酵素発酵中の抗酸化活性の変化
Oct 29, 2024
第4章酵素発酵中の抗酸化活性の変化
果物には栄養素が豊富で、多くの種類があります。発酵中の物質の生産は複雑で多様であり、それらについては多くの研究があります抗酸化活性。人々は常に、有益な食べ物を探しています人間の健康、したがって、酵素は近年ホットな話題になっています。従来の酵素生産プロセスは、果物や野菜の自然な発酵により酵素を得ることです。以前の研究に基づいて、この記事では4つの有益な発酵細菌が追加されています。この細菌自体も酵素に存在します。細菌の追加の添加の後、発酵プロセスにおける微生物の数と種類が変更されます。この変化は、その抗酸化活性にどのような影響を与えますか？前の章では、詳細な説明の例としてリンゴを取りました。異なる酵素濃度での実験基と対照群の抗酸化活性の比較は、実験群の酵素の抗酸化活性が対照群の抗酸化活性よりも大きいことを示した。抗酸化活性の強度は、特定の方法で酵素の信頼性も反映しています。
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この章では、一般的な果物の梨と柑橘類を元の実験に追加し、それらの変化を追跡して検出します抗酸化活性発酵中。コストの削減に基づいて、実験を通じて、細菌を添加した後の酵素の生物学的活性をより包括的に反映し、微生物酵素Bの生産のための特定の理論的基礎とデータサポートを提供したいと考えています。y株の人工接種.
4.1材料と方法
4.1.1材料
（1）実験材料
新鮮なリンゴ、ナシ、柑橘類を滅菌条件下で滅菌水で洗い、滅菌操作テーブルで自然に乾燥させ、剥がして後で使用するためにスライスします。 1：1の質量比で、滅菌ガラス瓶に白砂糖と果物を加えます。実験に必要な細菌を活性化し、最適なスキームに従ってそれらを酵素に接種します（この動作ステップは対照群では省略されています）。室温での異なる期間の発酵期間にサンプルを採取して、果実パルプを含むすべての酵素液を得てろ過し、それをろ過します。上清を実験サンプルとして使用し、10、{3}} rpmで高速遠心分離機で15分間遠心分離した後、それを使用して関連するデータを測定します。不必要な汚染を避けるために、酵素を作る過程で、すべての操作が無菌条件下で行われることは注目に値します。
（2）主な楽器
実験に必要な器具は、3.1.1（2）と同じです。
4.1.2メソッド
（1）発酵中の総フェノール含有量の変化
450μlのサンプル溶液を蒸留水で加えて、ボリューム46mlを作った後、1mlのフォリン - フェノール試薬を加えました。よく混ぜて、3分間反応します。次に、20％NACO3の3MLを添加しました。混合物を25度の一定温度水浴で2時間振とう。蒸留水は空白の制御として使用されました。吸光度Aは、分光光度計で760nmで測定しました。治療ごとに3つの複製が行われました。総フェノール含有量は、標準曲線方程式に従って計算されました。
（2）発酵中の削減力の変化
0。2mol/lとpH値の濃度で2.5mlのリン酸緩衝液に45 0μlのサンプルを2.5mlのリン酸緩衝液に加え、2.5mlのフェリシアン化物（w/v）の2.5mlを1％の質量濃度で5 {{{{{{{{{{{{23} react for 30 bet for 30 bet for 30 nect for 30 nect for 30 bes for 30 bes for for strich for for strich for for strich for for strich for react for 30〜までに添加します。 （w/v）質量濃度10％で、3000rpmで10分間遠心分離し、すぐに2.5mlの上清を体積フラスコに描き、2.5mlの蒸留水と0.5mlの塩化第二鉄（w/v）を0.1％に加えます。蒸留水を空白の制御として使用し、分光光度計を使用して700nmの波長で吸光度Aを測定します。治療ごとに3つの複製を実行します。電力を低減する強度は、吸光度値に基づいて決定されます。
