Pistaciaatlanticasubsp。の抗メラニン形成および抗チロシナーゼ特性 B16F10マウスメラノーマ細胞のmutica抽出物

連絡先：ali.ma@wecistanche.com

Samira Eghbali-Feriz1、Akram Taleghani2、Hadi Al-Najjar3、Seyed Ahmad Emami1、Homa Rahimi4、Javad Asili1、Samira Hasanzadeh1、Zahra Tayarani-Najaran5、*

概要：Pistacia atlantica（P. atlantica）亜種 ムティカは伝統医学で使用されており、その薬効があることで有名です。 この研究の目的は、メタノール（MeOH）、n-ヘキサン、ジクロロメタン（CH2Cl2）、n-ブタノール（BuOH）、酢酸エチル（EtOAc）、水抽出物、およびP.atlanticasubsp。の精油の効果を評価することでした。 B16F10メラノーマ細胞株におけるメラニン合成と酸化ストレスに関するミューティカ。 植物のさまざまな抽出物の濃度を増加させて処理した後のB16F10細胞の生存率（0。2-200 µg / mL）を、レサズリンを使用して測定しました。 エッセンシャルオイルの組成は、ガスクロマトグラフィー-質量分析（GC-MS）分析と、メラニン、キノコの合成に対する阻害効果によって特定されました。チロシナーゼ活性、細胞チロシナーゼ、および酸化ストレスは、比色法および蛍光法によって評価されました。 データは、濃度0。2-200 µg / mLの抽出物が黒色腫細胞に対して有意な毒性を示さなかったことを示しましたが、200 µg/mLの精油の濃度は細胞毒性効果がありました。 Pistaciaatlanticasubsp。 ムティカはキノコを阻害する可能性がありますチロシナーゼアクティビティ。 また、B16F10細胞のメラニンの量は減少しました。 さらに、P。atlanticasubsp。 メラノーマ細胞の活性酸素種の量を減少させるミューティカ抽出物は、注目に値することを明らかにしました酸化防止剤アクティビティ。 さらに、エッセンシャルオイルのすべての濃度は、この研究では有意な影響を及ぼしませんでした。 Theメラニン形成抑制性および酸化防止剤P.アトランティカ亜種の影響。 B16F10細胞のmuticaは、皮膚科のスキンケア製品に使用したり、化粧品業界で皮膚の老化を防止したりするための植物の潜在的な美白活性を示唆している可能性があります。キーワード：アンチチロシナーゼ; メラニン形成; P.アトランティカ亜種 ムティカ。

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前書き

メラニンは、メラノソームで合成され、ケラチノサイトと呼ばれる生理学的プロセスを通じてケラチノサイトに移行する皮膚色素です。メラニン形成。 メラニンは紫外線によるダメージからの保護に重要な役割を果たし、肌、髪、目の色を決定します。 メラニンの過剰産生は、黒色腫と皮膚の異常な色素沈着に起因します（1-3）。 メラニン生合成の重要な酵素は、3、4-ジヒドロキシ-フェニルアラニン（DOPA）のドーパキノンへの酸化とL-チロシンのDOPAへのヒドロキシル化という2つの別々の反応を触媒するチロシナーゼです（4）。チロシナーゼまたはポリフェノールオキシダーゼは、微生物、動物、植物に見られる銅含有混合機能酵素です（5）。 チロシナーゼは、果物や野菜の褐変に最も影響を与える要因です。 メラニンの過剰産生と蓄積は、肝斑、そばかす、太陽メラノーシス、シミなど、多数の皮膚障害を引き起こす可能性があります（6）。 したがって、チロシナーゼ阻害剤は、食品および化粧品業界で多くの関心を集めています。 多くの生物では、酸化は生物学的プロセスに燃料を供給するエネルギーの生成に不可欠です。

ただし、過酸化水素（H2O2）およびその他の活性酸素種（ROS）は、メラニン形成プロセス中のUV照射後のROSの増加を含む、多くの生理学的および病理学的現象において細胞死および組織損傷を引き起こします。 また、紫外線によるROSの生成が、老化、しわ、光線過敏症、悪性腫瘍などのいくつかの皮膚状態の病因に関与していることもよく知られています（7）。 したがって、の自然源を見つける酸化防止剤反チロシナーゼ活動は、過剰に関連する皮膚の損傷を修正するのに役立ちますメラニン形成 (4).

