ウロリチン A のウシ卵母細胞に対する in vitro でのアンチエイジング効果 2

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2.8.統計分析

胚生産および品質セッションからのデータは、バイナリ分布とロジットをリンク関数として使用して、SAS (Statistical Analysis Systems、SAS Inst., Inc.、Cary、NC、USA) の Proc Glimmix を使用して分析されました。 一般化された線形混合モデルには、治療 (UA の投与量、加齢効果、女性の年齢、およびそれらの相互作用) が固定効果として含まれ、ランダム効果として複製されます。 さらに、各処理の平均を計算し、PDIFF 検定を使用してグループ間の比較を行いました。 JC-1 データ、mRNA 転写レベル、および mt-DNA コピー数は、処理を含むモデル (UA 効果、老化効果、および/または女性の年齢、およびそれらの相互作用) を含む SAS の Proc Mixed を使用して分析されました。固定効果として セッションはランダム効果と見なされました。 染色体構成のデータは、正確なフィッシャー検定を使用して、2 x 2 分割表でグループ間で比較されました。 結果の分析は、p の場合に統計的に有意であると見なされました。<>

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3. 結果

3.1.以前のアッセイ - 用量反応研究

成熟培地を補充した UA の用量反応研究中に観察された卵母細胞の成熟状態を図 1に示します。この補充は、卵母細胞の核成熟段階に大きな影響を与えました。 50 UA グループ (38.9±0.5%) は、コントロール (10.8±{{ 15}}.5 パーセント ,P=0.03) および 10 UA(0.0±0.{{ 45}} パーセント ,p=0.0006) グループ。このフェーズでは、25 UA (17.2±0.5 パーセント ,p=0.05) グループでより高い率10 UA グループも特定されました。 さらに、50 UA グループと 1 UA の間に傾向が見られました (14.3±2.0 パーセント、p=0.08)。最高用量も有害な影響を示し、中期 II で分類される卵母細胞の数を減らしました。 (MII) ステージ (50 UA、44.4 ± 2.0 パーセント) を対照と比較した場合 (86.5±7.0 パーセント、p=0.003)、1 UA(82.1±2.5 パーセント、p{{ 53}}.01)、10 UA (89.3±6.5 パーセント、p=0.002) および 25UA (82.8±9.0 パーセント、p=0.01) グループ。卵母細胞の成熟段階。 GV および CCl の成熟段階は、これらのカテゴリで評価された卵母細胞がないため、図 1 には示されていません。

用量反応試験では、卵割率および孵化胚率に対するUA濃度の有意な影響は示されませんでした。 ただし、7 日目に生産された胚の率は、さまざまな濃度の UA の影響を受けました。 50 UA グループ (7.2±2.7 パーセント) は、1 UA (28.5±4.8 パーセント、p=0.004)、10 UA (20.4±4.0 パーセント) と比較して、7 日目の胚の割合が低かった、p=0.03) および 25 UA (18.5±4.7 パーセント、p=0.05) グループ。 コントロールと 50 UA グループの間に有意差は見られませんでしたが、傾向 (p=0.06) が確認されました。 さらに、コントロールと比較して 1 UA 用量補充後の 7 日目の胚発生率 (p =0.07) は高くなる傾向があります。 さらに、1 UA グループは、コントロール (34.6 パーセント、n=10) および 10 UA (26.8パーセント ,n=10)。より高い用量で得られたグレード 1 の胚の数は少なかった: 25UA 群 (15.4 パーセント,n=4) および 50UA (35.4 パーセント,n=3)。 上記の結果に基づいて、1 uM UA が選択され、次の研究に進みました。

