中医学カンクの化学組成と体内成分の分析Ⅲ

第 3 章 RPLC-HILIC-MS/MS に基づくカンクサの多成分成分の定量分析

伝統的な漢方薬の化学組成は複雑で、一次代謝物や二次代謝物[55-561などのさまざまな化合物が含まれています。 伝統的な漢方薬の化学成分（親水性成分と疎水性成分を含む）の包括的かつ信頼性の高い分析を達成することは、依然として大きな技術的問題です。 さらに、伝統的な漢方薬の各成分の含有量は大きく異なり、従来の液体質量分析法では主要成分と微量成分の両方を同時に正確に定量することが困難です。 1571 従来の単一カラム分離では十分ではなく、伝統的な中国医学における微量化合物の分析は定数によって制限されるでしょう。 化合物の干渉により、ピークの重なり現象が深刻です。 複雑なマトリックスの分離を改善するために、コアシェルおよびサブミクロン粒子クロマトグラフィーカラム、親水性相互作用クロマトグラフィーカラムなどのさまざまな高度なクロマトグラフィー技術が使用されていますが、さまざまな化合物を包括的に分離することは依然として困難です。単一列 [58 -59。 二次元 LC、カラムスイッチング LC、タンデム 2 カラム LC など、少なくとも 2 つの直交するクロマトグラフィー機構を組み合わせたマルチカラムクロマトグラフィーは、代謝物の対象範囲を大幅に拡大できる実現可能なツールと考えられています。 二次元 LC とカラムスイッチング LC の両方がピーク容量を大幅に増加できることは疑いの余地がありません 160)。 ただし、どちらの方法もバルブに依存し、機器は複雑で時間がかかり、接続チューブとレギュレーターの取り付けは簡​​単です。 残留物が存在し、これら 2 つの方法は定量的な再現性の欠如につながる一連の不確実性要因を導入する傾向があります 1571。 逆相親水性相互作用クロマトグラフィー タンデム (RPLC-HILIC) は、ピーク容量を大幅に増加させることはできませんが、装置機器はシンプルで、接続チューブやレギュレーターに残留物がなく、親水性から疎水性への変化を実現できます。 多数の広極性化合物を包括的に保持 [61-66. さらに、トリプル四重極 (QgQ) 質量分析計に特有の多重反応モニタリング (MRM) モードを別の分離次元として使用して、RPLC-HILIC の分離能力をさらに向上させることができます。 つまり、RPLC-HILIC-MRM は、RPLC、HILIC、MRM の固有の利点を統合しており、信頼性の高い分析手法となることが期待されています。

シスタンシェが機能するまでどのくらい時間がかかりますか?

伝統的な漢方薬の各成分の含有量は大きく異なります。 人々は、主成分と比較して、これらの微量化合物、さらには超微量化合物の検出を完了するための、より高感度な方法の開発により多くの注意を払っています。 MRM モードは、優れた感度と良好な線形ダイナミック レンジを備えているため、多くの場合推奨されます167。 ただし、QqQ 質量分析計の Q3 チャンバーの末端電子増倍が飽和しているため、直線範囲は通常狭くなり、確実にモニタリングしないと定量上限 (ULOQ) は一部の主要化合物の含有量を完全にカバーできません。これらのトレースコンポーネント。 したがって、プロダクトイオンの生成を抑制することで、ULOO を拡大することができます。 イオンペアなどの弱められた化合物パラメータを使用して、デポテンシャル(DP)と衝突エネルギー(CE) はターゲットのプロダクトイオンの数を減らすことができるため、ULOQ[68-69] の範囲を広げることができます。

伝統的な中国医学カンサス・ヘルバ鱗片状の葉が付いた乾燥した多肉質の茎です。カンサスの植物。 それは一般的に使用される伝統的な漢方薬の1つであり、「砂漠の人参」として知られています。 フェニルエタノイド配糖体は、Cistanche desserticola において常に注目の研究テーマでしたが、近年、マンニトールなどの他の親水性成分の薬理効果もよく認識されています。 70-721。 しかし、当社が日常的に行っているCH定量分析では、エキナセアシド,ベルバスコシド、マンニトールの濃度が高すぎて、UV 検出器または蒸発光散乱検出器 (ELSD) の測定範囲を超える場合がありました。 したがって、総合的な品質評価の観点からは、親水成分と疎水成分を同時にモニタリングし、主要成分と微量成分を正確に定量できる分析法の確立が重要です。