カイノキ属は、約9種からなるウルシ科のメンバーであり、主に地中海地域、ヨーロッパ、およびアジアの一部に分布しています（8,9）。 Pistacia atlantica（P. atlantica）Desf。 つまり、3つの亜種があります：P.atlanticasubsp。 kurdica（Zohary）Rech。 f。、P。atlanticasubsp。 mutica（Fischer＆CA Meyer）Rech。 f。 およびP.atlanticasubsp。 cabulica（Stocks）Rech。 f。 P. atlantica、P。khinjuk Stocks、およびP. vera L.の3つの言及された亜種は、イランで栽培されています（1 0）。 P.atlanticasubsp。の果実。 ムティカ、すなわちバーネは円形から楕円形で、直径は0。5-0。7cmです。 P. atlanticaの外皮の抗酸化および抗癌活性は、植物の高い総フェノール含有量に関連しています。 P. atlanticaは伝統的に、上腹部の不快感や痛み、消化不良、消化性潰瘍を緩和するために使用されてきました（11-13）。 ただし、P。atlanticasubsp。のメラニン形成阻害活性に関する研究はありません。 ムティカ。 したがって、このプロジェクトでは、P。atlanticasubsp。の抗酸化および抗メラニン形成特性を研究するためにB16F10メラノーマ細胞を選択します。 ムティカ抽出物。 この研究の目的は、メタノール（MeOH）、n-ヘキサン、ジクロロメタン（CH2Cl2）、n-ブタノール（BuOH）、酢酸エチル（EtOAc）、水（H2O）抽出物、およびPの精油の抑制効果を調査することでした。 atlanticasubsp。 ムティカフルーツメラニン形成と可能性を評価する酸化防止剤B16F10メラノーマ細胞に対する植物の能力。

材料および方法

化学薬品

キノコチロシナーゼAgaricus bisporus、コジック酸、レサズリン、L -3、4-ジヒドロキシフェニルアラニン（L-DOPA）、ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（DCFH-DA）、エクタジン酸（EGTA）、ジメチルスルホキシド（DMSO ）、フェニルメチルスルホニルフルオリド、グリセロホスフェート、-メルカプトエタノール、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、オルトバナジン酸ナトリウム、トリス緩衝生理食塩水トゥイーン20（TBST）Sigma（USA）から購入。 ウシ胎児血清（FBS）、ペニシリン、ストレプトマイシン、およびトリプシン-EDTAは、GibcoBRL（Grand Island、USA）から入手しました。 黒色腫細胞株（B16F10、カタログ番号C540）は、イランのパスツール研究所（テヘラン、IRイラン）から購入しました。 他のすべての化学薬品と溶媒はMerck（ドイツ）からのものでした。

抽出物の調製

P.アトランティカ亜種 muticaは、2014年5月に、イラン北東部のKhorasanRazavi県のBardaskanMountainsから収集され、M。Souzani夫人によって特定されました。 バウチャー標本（No：13069）は、イランのマシュハドにあるマシュハド医科大学の薬科大学の植物標本室に寄託されました。 P.atlanticasubsp。の未熟果実。 ムチカ（200 g）をブレンダー（Toos chekan Co、IR Iran）で粉砕し、以前に報告されたプロトコル（14）に従って、室温で24時間MeOHを浸透させました。 抽出後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を蒸発させ、次に凍結乾燥させた。 メタノール抽出物（94 g）を溶媒-溶媒分配によりさらに分画して、MeOH、n-ヘキサン、CH2Cl2、BuOH、EtOAc、およびH2Oを含む5つの異なる画分を得た。

エッセンシャルオイルの分離

P. atlantica subsp.mutica（15 0 g）の未熟果実を、Clevengerタイプの装置を使用して3時間水蒸気蒸留にかけました。 無色の油が0.8パーセント（v / w）の収率で得られた。 得られた精油を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、さらに試験するまで暗所で4度で保存した。

