によりタンパク質を除去(クロロホルム:n-ブタノール=4:1)し、抽出液と試薬を1:1の割合で分液ロートに入れ、よく振って静置し、反応するまで観察する。乳白色の沈殿がないことを確認し、上澄みを50mLに定容する。
多糖類の検量線測定: それぞれ {{0} mL、0 を吸収します。 8 mL、1。 2 mL、1。 6 mL、2。 0mL の濃度は 0 1mg/mL のグルコース溶液です。次に、ブランク対照として 2mL の蒸留水を吸引し、共栓付きチューブに入れ、蒸留水を 2 0 に加えます。 mL。 吸引 6 数本の試験管に 1mg/mL アンスロン硫酸溶液 0mL を加え、よく振り、15 分間放置し、氷水浴で 15 分間冷却します。 吸光度値は625nmで測定した。
Guo Xiaoliらの方法を使用します。 [12]、DPPH サンプルを正確に量ります。 4 三角フラスコに 5mg を入れ、無水エタノール 100mL を加えて溶解し、密封し、紙に包み、光を避けて保管します。 得られる濃度は 0 08mL/L の DPPH 溶液を調製し、できるだけ早く使用する必要があります。 サンプルを 2mL 採取し、試験管に入れます。 調製した DPPH 溶液 3 mL を加え、暗所で 30 分間保存します。 蒸留水をブランク対照として使用し、517nmでの吸光度を測定します。 上記の式を参照してください。
1。 3。 3 ベタインの抽出と抗酸化物質の測定
Wang Yingzi らの抽出方法を参照してください。 [13] カンクサからベタインを抽出する。 粉末3gを正確に量り、三角フラスコに入れます。 適量の 75% エタノールを加えて一晩放置し、密封します。 除去後、フィルター残留物を濾過して保管します。 100mLの蒸留水を加え、周波数35kHzの超音波で30分間抽出します。 濾過し、濾液を保存し、濾液を再度抽出し、濾液を濾過後の最初の濾液と合わせ、蒸発させ、適切な量まで濃縮する。 上記試料溶液 20 mL を 50 mL ビーカーに量り、1 を加えます。活性炭 0g を煮沸濾過し、濾液を取り出し、pH 1 になるまで濃塩酸に滴下します(pH 1 ではベタインが生成します)。リニアック塩と反応して沈殿を生成します)。
ベタインの標準曲線の測定: ベタイン標準物質 20 mg を正確に量り、蒸留水 10 mL を加え、よく混合します。 それぞれ 0 5 mL、1 を吸います。 0 mL、1。 5 mL、2。 0 mL、2。 標準溶液 5mL を遠心管に入れ、蒸留水 3mL 未満を加えて 3mL とし、氷水浴で 15 分間冷却し、取り出してレイノー塩溶液 5mL を加える(リイナック塩 1.5g を正確に量り、100mL を加える)蒸留水を加え、濃塩酸で Ph を 1 に調整し、室温で 45 分間撹拌し、使用前に準備します)、よく振り混ぜ、再び氷水浴に入れて 3 時間冷却します。 取り出して遠心分離し、4000r/min で遠心分離し、15 分間遠心分離し、沈殿を取り出し、70% アセトンで溶解し、25mL メスフラスコの目盛りに合わせます。 525 nm での吸光度値を測定します。
4 フェニルエタノイド配糖体の抗酸化能力の測定を参照してください。
1。 3。 孤立したカエルの心臓に対するカンクサエキスの 4 つの効果
カンクイからの水抽出物の調製:カンクンの粉末 3g を秤量し、蒸留水 45mL を加え、80 度の水浴中で 2 回抽出し、2 回の抽出物を合わせ、蒸発させ、濃縮します。 待機時は静かで暗い場所に保管してください。
Jiang Fangらの方法によると、 [14]、カエルの心臓灌流実験のためにレンの液体が準備され、ウシガエルが解剖されました。 この記事では、Rana stephensi の心臓灌流の方法を採用しています。
2 結果と分析
2.1 フェニルエタノールアミングリコシド含有量と抗酸化能力の測定
1 3によると。 フェニルエタノールアミン標準曲線を描いて各濃度の吸光度を測定し、直線回帰処理後の標準曲線をY=0 0659X - 0とした。 0201、R 2 = 0。 9983。 標準曲線の測定方法によれば、カンクサからのフェニルエタノイド配糖体抽出物の吸光度値は0 602であり、線形回帰式から求められる試料溶液濃度は約9 44μg/mLとなります。 。 含有量計算式より、含有量は28 32%となります。 1 3によると。 最終結果は、Cistanche desserticolaからのフェニルエタノールグリコシド抽出物のDPPHクリアランス率が約78.5パーセント10%であるということである。 これは、Cistanche desserticola からのフェニルエタノイド配糖体抽出物が抗酸化能力を持っていることを示しています。
2。 2 多糖類の含有量と抗酸化力
1 3によると。 多糖類の検量線を描いて各濃度の吸光度を測定し、直線回帰処理後の検量線がY=4 6469X - 0となります。 0062、R 2 = 0。 9984。 標準曲線の測定方法によると、カンクサ多糖類抽出物の吸光度は 3.5%510 であり、直線回帰式より試料溶液の濃度は約 0 76 mg / mLであることがわかります。 含有量計算式より、含有量は25 3%となります。 1 3によると。 最終結果は、キスタンケ デスティコラ多糖類抽出物の DPPH クリアランス率が約 93.5 パーセント 42% であるということです。 これは、カンクサからの多糖類抽出物が抗酸化能力を持っていることを示しています。
2。 3 ベタイン含有量と抗酸化力
1 3によると。 ベタインの検量線を描き、各濃度の吸光度を測定し、直線回帰処理後の検量線をY=1 1653X - 0とします。 0138、R 2 = 0。 9894。 標準曲線の測定方法によると、カンクイのベタイン抽出物の吸光度値は{{7}であり、線形回帰式より、試料溶液の濃度は約{{8}mg/mLであることがわかります。 含有量計算式より、含有量は1 18%となります。 1 3によると。 最終的に、カンクサからの抽出物のDPPHクリアランス率は約66.5パーセント52%であると結論付けられました。 これは、カンクサのベタイン抽出物が抗酸化能力を持っていることを示しています。
2。 孤立したカエルの心臓に対するカンクサエキスの 4 つの効果
摘出したカエルの心臓にカンクイの抽出物を添加し、張力トランスデューサーとBL-420N生体信号取得システムを使用してカエルの心拍曲線を分析しました。 カンクサ水抽出物を添加した後の心拍曲線を図 1 に示します。カエルの心筋収縮性は 15% 減少し、心拍数は 33% 減少しました。これは、カンクサ水抽出物が有意な効果を示していることを示しています。カエルの心臓に対する抑制効果。 カンクサからのフェニルエタノイド抽出物の添加後の心拍曲線の変化を図 2 に示しますが、カエルの心臓には大きな変化はなく、カンクからのフェニルエタノイド抽出物がカエルの心臓に対して抑制効果がないことを示しています。 カンクサの多糖類抽出物を添加した後の心拍曲線の変化を図 3 に示します。カエルの心筋収縮性は 20% 増加しましたが、心拍数は変化しませんでした。これは、カンクサの多糖類抽出物が有意な効果をもたらしたことを示しています。カエルの心臓に対する興奮効果。 カンクサからのベタイン抽出物を添加した後の心拍曲線の変化を図 4 に示します。カエルの心筋収縮性は 75% 減少し、心拍数が低下しました。これは、カンクイのベタイン抽出物がカエルの心筋収縮に重大な抑制効果を及ぼしたことを示しています。心臓。