3.2. 実験 1——加齢および生理学的に成熟した卵母細胞の卵母細胞の質と発生能

3.2.1.核成熟

思春期前および成人の女性から収集された老化した生理学的に成熟した卵母細胞の染色体成熟状態に対するUA補給の影響を調査しました。 UA効果とは無関係に、卵母細胞の老化と女性の年齢は、成熟に重大な有害な影響を引き起こしました。 コントロール卵母細胞では、老化した卵母細胞と比較して、MII 期の割合が高いことが確認されました (22 時間=93.2±5.4% vs.30時間=77.6±4.1%、p {{11 }}.02）。 さらに、AI/TI 期 (22h=3.4±0.5% 対 30h =17.9±0.6 パーセント、p=0.01 および思春期前=21.1±1.1 パーセント対成人=6.8±0.7 パーセントp =0.03). さらに、IVM の 30 時間後には、22 時間後と比較してより多くの変性卵母細胞が特定されました (7.1 ± 1.39 パーセント対 4.1 ± 0.89 パーセント、p =0.02)。 . 女性の年齢と UA の補給は、変性した卵母細胞の数を妨げませんでした (p 0.05)。

インビトロ老化と成熟培地への UA 補給の両方が、思春期前および成人女性の卵母細胞の染色体構成に有意な影響を与えました (p<0.05, figure="" 2).="" on="" the="" al/ti="" phase="" of="" the="" maturation="" status,="" higher="" rates="" of="" oocytes="" were="" found="" in="" this="" stage="" in="" the="" control="" aged="" 30="" h="" prepubertal="" group="" (46.7±0.5%)="" when="" compared="" to="" control="" prepubertal="" (0.0±0.0%,p="0.05)" and="" ua="" aged="" 30h="" prepubertal="" (0.0="" ±0.0%,p="0.02),and" both="" adult="" control="" (5.6±0.5%,p="0.01" and="" ua="" adult,0.0±0.0%,="" p="0.0002)and" control="" aged="" 30h="" adult="" (9.1±10%,p="0.02)groups." a="" trend="" was="" also="" identified="" between="" ua="" adults="" and="" ua="" aged="" 30="" h="" adult="" (p="">

完全な核成熟に対応する MII 期に関しても、グループ間で有意差が見られました (図 2)。 MII 段階の卵母細胞の割合が、思春期前のコントロール (10{{2{ {27}}}}.0±1.5%、p=0.05)、思春期前30時間のUA(100.0±2.5%、p=0.02)およびUA成人(100.0) ±10.5パーセント、p=0.0002)および30歳の対照群(86.0±5.5パーセント p=0.056)群。 さらに、UAの成人グループは、30時間の成人の対照群（86. 0±5.5 パーセント、p=0.08) および対照成人 (83.3±4.5 パーセント、p=0.057)。

卵母細胞の成熟の残りの段階の間に違いは観察されませんでした。フラボノイド、要約すると、UAの補給は、特に思春期前の女性で、老化プロセスにさらされた卵母細胞の in vitro 成熟の進行を改善しました. したがって、UAの重要なアンチエイジング効果が特定されました。

3.2.2.ミトコンドリア膜電位

女性の高齢卵母細胞におけるミトコンドリア機能障害の関与と、UAおよび母体年齢の影響を分析するために、ミトコンドリア膜電位（MMP）をさまざまなグループの卵母細胞で評価しました。

ニシンはアンチエイジングできる

女性の年齢と UA の影響とは無関係に、卵母細胞の老化は、測定された赤と緑の蛍光の比として評価される MMP に重大な悪影響を及ぼしました (22 時間比 =0.54±1.8% vs.30hratio{{6} }.47±1.5 パーセント、p=0.002)。