ガスクロマトグラフィーおよびガスクロマトグラフィー-質量分析

ガスクロマトグラフィー（GC）分析は、フューズドシリカカラム（CP-Sil 8CB、5 0 m×0.25）と接続されたFID検出器を備えたVarianCP{{0}}を使用して実行されました。 mm、膜厚0.12 µm）次の条件下で：オーブン温度50-250度、速度3度/分。 インジェクタ温度260度、スプリット比1：5、キャリアガスあり、N2流量2 mL / min; 検出器温度280度。

ガスクロマトグラフィー-質量（GC-MS）分析は、HP -5 MSカラム（30m×0。25mmid、{{ 14}}。25µmの膜厚）、4重質量検出器およびWiley7n.Lライブラリを備えたコンピュータとのインターフェース。 オーブン温度50-250度、速度3度/分、インジェクタ温度250度、注入量：0.1 µL、分割注入、分割比1:50、キャリアガス（ヘリウム）流量1 mL /最小、イオン源：70 eV、イオン化電流：150 µA、スキャン範囲：35-465。 エッセンシャルオイルの成分の同定は、HP -5 MSカラムのn-アルカンシリーズ（C 6- C20）を参照して得られた保持ガスクロマトグラフィーに基づいており、それらの質量スペクトルとフラグメンテーションパターンの比較が報告されています文献、およびWiley 7n.Lライブラリとのコンピュータマッチング（15）。 未熟果実の個々の成分の相対量の定量化は、較正係数を考慮せずに面積パーセント法に従って実行されました。

細胞培養

メラノーマ細胞株B16F10は、5％のCO2を含む加湿雰囲気（90％）で37度に維持されました。 細胞は、10パーセント（v / v）FBS、100 IU / mLペニシリン、および100 µg /mLストレプトマイシンを含むRPMI-1640（Bioidea、イラン）で培養されました。 P.atlanticasubsp。のストック溶液。 muticaはDMSOで50µg / mLに調製され、-40度に保たれました。 コウジ酸（2および4 mM）をすべての実験のポジティブコントロールとして使用しました。 細胞を96-ウェルプレートで105細胞/mLの密度で培養しました。 各実験での抽出物の活性は、次の式を使用して計算されました。

活性のパーセント=サンプルの吸光度/コントロールの吸光度*100

細胞生存率アッセイ

レサズリンは、生細胞の還元力を利用してレサズリンに変換する細胞健康指標です。 レサズリンは青色で、毒性がなく、蛍光性で細胞透過性の化合物であり、生細胞で赤色に変換され、蛍光性の高いレソルフィンになります（16）。 約104個のB16F10メラノーマ細胞を96-マイクロウェルプレートの各ウェルに播種し、さまざまな濃度の抽出物とP.atlanticasubsp。のエッセンシャルオイルで処理しました。 mutica（0。2-200 µg / mL）。 4時間のインキュベーション後、H4ハイブリッドマルチモードマイクロプレートリーダー（BioTek、Winooski、USA）を使用して、レサズリンとレソルフィンの吸光度を570nmと600nmで測定しました。 各実験は3回行った。 最大阻害濃度の半分（IC50）は、GraphPadソフトウェアを使用して、濃度-効果曲線から計算されました：対数濃度対応答。

キノコチロシナーゼ活性アッセイ

きのこの活動チロシナーゼL-DOPAの酸化は、以前に説明されているように（17）、いくつかの変更を加えて分光光度法で測定されました。 簡単に説明すると、160 µLの5 mM L-DOPA（100mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.8中）と20 µLの同じ緩衝液（P. atlanticasubspを含む場合と含まない場合）。 ムチカ抽出物とエッセンシャルオイル（10-1000 µg / mL）を20 µLのマッシュルームチロシナーゼ（200 units / mL）と混合し、37度で30分間インキュベートしました。 Synergy H4ハイブリッドマルチモードマイクロプレートリーダー（BioTek、Winooski、USA）を使用して、475nmで吸光度を測定しました。