図 1 摘出されたカエルの心臓に対するカンクサ デスティコーラ水性抽出物の効果

図 2 摘出したカエルの心臓に対するフェニルエタノールアミン抽出物の効果

図 3 分離されたカエルの心臓に対する多糖類抽出物の効果

図 4 孤立したカエルの心臓に対するベタイン抽出物の効果
3 議論と結論
3。 1 カンクサの各種有効成分含有量に関する研究
現在、カンクサのフェニルエタノイドの定量は、比色分析、紫外分光光度法、RP-HPLC(逆相高速液体クロマトグラフィー)などの方法で行われるのが一般的です。 Wu Honlei [11] は、UV 分光光度法を使用して、Cistanche desserticola のフェニルエタノイド配糖体の含有量が 20.5% 01% であることを測定しました。 この論文では、この方法が使用され、いくつかの調整が加えられました。 抽出温度は67度で,Cistanche deserticola中のフェニルエタノールアミングリコシド含有量は28.5%32%と測定された。 含有量の違いの理由は、産地の違い、または実験による抽出温度の違いです。 紫外分光測光法はシンプル、正確、高速に操作できるため、普及させる価値があります。 現在、カンクサの多糖類含有量は、フェノール硫酸法、アントロン硫酸法、DNS法(ジニトロサリチル酸比色法)により測定されるのが一般的である。 リー・ヤンら。 [15] はフェノール硫酸法を使用して、Cistanche desserticola の多糖類含有量を 13.5 パーセント 22% と測定しました。 Shengwei et al.によると、Cistanche desserticola の多糖類の含有量は、硫酸アントロン法によって 5.5% ~ 76% であると測定されました。 [17] は、硫酸アンスロン法によりカンクイの多糖類の含有量を測定し、69.5 パーセント 64% でした。 この論文では、硫酸アントロン法を使用して含有量を決定し、測定された含有量は25.5パーセント30%でした。 他の学者の研究と比較した誤りの理由は、原材料の起源または実験方法の違いである可能性があります。 硫酸アンスロン法とフェノール硫酸法では特徴が異なります。 フェノール硫酸法ではフェノールが酸化しやすく、硫酸アントロン法では溶液が不安定です。 近年、カンクサのベタイン含量は紫外分光光度法により測定することが一般的となっている。 張秀雲ら。 [18] は、この方法を使用して、Cistanche desserticola の平均ベタイン含有量を測定しました。これは 4.5 パーセントです。同じ方法を使用して、Cistanche desserticola のベタイン含有量を測定し、それは 1.2 パーセント 18%でした。 両者の含有量の違いは、産地や抽出方法の違いによるものと考えられます。 紫外分光測光法は便利かつ迅速であり、広範な普及促進に適しています。
3。 2 カンクサの抗酸化能力の測定

