MiR{0}}b2/c の欠失は MPTP 誘発パーキンソン病マウスの老化と神経保護の促進につながる

概要

研究により、老化における miR-29 とパーキンソン病（PD）との関連性が明らかになりました。 ここで我々は、1-メチル-4-フェニル-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン（MPTP）誘発性PDにおけるmiR-29の血清レベルがマウスは動的な変化を示しました。 老化とPDにおけるmiR-29b2/cの役割は、miR-29b2/c遺伝子ノックアウトマウス（miR-29b2/c KO）を利用して研究されました。 miR-29b2/c KO マウスは、野生型 (WT) マウスと比較した場合、顕著な体重の軽さ、後弯症、筋力低下、および異常な歩行を特徴としていました。 WT では、明らかな真皮の肥厚と脂肪組織の減少も発生しました。 しかし、miR-29b2/cの欠損は、MPTPによって誘発されるドーパミン作動系の損傷と黒質線条体経路におけるグリア活性化を軽減し、その結果MPTPで治療したKOマウスの運動機能を改善した。 miR-29b2/cのノックアウトは、1-メチル-4-フェニルピリジニウム（MPPプラス）処理した混合グリア、初代アストロサイト、またはLPS処理した初代培養物における炎症因子の発現を阻害した一次ミクログリア。 さらに、miR-29b2/c 欠損は AMPK の活性を増強しましたが、グリア細胞における NF-κB p65 シグナル伝達を抑制しました。 我々の結果は、miR-29b2/c KOマウスが早老症のような表現型を示すことを示しています。 グリア細胞の活性化が低下し、神経炎症が抑制されると、miR- 29b2/c KO マウスではドーパミン作動性神経保護が引き起こされる可能性があります。 結論的には、miR-29b2/c は老化の制御に関与しており、パーキンソン病に有害な役割を果たしています。

キーワード

MiR-29b2/c; 神経保護; MPTP 誘発性パーキンソン病。シスタンケの利点.

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序章

パーキンソン病 (PD) は 2 番目に頻度の高い神経変性疾患で、中脳の黒質緻密部 (SNpc) におけるドーパミン作動性ニューロンの進行性の喪失、およびグリアの活性化と神経炎症の増加を特徴とします [1-3]。 マイクロRNAは、転写後レベルで遺伝子発現を制御する短い非コードRNA分子です[4、5]。 マイクロRNAは、神経系の発達、神経の可塑性、神経変性疾患の制御に関与しています。 MicroRNA29 ファミリー (miR- 29) は、miR-29a/b1 と miR-29b2/c の 2 つの遺伝子クラスターで構成されており、それぞれ、染色体 6 と染色体 1 に位置しています。マウスのゲノム。 miR-29aとmiR-29cには1ヌクレオチドの違いしかありませんが、miR-29b1とmiR-29b2は配列が同一です[6]。 miR-29 は複数の生物学的プロセスに関与しています。 プロ細胞生存遺伝子 Bcl-2、Mcl-1、Cdc42、および p85- を含む、多くの miR-29 の標的遺伝子が実験的に検証されています。 アポトーシス促進遺伝子 Puma、Bim、Bak、および Bmf。 および炎症促進性サイトカイン IFN- および IL-12 。 末梢系では、miR-29 が組織の線維化 [7-9]、代謝、および免疫制御 [10-13] に関与していることが研究によって示されています。

miR-29 は中枢神経系で広く発現しており、その転写物はニューロンとグリア細胞の両方に存在します [14、15]。 miR-29 と神経疾患との関連性はますます明らかになってきています。 miR-29 はアミロイド生成の制御に関与しており、AD 患者の脳では下方制御されています [16、17]。 miR-29 レベルもハンチントン病 (HD) 患者および HD モデルマウスでは減少します [18、19]、筋萎縮性側索硬化症 (ALS) 患者および ALS マウスモデルでは増加します [16、20]。 miR-29a/b-1-欠損マウスとmiR-29が下方制御されたマウスはどちらも運動失調様の表現型を示します[6、21]。 虚血性げっ歯類モデルにおける神経保護および神経細胞死の促進に対する miR-29 発現の影響に関しては、反対の結果が報告されている [22、23]。 以前の研究では、PD 患者の血清中の miR-29 レベルが顕著に減少し、より重篤なパーキンソン病に関連する減少傾向があることが観察されました [24]。 さらに、miR-29 レベルは PD 患者の記憶能力と相関していました [25]。 私たちは、miR-29b2/c が PD と密接に関連していると結論付けましたが、その生理学的機能や PD に関与する病理学的メカニズムはほとんどわかっていません。