女性の年齢、加齢効果、および成熟期の UA の補給の組み合わせ (p{{0}.{{10}}07) は、MMP に大きく影響しました。 (図 3)。 図 3 に見られるように、卵母細胞が 22 時間成熟した UA 思春期前 (比 =0.55±0.04) および UA 成体 (比 =0.63±0.04) グループでより高い MMP 率が得られました。 、30 時間の成人の対照 (比=0.45±0.04、p=0.04 および p=0.0007) および 30 時間の成人の UA (比{ {23}}.45±0.03、p=0.03 および p=0.0003、それぞれ) グループ。ヘスペリジンの用途さらに、コントロールの成体と比較して、UA 成体群では、MMP の有意な増加を示す JC{{0}} 凝集体/モノマー比の有意な増加が観察されました (比 =0.47 ±0.04,p =0.0031),対照思春期前(比=0.52±0.04, p=0. 03)、30 時間の成人のコントロール (比=0.48±0.03、p=0.003) および 30 時間の成人の UA (比=0.47±0.03、p{{25傾向は、思春期前の UA と思春期前 30 時間の UA の間でも確認されました (p=0.07)。

要約すると、UAは生理学的成熟中にMMPを改善しましたが、思春期前および成体卵母細胞の両方で老化の悪影響を克服することはできませんでした.

3.2.3.胚発生

胚発生の可能性は、成熟期に思春期前および成人女性の COC に適用されるさまざまな処理 (加齢および UA 補充) で得られた、胸の谷間、D7、および孵化した胚率によって評価されました。 女性の年齢と UA の影響とは無関係に、卵母細胞の老化は卵割に重大な悪影響を及ぼしました (22h=79.5±1.7% 対 30h=68.6±2.0% 、 p=0.0001)およびD7胚率(22時間=18.6±1.9%)

vs.30h=12.1±1.7% ,p=0.01).また、UA補給はD7胚率を改善することも示された(対照{ {8}}.1±1.5 パーセント対 UA=20.0±2.0 パーセント、p=0.0009)。

女性の年齢、老化効果、および成熟期の UA の補給の組み合わせ (p {{0}}.{{30}}1) は、胚発生、すなわち卵割とD7胚率（表2）.成体卵母細胞がUA補給の有無にかかわらず22時間成熟した場合、より高い卵割率が達成された（対照成体=1.4±3.2パーセントおよびUA成体=80. 9±3.4 パーセント) および UA 補給により 22 時間成熟した思春期前の卵母細胞 (UA 思春期前=80.6±3.2 パーセント) と比較して、3 歳の UA (66.5±4.2 パーセント,p 未満)思春期前 30 時間のコントロール (66.9±3.9 パーセント、p 0.02 以下) および思春期前 30 時間の UA (67.2±4.0 パーセント、p 0.01 以下) グループ (表 2)。 傾向 (p=0.09) は、コントロールの成人グループと 30 時間のコントロールの成人グループの間でも確認されました。

Another parameter that was significantly (p=0.01) influenced by the combination of the female age, the supplementation with UA, and COCs aging was the rate of embryos produced at day 7(Table 2). Exceptions were made for the UA prepubertal and UA 30 h prepubertal groups, the UA adult group presented the highest rates of the embryo at day7 (26.8±4.3%,p≤0.05). Moreover, lower D7 embryo rates were produced from aged oocytes from both adult and prepubertal females without the supplementation of UA (control aged 30hprepubertal=7.7±2.6% and control aged 30h adult=7.7±2.6%)compared to those that were supplemented with UA, respectively (UA aged 30 h prepubertal=18.9±4.0%,p=0.03 and UA aged 30 h adult=15.9±4.0%,p=0.09). The supplementation of UA to the maturation medium did not significantly (p>0.05) グレード 1、2、および 3 の生産された胚の品質率に影響を与えることも、老化効果または研究されたすべての効果を一緒にすることもありませんでした (表 3)。 ただし、UA が 22 時間成熟した卵母細胞に補充されたときに生成された優れた/良質の胚の数は 2 倍になりました (表 3)。

3.3.実験2

3.3.1.遺伝子発現レベル

Nrf2 シグナル伝達経路に対する UA 効果と母体年齢の影響を調べるために、思春期前および成牛の GC 培養における NFE2L2 および NQO1 遺伝子発現レベルの分析を RT-qPCR によって評価しました。 研究された他の要因とは無関係に、女性の年齢は NFE2L2 遺伝子発現に有意な影響を及ぼし、思春期前の女性の GC における NFE2L2 転写産物のレベルが高いことに反映されました (思春期前の mRNA レベル =0.00015 ±0.0012% 対成人=0.00011±0.0012,p=0.048)。