カンクサの利点—抗酸化作用
酸化防止剤物質はスーパーオキシドジスムターゼなどの酵素や抗酸化物質と協力して複合抗酸化システムを形成し、体の抗酸化能力を高め、損傷した DNA を修復し、体内の遺伝子の正常な発現を可能にします。 抗酸化は人間の皮膚の老化を遅らせるだけでなく、病気を予防することもできます。 統計によると、一般的な癌、糖尿病、アルツハイマー病など、ほとんどの悪性疾患はフリーラジカルに関連しています。 現在、抗酸化活性を測定する方法には、一般的にピロガロール法、鉄イオン法、DPPH 法が含まれます。 この論文では、DPPH 法を使用して、Cistanche desserticola のフェニルエタノイド配糖体、多糖類、およびベタインの抗酸化活性を測定します。 Wu Honlei [11] は、DPPH 法を使用して、カンクサのフェニルエタノイド配糖体の抗酸化活性を測定し、測定値は 76.5 パーセントでした。同じ方法を使用した場合、フェニルエタノイド配糖体の抗酸化活性は 78.2 パーセント 10 パーセントでした。その理由は、なぜなら、誤差は新疆北部と南部の気候と光によるものかもしれないからです。 Guo Qiaoliら。 [12] は、DPPH 法を使用して蘭州のカンクサからの多糖類の抗酸化活性を測定し、測定値は 91.5% という高値でした。この方法は、カンザス チューブローサからの多糖類の抗酸化活性の測定にも使用されました。 93.2パーセント42%。 違いの理由としては、カンクサの種類や生育環境の違いが考えられます。 ドン・シャオユアンら [19] は、DPPH 法を使用して韃靼ソバ酒中のベタインの抗酸化活性を測定し、その活性は 75 パーセントでした。 このテキストでは、同じ方法を使用してカンクサのベタインの抗酸化活性を測定し、その値は 66 52 パーセントでした。この 2 つのベタインの抗酸化活性の違いは、材料または抽出方法の違いによる可能性があります。 キスタンケ デスティコーラでは、フェニルエタノイド配糖体、多糖類、ベタインはすべて抗酸化活性を持っており、多糖類の抗酸化活性が最も高く、次にフェニルエタノイド配糖体、最後にベタインとなります。 3。 分離されたカエルの心臓に対するカンクサ抽出物の効果 カンクサの多糖類はウシガエルの心臓に対して興奮作用を持ちますが、水抽出物とベタインはそれを抑制する作用がありますが、フェニルエタノイドには顕著な影響はありません。 Lan Tianwei [20] は、フェニルエタノイド配糖体が心臓を保護する効果があることを発見しました。 [21] アキランテス二座多糖類の濃度が 500 μ G/mL を超えるとウシガエルの心臓を興奮させる可能性があることを発見しました。 この実験では、単離されたカエルの心臓に対するカンクサ多糖体の興奮効果は、心筋細胞膜上のカンクサ多糖体のカルシウムチャネルの調節に関連している可能性があります。

カンクサの主な化学成分
水抽出物とベタインは、孤立したカエルの心臓に対して抑制効果があります。 水抽出物を添加した後の阻害は、それに含まれる総フラボノイドの数が少ないことが原因である可能性がありますが、フラボノイドに含まれるケルセチンはリポキシゲナーゼを改善することで移植心臓の収縮性を阻害する可能性があり、あるいは心筋膜上の Ca2+ チャネルの活性に影響を与える可能性があります。 Ca2プラスの流入を減少させる。 心拍数の低下は、洞房結節の自律性に影響を与えることによって引き起こされる可能性がありますが、ベタイン添加後の抑制は、Ca2+ 流入の阻害と心筋力の急速な収縮停止につながることによって引き起こされる可能性があります。または、心拍数の変化によって引き起こされる可能性があります。ベタインによる細胞透過性。
この研究では、カンクサ抽出物由来のフェニルエタノイド配糖体、多糖類、およびベタインがある程度の抗酸化活性を有し、その中で多糖類が最も高い抗酸化活性を有し、次いでフェニルエタノイド配糖体であり、ベタインが最後であることが判明した。 カンクサの水性抽出物は、カエルの心臓の摘出に対して抑制効果を示しますが、フェニルエタノールアミンはカエルの心臓の摘出に対して有意な効果を示しません。 多糖類は孤立したカエルの心臓に対して興奮作用を持ちますが、ベタインは孤立したカエルの心臓に対して抑制効果を持ちます。 希少な薬用原料として、カンクイは独自の薬理学的活性と価値を持っています。 さらなる研究により、重要な発見が得られる可能性があります。
参照
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