黒色腫細胞のメラニン含有量の測定

黒色腫細胞B16F10を、96-ウェル培養プレートにウェルあたり105細胞の密度で播種し、24時間インキュベートしました。 次に、それらを異なる濃度（0。2-200 µg / mL）のP.atlanticasubsp。とインキュベートしました。 ムティカ抽出物とエッセンシャルオイルを24時間。 メラニン含有量は以前に記載されたように測定された（18）。 処理後、トリプシンを使用して細胞を収集した。 彼らはPBSで洗った。 細胞ペレットを水酸化ナトリウム（2 M）の50 µL溶液に60度で60分間可溶化しました。 Synergy H4ハイブリッドマルチモードマイクロプレートリーダー（BioTek、Winooski、USA）を使用して、405nmでの吸光度を測定することによりメラニン含有量を測定しました。

細胞チロシナーゼ活性アッセイ

DOPAのDOPAクロムへの酸化は、の指標として分光光度法によって分析されました。チロシナーゼ活動（18）。 B16F10メラノーマの106細胞を、96-ウェルプレートの各ウェルに一晩プレートしました。 異なる濃度（0。2-200 µg / mL）のP.atlanticasubsp。で細胞を処理した後。 ミューティカ抽出物とエッセンシャルオイルを24時間、トリプシンを使用して細胞を剥離しました。 PBSで洗浄し、1％トリトンX-100と0.1mMフェニルメチルスルホニルフルオリドを含む50µLリン酸ナトリウム緩衝液（pH 6.8、100 mM）で溶解しました。 ライセートを10、000 rpmで20分間、4度で遠心分離しました。 100 µLの各ライセート（それぞれ100 mgのタンパク質を含む）を96ウェルプレートで30 µLの5 mM DOPAと混合し、37度で2時間インキュベートし、SynergyH4ハイブリッドマルチモードマイクロプレートリーダーを使用して475nmで吸光度を測定しました。 （BioTek、Winooski、USA）。

細胞の活性酸素種レベルの決定

活性酸素種レベルは、わずかな変更を加えて前述のように測定されました（19）。 メラノーマ細胞、B16F1 0、（2×104）を96-ウェルプレートに一晩播種し、さまざまな濃度（0。2-200 µg / mL）のP.atlanticasubspで処理しました。 。 ムティカ抽出物とエッセンシャルオイルを24時間。 次に、細胞を50 µLのH2O2（24 mM）とともに37度で30分間インキュベートしました。 次に、50 µLのDCFH-DAを細胞に添加し、Synergy H4マイクロプレートリーダー（BioTek、USA）を使用して、504nmの発光と524nmの励起でDCFの蛍光強度を測定しました。

ウエスタンブロッティング分析

黒色腫細胞B16F10は、メタノール抽出物（0。5-100 µg / mL）の有無にかかわらず75cm3フラスコで24時間培養されました。 次に、細胞をバッファー（5 0 mMトリス-HCl、pH 7.4、2 mM EGTA、1 mMフェニルメチルスルホニルフルオリド、10 mMグリセロホスフェート、10 mM-メルカプトエタノール、1 mMオルトバナジン酸ナトリウム、0.1％デオキシコール酸）で溶解しました。ナトリウム塩）。 等量のタンパク質（50 µg）を12％ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）-ポリアクリルアミドゲル電気泳動にロードし、ポリビニリデンジフルオリドメンブレンに転写しました。 メンブレンは、室温でTBST（20 mM tris-HCl pH 7.4、100 mM NaCl、および0.1％tween 20）バッファー中の10％スキムミルクで2時間ブロックされました。 TBSTバッファーで洗浄した後、メンブレンを一次抗体：1：300（ウサギ抗チロシナーゼ抗体（サンタクルーズバイオテクノロジー、カリフォルニア州））。 TBSTバッファーで3回リンスした後、メンブレンを二次抗体（細胞シグナル伝達）として抗ウサギIgG（1：2000）とともに2時間インキュベートしました。 TBSTバッファーで3回すすぎを繰り返し、強化化学発光（ECL）プライムウエスタンブロッティング検出システム（BioRaD、USA）を使用してタンパク質バンドを検出しました（20）。 抗- -アクチン抗体をローディングコントロールとして使用しました。

統計分析

実験の相対的な結果は、3つの独立した測定値の平均±SDとして表されました。 分散分析とIC50の計算は、一元配置分散分析を使用してGraphPad Prism 6。0で実行され、平均はダネット検定によって比較されました。 P <0.05は、抽出物で処理した細胞とコントロールの間の統計的に有意な差を表します。>