The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly(p>0.05) は、NFE2L2、NQO1、および mt-ND5 遺伝子の遺伝子発現レベルに影響を与えます。 図4は、UA処理された思春期前および成人のGCの両方で、それぞれのコントロールで正規化されたこれらの遺伝子の発現レベルを表しています。

3.3.2.mt-DNA コピー数

Analysis of mt-ND5 DNA content in GC culture from prepubertal and adult cows was assessed by qPCR. The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly (p>0.05) mt-ND5 遺伝子のコピー数に影響します。ロスト・エンパイア・シスタンシェ図 5 は、UA 処理された思春期前および成人の GC の両方で、それぞれのコントロールで正規化されたこの遺伝子のコピー数を表します。

4。議論

過去数十年にわたり、家畜への ART 適用に対する需要の増加が観察されています [8,46,47]。 さらに、母親の高齢化に伴う出産の遅れが、現在、女性が ART に頼る主な要因となっています [5]。 受胎の成功には卵母細胞の質が重要であり、女性の配偶子の老化は ART の成功にとって大きな懸念事項です。 この分野での進歩はますます進んでいますが、応用された技術はまだ生殖能力を回復できておらず、生物時計を元に戻しています[7]。 本研究では、牛の卵母細胞における加齢に伴う不妊症の研究のためのモデルが開発されました。 ヒトの妊娠、卵胞および内分泌事象との類似性により[48,49]、このモデルは、ヒトの卵母細胞でのこれらの研究を妨げる倫理的および物理的な制限を回避して、ヒトの研究にも役立つ可能性があります。 女性の配偶子を老化させるための私たちのモデルは、現在世界で最も重要な課題の 1 つである生殖の老化と不妊症に関連するさまざまな問題の研究に非常に効率的で適していることが証明されました。 さらに、現在の研究で研究されているように、女性の配偶子の老化によって引き起こされる不妊症を予防する可能性を秘めた、今後の新しい抗酸化療法の探索も同様に最も重要です.

提示された結果は、ART の結果における UA の有益な効果を初めて報告しました。 UA は、ミトファジーと細胞寿命の延長を誘導することにより、加齢に伴う機能不全のミトコンドリアの蓄積を防ぐことができる食物代謝産物です [28]。 UAはこれまでウシの生殖でテストされたことがないため、その抗癌、抗炎症、およびアンチエイジング効果を示すさまざまな細胞株にうまく適用された用量が使用されました[28、35、39].私たちの研究では、以前の用量-応答アッセイが実施され、1 uM UA の濃度が最も有望であることが明確に特定されました。 さらに、より高い用量、特に 50 uM UA 用量で有害な影響が示され、MII までの核成熟の進行が損なわれました。 この効果は、胚発生障害に反映されました。 したがって、Liu と同僚 (2019) は、50 uM の UA 濃度で、細胞生存率とヒト老化皮膚線維芽細胞の増殖が大幅に減少することに気付きました。 彼らは、高用量の UA が細胞生存率の低下につながり、G/M 細胞周期で停止した細胞の数を増加させると言及した [35]。 逆に、他の用量と比較した場合、成熟培地への１μＭ ＵＡの補充後７日目に、より高い割合の胚が産生された。 女性の生殖におけるUAの作用の潜在的なメカニズムをさらに調査するために、卵母細胞の老化中の研究と、卵母細胞ドナーとして異なる年齢の女性を使用する研究が実施されました。 Yamamoto と共同研究者 (2010) は、年老いた牛の受精率の加齢に伴う低下を報告しており、これらの卵母細胞は成熟中に最初の減数分裂を再開する傾向があり、多くの場合、採卵時にすでに減数分裂成熟を開始していたことを示しています [50]。これらのデータは、卵母細胞の能力が低いため、年長の雌牛の卵母細胞は若い雌の卵母細胞よりも核成熟の進行が速く、MII 期に早く到達したことを示唆しています [51]。 したがって、私たちの研究は、女性ドナーの年齢と卵母細胞の老化のプロセスが、成熟の進行中の卵母細胞の染色体構成に大きく影響することを明らかにしています。 実際、思春期前のウシの卵母細胞は、Al/TI 期などの遅れた段階の割合が高く (思春期前=21.1% 対成体 =6.8%)、核分裂の進行が遅いことが明らかになりました。 Soto-Heras と同僚 (2018) によって提案されたように、卵母細胞の能力が低いことが原因である可能性があります。 老化した卵母細胞はまた、生理学的期間 (93.2%) と比較して、30 時間の間に MII 期に達した卵母細胞の割合が低い (7.6%) ことを示しています。 さらに、生理的成熟過程におけるUA治療のプラスの効果と、思春期前および成人女性の両方におけるアンチエイジング効果も確認されています。