この研究では、MPTP 投与に反応したマウス血清 miR{0} レベルを注射後 120 日まで測定しました。 miR-29b2/c欠損が末梢組織に及ぼす影響は、miR-29b2/c KOマウスを用いて研究されました。 ドーパミン作動性神経毒 MPTP をさらに使用して、PD のマウスモデルを誘導しました。 次に、黒質線条体ドーパミン作動性システムの損傷、行動パフォーマンス、および潜在的なメカニズムが調査されました。 我々は、マウス血清中の miR-29 レベルが MPTP 投与後に動的変化を示すことを観察しました。 miR- 29b2/c KO マウスは、体重の軽さ、脂肪組織の減少、後弯症、皮膚の肥厚、筋力低下、歩行異常によって示される老化の促進を示しました。 しかし、miR-29b2/c の欠損により、ドーパミン作動性損傷とグリア活性化が軽減され、その結果、PD 様動物モデルの行動パフォーマンスが向上しました。

カンクサの丸薬

結果

1. miR-29b2/c KOマウスにおける早老症様表現型

miR-29b2/c ノックアウト マウス（miR-29b2/c KO）は、CRISPR-Cas9 技術を使用して生成されました。 遺伝子ターゲティングと変異マウスのジェノタイピングの戦略を補足図1に示しました。生後4か月と16-のmiR-29b2/c KOマウスの体重は減少しました（図1A）。 X線マイクロコンピュータ断層撮影（マイクロCT）スキャンで証明されたように、生後3か月の時点でmiR-29b2/c KOマウスの特徴は変化しなかった（補足図2A）。 生後13ヶ月のmiR{19}}b2/c KOマウスとそのWTマウスとの間で、骨塩密度（BMD）、小柱平均BMD、小柱間隔、小柱の厚さ、構造モデル指数（SMI）に差はなかった（補足図 2B)。 ヘマトキシリン・エオシン（H&E）染色により、13-月齢の miR-29b2/c KO マウスでは、真皮が肥厚し、しわが増加して深くなっていることがわかりました（図 1B、1C）。 そして、後弯症は、16-月齢の miR-29b2/c KO マウスで明らかでした (図 1C)。 若齢（生後3か月）のmiR-29b2/c KOマウスは正常な脂肪組織を持っていました（補足図2C、2D）。 しかし、腹部脂肪組織（皮下脂肪と内臓脂肪を合わせたもの）と褐色脂肪組織は、16 か月齢の WT マウスと比較して miR{39}}b2/c KO マウスでは劇的に減少しました（図 1D）。 さらに、脳内の老化マーカー p21 および p53 の転写レベルを分析しました。 生後 6 か月の miR{45}b2/c KO マウスの海馬では顕著に増加しましたが、皮質では増加しませんでした。 miR-29b2/c欠損海馬におけるp53およびp16タンパク質レベルは、WT対照と差がなかった。 さらに、細胞老化の既知の特徴であるβガラクトシダーゼ活性は、生後3か月のWTマウスとmiR-29b2/c KOマウスの脳で差がなかった。

miR- 29b2/c KO マウスの筋力低下と歩行異常

miR-29b2/c 欠損マウスの行動が評価されました。 筋力はワイヤーぶら下げテストとグリッドぶら下げテストによって測定されました。 miR-29b2/c KO マウスは、ワイヤー吊りテストで対照マウスよりも低いスコアを示しました (図 2A)。 また、グリッドハンギングテストでは野生型マウスと比較して、miR{6}b2/c KO マウスの落下までの潜伏時間が劇的に短かった（図 2B）が、WT と miR のロータロッドテストのパフォーマンスは低かった{{10} b2/c KO マウスには有意な差はありませんでした (図 2C)。 動物の歩行は Catwalk XT 分析システムによって検出されました。 驚くべきことに、miR-29b2/c KO マウスの速度と歩幅はいずれも対応マウスよりも高かったのに対し、miR{ {15}} b2/c 欠損マウス (図 2D)。

MPTP 誘発 PD マウス血清中の miR-29 の変化

PD患者の血清中のmiR-29レベルは、健康な対照と比較して減少しました[24]。 この研究では、MPTP の亜急性レジメンの投与後 3、30、および 120 日目に PD マウスの血清中の miR-29 レベルを定量しました。 miR-29aおよびmiR-29bレベルは注射後3日で減少し、30日でベースライン値に回復し、120日で再び減少しました。 ただし、miR-29c レベルは大きく変化しませんでした (補足図 5)。