結果

エッセンシャルオイルの組成

ガスクロマトグラフィーは定量に使用され、Gc-Massは化合物の同定に使用されています。 GC分析とGC-MS分析の両方の結果は、化合物の定量的および定性的な同定表に示されています。 P.atlanticasubspの場合。 ミューティカ、68の成分がエッセンシャルオイルで同定され、総オイル組成の99.8パーセントを占めました（表1）。 エッセンシャルオイルのグループ化された化合物は、モノテルペン炭化水素86。5パーセント、酸素化モノテルペン3.7パーセント、セスキテルペン炭化水素8.7パーセント、酸素化セスキテルペン0 .1パーセント、およびその他0として決定されました。 .8パーセント。 エッセンシャルオイルの主成分は、-E-オシメン29.7パーセント、ミルセン17.1パーセント、-Z-オシメン17。0パーセント、-ピネン10.2パーセント、E-カリオフィレン7.1パーセントでした。

細胞の生存に対する抽出物の効果

細胞の生存率はレサズリンでモニターされました。 黒色腫細胞B16F10を96-ウェルプレートに播種しました。 24時間後、細胞をさまざまな濃度（0。2-200 µg / mL）のP.atlanticasubsp。で処理しました。 ミューティカ抽出物、結果は、抽出物がこの研究で使用された濃度でB16F10細胞に対して有意な細胞毒性効果を持たなかったことを示しました（図1）。 陽性対照としてのドキソルビシンは、細胞死を有意に誘導した（P <>

きのこのチロシナーゼ活性に対する抽出物の効果

L-DOPAの酸化におけるキノコチロシナーゼの阻害に対するP.atlanticaの効果を評価した。 結果はそのきのこを示したチロシナーゼ活性はすべての異なる抽出物によって阻害されましたが、1 0 00 µg/mLのn-ヘキサン抽出物の濃度はこのテストでは有意な影響を及ぼしませんでした。 コウジ酸（2および4 mM）を陽性対照として使用しました（P <>

メラニンの合成に及ぼす抽出物とエッセンシャルオイルの影響

P.atlanticasubsp。のさまざまな抽出物とエッセンシャルオイルの効果を研究する。 メラニン合成に関するmutica、抽出物で処理されたB16F10メラノーマ細胞のメラニン含有量を評価しました。 コウジ酸（2および4 mM）を陽性対照として利用した。

結果は、MeOH、CH2Cl2、およびEtOAc抽出物（0。2-200 µg / mL）、n-ヘキサン（2-200 µg / mL）、およびH2O抽出物（2 {{9 }}および200µg / mL）は、メラニン合成を阻害する効果がありました（P <0.05）（図3）。 ただし、エッセンシャルオイルとbuoh抽出物のすべての濃度は、メラニン合成に対して有意な抑制効果はありませんでした。="">

細胞のチロシナーゼ活性に対する抽出物の効果

P.atlanticasubsp。の阻害効果のメカニズムを評価する。 ムティカ抽出物メラニン形成特に、細胞内を評価しましたチロシナーゼB16F10黒色腫細胞における活性。 結果は、MeOH、EtOAc、およびBuOH抽出物（0。2-200 µg / mL）、n-ヘキサン（0。2 µg / mL）、およびCH2Cl2（20および200 µg / mL）P.atlanticasubsp。の抽出物 ミューティカは細胞のチロシナーゼ活性を有意に阻害する可能性がありますが（P <>

細胞の活性酸素種レベルに対する抽出物の影響

の指標としての細胞内ROSレベル酸化防止剤P. atlantica subsp.muticaの容量は、24 mM H2O2のみ、またはB16F10メラノーマ細胞のさまざまな抽出物で処理した細胞で測定しました。 結果は、すべての抽出物濃度がP.atlanticasubspであることを示した。 0。2µg / mLのCH2Cl2抽出物を除くmuticaは、H2O2によって誘発される酸化ストレスを大幅に抑制することができます（P <>