私たちの調査結果と一致して、in oitro成熟中のメラトニン補給がウシCOCの減数分裂再開を刺激する可能性があるのに対し、ホルモンなしで培養された対照卵母細胞は減数分裂再開速度が遅いことが研究で実証されています[52]。 それどころか、ケルセチン、ビタミンC、レスベラトロールなどの他の抗酸化剤の補給は、ROSレベルの低下または抗酸化酵素レベルの増加が観察された場合でも、核成熟率に影響を与えませんでした[53,54].微粉化精製フラボノイド画分 1000mg使用逆に、私たちの結果は、UAが成熟率を改善し、より低い能力を示す高齢の成人と思春期前の女性の両方の老化の影響から卵母細胞を救うことができることを示しています。

卵母細胞の質に影響を与える受精率の低下の主な原因の 1 つは、ミトコンドリア機能に関連しており、母体の加齢や排卵後の老化によって損なわれる [21,55]。 MMP はさまざまなモデルで広く研究されており、排卵後の老化した配偶子と母体の老化の両方がミトコンドリア機能の喪失を誘発することが明らかにされています [56]。 その結果、MMP の喪失は、卵母細胞と胚の発生に悪影響を及ぼしました [26,57]。 これらの調査結果によると、私たちの研究では、思春期前と成牛の両方の老齢卵母細胞でMMP比の低下が見られました。 さらに、培養液へのUA補給は、22時間成熟した思春期前および成体卵母細胞のMMPの増加を誘発し、より高い卵割率で反響しました。 これらのデータは、ウシ卵母細胞にメラトニンを 22 時間補充したときに MMP の増強を観察した Liang と共同研究者 (2017) によって発見された結果と一致しています [26]。 ただし、UAを補充した老化した卵母細胞のMMPの減少も確認しました。これは、UAがMMPの老化の悪影響を逆転させることができない可能性があることを示しています。 老化した卵母細胞に抗酸化化合物を補給した後のMMPに関して、矛盾した結果が観察されています。 実際、メラトニン [26] とラミナリン [21] を補給した後に卵母細胞の MMP レベルが上昇したことを報告した著者も何人かいますが、L-カルニチン [58] とメラトニン [38] で処理した老化した卵母細胞の MMP の減少を観察した著者もいます。 さらに、Ryu と同僚 (2016) は、UA で培養したマウス筋芽細胞で MMP の減少を示しました [28]。 私たちの結果に関しては、卵母細胞ミトコンドリアにおけるUAの作用機序の知識を深め、老化および生理学的に成熟した卵母細胞に対する識別された異なる効果を説明するために、さらなる研究に取り組む必要があります。