（3）発酵中のスーパーオキシド陰イオンラジカル除去能力の変化
4.5 mlの0。{{1 {1 {16}}}} 5 mol/l ph 8.2 Tris-HClバッファーを一定温度水浴に入れ、温度を25度に調整します。 20分後、1 mlの酵素サンプル溶液と0.4 mLのピロガロール溶液を25 mmol/Lのピロガロール溶液を加えます。よく混ぜ、25度の水浴に5分間置きます。 1.0 mlの8 mol/L HClを加えて、反応を終了します。 TRIS-HCLバッファーを参照として使用し、分光光度計を使用して299 nmの吸光度Aを測定して、除去速度を計算します。空白のコントロールグループは、サンプルの代わりに1 mlの溶媒を使用します。スーパーオキシドアニオンラジカル除去速度は、式4.1：スーパーオキシドアニオンラジカル除去速度（％）=（A 1- a2）/a1×100（4.1）に従って計算されます。 A2は、実験グループの酵素サンプル溶液の吸光度です。
（4）発酵中のヒドロキシルラジカル除去能力の変化
45 0μlサンプル溶液に2mlに水を加え、6mmol/Lのモル質量濃度で1.4mlの過酸化水素に加え、0.6mlのサリチル酸ナトリウム濃度20mmol/Lおよび2mlのフェラー硫酸塩濃度の硫酸塩濃度を加えて、1.5mmol 3. 5mmmol 3. far sulf濃度で硫酸塩を加えます。 1時間。蒸留水でゼロ、分光光度計を使用して562nmの波長で吸光度Aを測定します。治療ごとに3つの複製が行われました。ヒドロキシルラジカル除去速度は、式4.2：ヒドロキシルラジカル除去速度（％）= [（a 1- a2）/a1]×100（4.2）×100（4.2）に従って計算されました。 A2は、サンプル溶液の平均吸光度です。
（5）発酵中のDPPHフリーラジカル除去能力の変化
2 mLの酵素サンプル溶液を1 0 mL体積フラスコに正確に伝達し、2×{5}} mol/lのモル質量濃度で2 mlの80％DPPHエタノール水溶液を容積フラスコに加えます。よく混ぜて、室温で30分間放置します。 80％のエタノール溶液を参照として採取し、517 nmの波長でサンプルの吸光度を測定します。これはA1として記録されます。 2 mLのDPPH溶液と2 mLの80％エタノール溶液を混合し、A0として記録された同じ波長で吸光度を測定します。 2 mLの酵素溶液と2 mLの80％エタノール溶液を混合し、A2として記録される同じ波長で吸光度を測定します。治療ごとに3つの複製が行われました。フォーミュラ4.3に従ってDPPHフリーラジカル除去速度を計算します。
DPPHフリーラジカル除去率（％）{{0}}} [1-}（A 1- A2）/A 0]×100（4.3）×100（4.3）ここで、A1は2 ML DPPH 80％Ethanol Aquous溶液の平均吸収です。 A2は、2 mLの酵素溶液と2 mL 80％エタノール混合溶液の吸光度です。 A0は、2 mL DPPH溶液と2 mL 80％エタノール混合溶液の吸光度です。
（6）発酵中のABTSフリーラジカル除去能力の変化
8μLサンプル溶液に10μLをリン酸緩衝液（5 mmol/L pH 7.4）で補充し、10 mLの硫酸カリウムとABTS混合溶液と均等に混合して、30度の反応温度と5分の反応時間で反応しました。蒸留水で溶液をゼロし、分光光度計を使用して734 nmの波長で吸光度Aを測定します。治療ごとに3つの複製が行われました。 ABTSフリーラジカル除去速度は、式4.4に従って計算されました。
ABTSフリーラジカル除去速度（％）= [（a 1- a2）/a1]×100（4.4）×100（4.4）：a1は空白のコントロールグループの吸光度です。 A2は、サンプル実験グループの吸光度です。