カンクサのサプリメント

miR-29b2/c 欠損はマウスの MPTP 誘発黒質線条体損傷と運動障害を軽減する

miR-29b2/c ノックアウトマウスと WT 同腹子に MPTP を注射して PD モデルを誘導しました。 miR-29b2/c KOマウスとWTコントロールの両方の線条体におけるp21、p53、およびPai1の発現レベルは、MPTP投与後に変化しませんでした。 MPTP 曝露は、SNpc [F(1, 20)=5.441, P=0.0302] の TH 陽性ドーパミン作動性ニューロン、および TH 陽性神経終末、TH タンパク質の大幅な減少を引き起こしました。 [F(1, 20)=10.5、P=0.0041] および線条体におけるドーパミン、DOPAC、および HVA のレベル (図 3A–3D)。 しかし、MPTP治療を受けたmiR-29b2/c KOマウスの黒質線条体損傷は、ドーパミン作動性ニューロンの数、ドーパミン作動性神経終末の密度、および線条体のTHタンパク質レベルおよびドーパミン濃度は著しく高かった。 さらに、DOPAC 対 DA および HVA 対 DA の比率 [F(1, 19)=12.64、P=0.0021] の変化は著しく緩和されました (図 3A–3D)。 生理食塩水を注射した miR-29b2/c KO マウスでは、5-HT とその代謝物 5-HIAA の線条体濃度は WT マウスと比較して増加し、NE 濃度はマウスとマウスの間で近かった。野生型マウスと miR-29b2/c KO マウス (図 3D)。 立ち上げテストと極点テストは、それぞれマウスの自発的な垂直活動 [26、27] と運動活動 [28] を評価するために使用されました。 最後の MPTP 注射から 2 日後、生理食塩水で処理した WT 対照と比較した場合、WT マウスでは最後の 2 分間の立ち上がり頻度が減少しました。 同様の実験では、MPTP 誘発の飼育頻度の変化に対する miR- 29 b2/c 欠損の影響は明らかにされませんでした (図 3E)。 同様に、極点試験における MPTP 投与後の WT マウスでは向きを変えたりよじ登ったりするのに費やした合計時間は増加しましたが、生理食塩水で処理した miR-29b2/c KO マウスと MPTP 処理した miR-29b2/c KO マウスでは合計時間は近かったです (図 3F) 。

miR-29b2/c 欠損はマウスの MPTP 誘発グリア活性化を減弱させる

グリア細胞の活性化とグリア細胞を介した神経炎症は、PD の病態に関与しています [29]。 WT マウスの黒質線条体経路ではアストロ サイトが顕著に増加しましたが、GFAP とアストロ サイトは線条体では増加しましたが、miR の SNpc [F(1, 8)=5.412, P=0.0484] では増加しませんでした。 -29 MPTP 注射から 3 日後の b2/c KO マウス。 注目すべきことに、星状細胞密度は、MPTPで処理したWTおよびmiR-29b2/c KOマウスの2つの領域で差がありませんでした（図4A、4B）。 Iba 1 とミクログリアは、WT マウスの黒質、および WT と miR の両方の線条体で増加しました [F(1, 8)=12.74, P=0.0073]{{21} }MPTP投与後のb2/c KOマウス。 さらに、miR-29b2/c KO マウスでは、MPTP 注射によりミクログリア密度が大幅に減少しました (図 4C、4D)。

2. 初代培養星状細胞における miR-29b2/c 欠損の影響

miR{0}b2/c の欠損が星状細胞の増殖と遊走に影響を与えるかどうかをテストするために、スクラッチ アッセイが利用されました。 初代 miR-29b2/c KO アストロ サイトは、増殖と遊走の能力に差を示さなかった。 初代WTおよびmiR-29b2/c KOアストロサイトの細胞生存率は、ベースラインで差を示さなかった。 MPP と中毒の後、WT アストロ サイトの細胞生存率はコントロールと比較して高かったが、変異アストロ サイトの生存率は変化しなかった [F(1, 18)=5.727, P=0.0278 ]。 MPP プラス処理 WT および miR-29 b2/c KO 星状細胞では、ROS 産物とグルコース取り込みの増強が観察されました。