卵母細胞の固有の品質は、その後の胚発生の主な決定要因として広く報告されています。 蓄積された証拠により、いくつかの細胞および分子の異常が、in vitroでの成熟期間の延長とin oivoでの排卵後老化の間に発生することが明らかになった[57]。 さらに、これらの異常は、卵母細胞の質に関連する影響を及ぼし、胚の生産に影響を与える可能性があります[52]。 UAが老化防止化合物として作用し、卵母細胞の質を改善し、卵母細胞の老化を遅らせることができることを実証するために、体外受精後の老化した卵母細胞の発達能力を調査しました。 私たちの研究では、卵割と7日目の胚生産率に対する配偶子老化の有意な（p 0.01以下の）有害な影響が観察されました。 したがって、何人かの著者は、年配の女性の生殖能力は年齢に関連して低下しており、これは受胎率の低下と胚の質の低下に反映されていると言及している [44,55]。 一方、老化した卵母細胞を救うために他の抗酸化分子をテストした以前の研究では、牛 [58]、豚 [ 38] とマウス [6]。 例えば、L-カルニチンはウシ熟成卵母細胞でテストされ、得られた卵割率に有意差は見られませんでした。 しかし、L-カルニチンを含まない老化した卵母細胞と比較して、胚盤胞段階に発達する接合子の割合の有意な増加が確認されました [59] 私たちの結果はまた、生理学的成熟中のUA補給が思春期前および成人女性の卵割率を改善したことを示しています. UA年齢の卵母細胞の卵割率は、対照年齢の卵母細胞と有意差はありませんでしたが、思春期前および成人女性の両方からのUA年齢の卵母細胞では、より高いD7胚率が確認されました。 これらの結果は、異なる細胞培養で以前に同定された UA のアンチエイジング効果 [28,35] が卵母細胞と胚に有効であることを指摘しました。 卵母細胞の老化は、胚の発達を損なう多因子プロセスであり、老化した卵母細胞の発達能力を回復することは、本研究で達成された重要な目的です。

さらに、加齢に伴う胚の質の低下におけるUAの予防的役割も評価しました。 この研究では、胚の品質率に有意差は見られませんでしたが、UAを補充した卵母細胞は、未処理のものと比較して、移植可能な胚の数を増加させました. 以前の研究では、L-カルニチン治療がROSレベルの低下とグルタチオンおよび他の抗酸化酵素のレベルの上昇を通じて、老化したウシ卵母細胞から発生した胚の質を改善できることが報告された[58]. これらの結果と私たちの結果の違いは、胚の品質を評価するために適用されるさまざまな手法による可能性があります。 胚の品質の形態学的評価は、観察者の経験に依存する主観的な方法のままです。 将来的には、胚の品質を正確に評価するために、他の技術を使用してより多くの研究に取り組む必要があります。