この章の実験では、複雑なマトリックスの分析に適した信頼性の高い方法である RPLC-HILIC-MS/MS 液体質量分析法 (逆相 - 親水性相互作用クロマトグラフィー - タンデム質量分析法を直列に結合) を確立し、Cistanche desserticola の 23 極性の検出を達成しました。 。 広範囲の化合物（親水性成分と疎水性成分を含む）の分離、分析、含有量測定を同時に行います。 SMRM モードを使用してこのメ​​ソッドの再現性を確保しながら、適切な CE 値とさまざまなイオンペアを使用して松ぼっくりを拡張します。イヌリンやベルバスコシドなどの主要成分の ULOQ により、Cistanche desserticola の主要成分と微量成分の同時定量が可能になり、これは、カンクイの品質管理を改善し、広範囲にわたる植物の標的代謝の達成を支援するための実現可能なツールです。 ゲノミクス。

第1節 実験材料

1. 楽器

HPLC-Qtap-MS 液体質量分析計には島津 HPLC (LC-20ADxR ポンプ 2 台、SIL-20ACxR 自動サンプラー、SPD-M20A UV 検出器、CTO-20AC を装備) が装備されています。サーモスタット、DGU-20A3R オンライン脱気装置、CBM-20A コントローラー、島津製作所、日本）および SCIEX5500 Qtrap 質量分析計（ESI イオン源、SCIEX、米国カリフォルニア州フォスターシティ）で構成されています。 データの取得と計算は、Analyst Software1.6.2 ソフトウェアによって完了しました。 Mili-Q 超純水精製システム (Milipore Company、米国)、Mettler ME204 電子分析天秤 (Mettler Toledo Company、スイス)、超音波抽出器 (230V、Bransonmodel 5510、Danburry、CT、米国)。

2. 材料と試薬

Waters Acquity UPLC HSS T3 カラム (2.1 x 100 mm、1.8 μm)、Waters XBridge Amide カラム (4.6 mmx150 mm、3.5 μm)。ポリエーテルエーテルケトン(PEEK) パイプライン (Agilent Company、米国)。 クロマトグラフィーグレードおよび質量分析グレードのメタノール、アセトニトリル、および質量分析グレードのギ酸は ThermoFisher (米国ペンシルバニア州ピッツバーグ) から購入し、水は実験室で製造された Milli-Q 超純水 (Millipore、米国マサチューセッツ州ベッドフォード) でした。 。 ナイアシン (ニコチン酸、cLogP、0.799)、コハク酸 (cLogP、-0.526) は Sigma-Aldrich Company (セントルイス、ミズーリ州、米国) から購入しました。ウリジン (cLogP、 -2.219)、アデノイド アデノシン (cLogP、-2.158)、イノシン (cLogP、{{10}}.106)、グアノシン (cLogP) 、-3.326) は、Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. から購入しました。フェニルアラニン (cLogP、-1.556)、8-エピロガン酸 (cLogP、-2.366)、マンニトール (cLogP、-2.046)、スクロース (cLogP 、-3.087)、グルロシド (cLogP、-1.757)、アラシャニオシド A (アラシャニオシド A、cLogP -0.971 )、エキナコシド (エキナコシド、cLogP、-1) .811)、フェルラ酸 (cLogP、1.421)、アクテオシド (cLogP、-0.890)、イソアクテオシド (cLogP、-0.057)、ピノレジノール- -D-グルコピラノシド (cLogP、 -0.384) は北京大学の天然および生物模倣薬の重要研究室によって提供され、シスタノシド F (シスタノシド F、cLogP、-2.211) 成都マンサイト バイオテクノロジー株式会社から購入、シスタノシド A (シスタノシド A、cLogP、-1.365)、2'-アセチルラクテオシド (cLogP、-0.040)、およびリキリチン アピオシド (cLogP 、-0.267) は上海から購入しました。 Shidande Biotechnology Co., Ltd.、チューブロシド A (tubulosideA、cLogP、0.287) は Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. から購入しました。すべての参照物質の純度は HPLC-DAD-IT-TOF-MS によってテストされ、純度は98%以上でした。 すべての対照物質の cLogP 値は、ChemBioDraw Ultra14.0 ソフトウェア (CambridgeSoftCambridge、MA、USA) によって計算されました。