細胞のチロシナーゼタンパク質レベルに対する抽出物の効果

P.atlanticasubspの細胞内効果。 の指標としてのチロシナーゼなどのメラニン形成関連タンパク質のミューティカメラニン形成ウエスタンブロットによって評価された。 図6に示すように。チロシナーゼタンパク質レベルは、P。atlanticasubsp。によって有意に減少しました。 {{0}}。5および10µg / mL（P <0.05）の濃度でのmutica抽出物処理。>

さまざまなパラメーターに対するエッセンシャルオイルの影響

0。2-200µg / mLのエッセンシャルオイルは、メラノーマ細胞に対して細胞毒性効果を示した濃度200 µg / mLを除いて、上記のすべてのパラメーターに有意な影響を与えませんでした。 したがって、抑制効果が観察されなかったため、エッセンシャルオイルの結果は結果セクションに含まれていません。

討論

自然ベースの化粧品は、その安全性と多機能活動のために商業機関によって広く宣伝されています。 で新しい抗メラニン形成剤を見つける酸化防止剤自然源からの活動は、色素沈着過剰障害に使用される製品の処方における関心の1つです。 美白剤として使用される医薬品および化粧品において、メラニン形成の阻害、フリーラジカルの除去、およびチロシナーゼ関連する皮膚疾患の治療に重要な活動（21）。

この研究では、P。atlanticasubsp。のさまざまな抽出物の抗酸化活性。 ミューティカを評価し、チロシナーゼ活性とメラニン合成に対するそれらの影響を分析しました。 PのMeOHおよびEtOAc抽出物。 アトランティカ亜種 ミューティカは有意を示した酸化防止剤2、20 µg / mLおよび20、200 µg / mLでの活性。これは、植物に広く見られるポリフェノールとフラボノイドに起因する可能性があります。 結果は、すべての抽出物、特にMeOH、EtOAc、およびH2O抽出物がキノコを有意に阻害する可能性があることを示しましたチロシナーゼアクティビティ。 また、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＡｃ、およびＢｕＯＨ抽出物は、細胞内のメラニン生成の減少と一致していた細胞のチロシアン活性を減少させることができた。 この研究では、すべての濃度のエッセンシャルオイルは、細胞のチロシアン、メラニン合成、および酸化防止剤アクティビティ。 他の抽出物と比較して、さまざまな実験でのMeOH抽出物の活性が高いため、ウエスタンブロット分析用に前述の抽出物を選択しました。 要約すると、この抽出物の抗メラニン形成効果は、B16F10細胞のすべてのアッセイで確認され、陽性対照のコウジ酸に匹敵します（表2）。

MeOH、CH2Cl2、およびEtOAc抽出物は、細胞を減少させましたチロシナーゼ活性、メラニン含有量、およびROS。 半極性の性質の画分は、ポリフェノールやフラボノイドなどの抗腫瘍活性に関与する植物化学物質を抽出する可能性があります。 n-ヘキサン画分とエッセンシャルオイルは活性が低く、非極性で揮発性の植物植物化学物質がメラニン形成プロセス（22,23）。

ポリフェノールとフラボノイドはROS産生の阻害剤として作用し、植物抽出物の抗メラニン形成特性に関与している可能性があります（24-27）。 P.atlanticasubsp。の抽出物に含まれる主な化合物。 ムティカは、ケルセチン、ルテオリン、イソクエルセチン、ルチン、ルテオリン7-乳酸塩、およびp-クマル酸、コーヒー酸、没食子酸などのフェノール化合物です。酸化防止剤活動（28）。 ルチンはチロシナーゼの活性を阻害することが報告されており、ヒドロキシル基が存在するため、強力な抗色素剤です（29）。 興味深いことに、ケルセチン、ルテオリン、およびイソクエルセチンは、その構造に多くのヒドロキシル基を持っているため、チロシナーゼとの相互作用に適しており、抗チロシナーゼ活性をもたらします（21,30）。 最近、ルテオリンやケルセチンなどのフラボノイドの効果は、主に転写因子の調節を介して媒介されることが示されています。メラニン形成関連転写因子（MITF）および/またはメラニン形成酵素チロシナーゼ、DCTまたはチロシナーゼ関連タンパク質1（TYRP -1）（31）。 P-クマル酸とカフェー酸はキノコのチロシナーゼ活性を阻害し、コウジ酸よりも10-倍と3-倍強力でした（32）。