酸化ストレスが加齢に伴う生殖能力の低下に重要な役割を果たしていることは広く知られています。 酸化ストレスは、卵母細胞の成熟効率を低下させ、卵母細胞の品質を低下させ、それによってその後の胚発生を損なう主な原因の 1 つです [11]。 配偶子と体細胞の間の細胞間コミュニケーションは、高品質の卵母細胞の適切な発生に不可欠です。 老化した卵巣の微小環境の変化が報告されています。たとえば、抗酸化酵素活性の低下が ROS 除去効率の低下につながります。オテフラボノイドさらに、若い女性と年配の女性のGCは、抗酸化活性と母親の年齢に関連する遺伝子の発現が異なることが示されました[2,13]。 したがって、卵母細胞を老化から救い、不妊の問題を克服するために、酸化ストレスを管理するメカニズムを発見したことは非常に重要です。 Nrf2-Keapl 経路は、酸化ストレスの有害な影響に対処し、抗酸化特性を発揮する能力があるため、広く研究されています [60] ウシ GC における Nrf2 シグナル伝達経路の活性化をさらに研究するために、 NFE2L2 およびその下流の抗酸化物質 (NQO1) の mRNA 発現レベル。 私たちの結果は、年齢とともに減少する NFE2L2 転写産物のレベルに対する女性の年齢の大きな影響を示しました。 実際、大人と比較した場合、思春期前の牛ではより高いmRNA発現レベルが観察されました。 これは、妊娠中の若いマウスと22歳から49歳の女性の卵巣組織でNrf2タンパク質とmRNAの高度に発現したレベルを報告した以前の研究と一致していますが、高齢のマウスと女性ではより低い発現が見られました。 Nrf2 の発現低下は、年配の女性の生殖能力の低下に関与している可能性があり、その制御は卵巣の老化を遅らせる上で重要な意味を持つ可能性があることが示唆されました [15,61]。 さらに、秋野ら (2019) は、フマル酸ジメチルの投与による Nrf2-Keapl 経路の活性化が ROS レベルを低下させ、遅発性不妊症につながる可能性があることを示しました [18]。 老化したヒト皮膚線維芽細胞におけるROSの減少におけるUAの効果に関する同様の結果が報告されました。 これらの細胞を UA で処理すると、SOD1、NQ01、GCLC、HMOX1 などの Nrf2 標的遺伝子の mRNA 発現が大幅に増加することが報告されました。 [35].私たちの研究では、GC における NFE2L2 および NQO1 遺伝子の発現レベルは、UA 補給によって有意な影響を受けないことが観察されました。 ただし、ROSの減少とその後の産生された胚盤胞の改善、および老化した卵母細胞での前述の遺伝子のmRNA発現に対するUAの影響を確認するために、さらなる研究に取り組む必要があります。

ミトコンドリア DNA (mt-DNA) [25,57] への損傷に加えて、ミトコンドリア遺伝子発現の破壊も、加齢に伴うミトコンドリア機能障害の一因となることが示されています。 Zhang と同僚 (2019) は、OXPHOS に関与するいくつかの遺伝子、すなわち mt-ND2、mt-ND3、mt-ND4、mt-ND4L、および mt-ND5 が、老齢マウスの卵母細胞の GV 段階で有意にダウンレギュレートされることを報告しました。若いマウスのものと比較して[62]。 私たちの研究では、思春期前の牛と成牛から回収されたGCの間で、mt-ND5 mRNA発現に有意差は見られませんでした。 さらに、GC 中の mt-DNA の含有量は卵母細胞の質と胚の発生と正の相関があるため、mt-DNA のコピー数も評価しました [63,64]。 私たちの研究では、思春期前の牛と成牛のGCのmt-DNAコピー数の間に有意差は確認されませんでしたが、UAで処理した場合、未処理のグループと比較して、胚盤胞段階に発達した卵母細胞の数が多いことが観察されました。 さらに、リュウと共同研究者 (2016) は、呼吸複合体からの mt-DNA 含有量とタンパク質レベルが、UA を補充したマウス筋芽細胞で変化しなかったことを報告しました [28]。 女性の生殖能力の改善におけるUAの作用機序を明らかにするために、さらなる研究を実施する必要があります。

5。結論

この研究で得られた結果は、卵母細胞の老化がその発達能力に及ぼす有害な影響を確認しました。 さらに、女性の配偶子を老化させるためのモデルは、生殖の老化と結果として生じる受精障害に関連するさまざまな問題を研究するのに非常に効率的で有用であることが証明されました。 さらに、老化した卵母細胞の成熟プロセス中のUA補給は、成熟率を改善し、胚を生産しました. したがって、老化した配偶子の救出におけるUAの老化防止効果が初めて確認され、胚盤胞の発達が改善され、レシピエントの雌に移植する胚の数が増加しました。 生理学的成熟、MMP、および胚発生に対するUAのプラスの効果も確認されました。 結論として、UA治療は、配偶子の老化を予防または遅延させ、ARTにおけるその後の胚盤胞形成および生殖能力の結果を改善するための新しい治療アプローチを提供します。

この記事は、Animals 2021 年 11 月 2048 号から抜粋したものです。