没食子酸は、アスコルビン酸と同様に、チロシナーゼ阻害活性を示し、レドックスサイクリングを通じてドーパキノンをL-ドーパに還元します（33）。 同様に、本研究ではP.atlanticasubsp。 muticaは、細胞内のチロシナーゼタンパク質のレベルを低下させました。これは、植物中のケルセチン、ルテオリン、イソクエルセチン、ルチン、およびその他のポリフェノールの存在と強く相関しています。

皮膚疾患の治療に高い可能性を秘めている可能性のある酸化ストレスを減少させる抗メラニン形成および抗酸化活性を有する植物についての多くの報告があります。 たとえば、P。atlanticaの地上部のさまざまな抽出物は、酸化ストレスを軽減しました。これは、植物に広く見られるポリフェノール、フラボノイド、およびアントシアニンに起因する可能性があります（34）。 別の研究では、P。veraのMeOH抽出物がメラニン分泌を減少させました。酸化防止剤この植物の化合物。 この研究は、陽性対照としてのコウジ酸が0.05 mg /mLのIC50値を示し、メラノーマ癌などの皮膚障害治療の有効な薬剤として高濃度のP. veraを使用できることを示しました（35 ）。 Gourine、etal。 P. atlanticaの空中部分が強力な抗酸化特性を持っていることを示しました（36）。 また、Nepeta satureioidesのMeOHおよびCH2Cl2画分は、B16F10メラノーマ細胞でのメラニン生成に対する潜在的な影響を示しており、スキンケア製品の化粧品配合に寄与する可能性があります（37）。 コウジ酸の誘導体は、チロシナーゼ。 この化合物に遊離ヒドロキシル基とメチル置換基が存在することで阻害活性が確認されたようです。 この研究では、コウジ酸（陽性対照）は0。28mMのIC50値を示しました（38）。 Teucrium poliumL.var。から単離されたフェニルプロパノイド配糖体およびフラボノイド。 gnaphalodesは抗酸化およびチロシナーゼ阻害活性を示しました。 著者らは、ジャラノールが最高のチロシナーゼ阻害活性（IC50 0。041mM）を示し、ポリウモシドが試験化合物の中で最高の抗酸化剤であることを示しました。 コウジ酸は0.02mMのIC50値を示しました（39）。

のタンパク質レベルの低下チロシナーゼP.atlanticasubsp。 ムティカと酸化防止剤特性とROSの低下により、この薬剤を抗メラニン形成剤として使用することが確認されています。 この研究は、初めてP.atlanticasubspの阻害効果を決定しました。 ミューティカオンメラニン形成B16F10メラノーマ細胞で。 皮膚へのメラニンの蓄積と過剰産生を防ぐために、チロシナーゼ重要な役割を持っています。 したがって、報告されているP. atlantica subsp.muticaの抗酸化作用に関して、フラボノイドおよびフェノール化合物は、P。atlanticasubsp。の抗メラニン形成および抗チロシナーゼ活性に関与する植物の重要な成分です。 ムティカ。 P.atlanticasubsp。の抗酸化作用と抗メラニン形成作用の両方。 ミューティカは、美白製剤に適した薬剤を提供する可能性があり、スキンケア製剤の化粧品に含めることができます。

結論

結論として、この研究は初めて、P。atlanticasubsp。のMeOHおよびEtOAc抽出物を示しました。 ムティカは強いチロシナーゼメラニンの減少に一致する抑制活性。 さらに、P。atlanticasubsp。 ミューティカはまた、高い掃気活性を示し、酸化防止剤主にその高レベルのフラボノイドと総ポリフェノールに起因する可能性のある特性。 結果は、P。atlanticasubsp。 メラニン生成を減少させるミューティカは、細胞のROSの枯渇と、シグナル伝達経路の調節に対するその阻害作用と相関している可能性がありますチロシナーゼアクティビティ。 半極性抽出物は有意な抗チロシナーゼと抗メラニン形成性したがって、これらの効果の原因となる化合物は、エッセンシャルオイルではなく抽出物に蓄積されていると結論付けます。