カンクイ

MPP プラス処理星状細胞における神経栄養因子、炎症関連分子、星状細胞 A1 型、および A2 型マーカー遺伝子の発現レベルを測定しました。 攻撃から 12 時間後に、WT および miR-29b2/c KO 星状細胞で BDNF の発現が上昇しました (図 5A)。 TGF- 1発現レベルは、ベースライン時とその後の両方で野生型アストロサイトと比較した場合、MPPプラスへの曝露後のWTアストロサイトでは有意に上方制御されていましたが、miR- 29b2/c KOアストロサイトでは下方制御されていました。酩酊状態(図5B)。 TNF転写物の塩基レベルは、WTアストロサイトと比較した場合、miR-29b2/c KOアストロサイトで低かった。 12時間の処理後、WTおよびmiR-29b2/cアストロサイトではIL-1、IL-6、COX-2の発現レベルが大幅に増加しましたが、TNF転写産物は野生型の対応物と比較すると、IL{22}}、TNF、およびCOX-2転写物はWT星状細胞でのみ上昇し、miR-29b2/c KO星状細胞では減少しました（図5C） 。 A1 マーカー H2-T23 および A2 マーカー CD14 は、WT コントロールと比較した場合、PBS 処理 miR- 29b2/c KO アストロ サイトで著しく低かった。 12時間の処理後、WTおよびmiR-29b2/c KOアストロサイトの両方で、A1マーカーH2-D1、Ggta1、およびC3、およびA2マーカーClcf1およびS100 10が上方制御された。 H2-T23 は WT 星状細胞でのみ増加しました。 Gbp2 と CD14 は、星状細胞の 2 つの遺伝子型で変化しませんでした。 さらに、H2-T23、H2-D1、および CD14 の転写物は、WT コントロールと比較した場合、miR-29b2/c KO アストロサイトで下方制御されました (図 5D、5E)。 処理の 12 時間後および 24 時間後、AMPK タンパク質およびリン酸化 AMPK タンパク質のレベルは WT アストロサイトでは変化しませんでしたが、MPP と攻撃の 24 時間後では、miR-29b2/ では AMPK タンパク質レベルが減少しました。 c KOアストロサイト、および変異アストロサイトにおけるAMPKに対するp-AMPKの比率も、WTアストロサイトおよびPBS処理変異アストロサイトと比較して増加しました（図5F）。 さらに、PBS または LPS で処理した BV2 細胞からのならし培地 (略称 CM および LCM) を使用して、WT および miR-29 b2/c KO マウスの初代星状細胞を刺激しました。 p-AMPKタンパク質の発現はLCMの12時間処理後も変化しなかったが、WTアストロサイトと比較してmiR-29b2/c KOアストロサイトで有意に高かった。 我々は、LCM を 24 回処理した後、両方の遺伝子型のアストロ サイトで pAMPK タンパク質が増加することを観察しました。 LCM 刺激により COX- 2 タンパク質 [F(2, 18)=10.29, P=0.0010] の発現が著しく増加しましたが、COX-2 タンパク質レベルは減少しましたmiR-29b2/c では、KO アストロサイトは WT アストロサイトと比較して減少しました (図 5G)。 LCM 処理 miR-29b2/c KO アストロ サイトの亜硝酸塩濃度も、LCM 処理 WT アストロ サイトと比較して有意に低かった [F(2, 30)=17, P<0.0001] (Figure 5H). Further, the expression of senescence marker genes was evaluated. 12 h-treatment of MPP+ increased p53 transcript levels in both WT and miR- 29b2/c KO astrocytes. p19 and Pai1 transcripts were elevated only in WT astrocytes, and Pai1 expression levels in miR-29b2/c KO astrocytes were decreased compared to WT astrocytes after the treatment. Moreover, Bcl-2, Bax protein levels, and the ratio of Bcl-2 to Bax did not change in WT and miR-29b2/c KO astrocytes.

3. 初代培養ミクログリアにおける miR-29b2/c 欠損の影響

炎症性刺激に対する miR{0}b2/c 欠損ミクログリアの反応を測定するために、LPS が使用されました。 ベースラインでは、miR-29b2/c KO ミクログリアの BDNF 発現レベルが低かった。 LPS 処理の 4 時間後および 8 時間後、WT では IL-1 、IL-6、TNF、および COX-2 転写産物の量が上方制御されましたが、IGF-1 発現は下方制御されました。 miR-29b2/c KO ミクログリア細胞では、BDNF の発現は WT ミクログリアでのみ減少しました [F(2, 27)=41.5, P<0.0001]. IL-10 transcript increased in WT and miR-29b2/c KO microglia [F(2, 27) = 3.753, P=0.0365], and TGF-β1 transcript decreased in WT microglia at eight hours after the LPS challenge. BDNF and TGF-β1 transcripts were not changed in miR-29b2/c KO microglia. In addition, IL-6 transcripts were significantly reduced in miR-29b2/c KO microglia after the challenge compared to WT controls, IGF-1 and IL-10 transcripts were markedly higher in miR-29b2/c KO microglia after four and eight hours of intoxication, respectively (Figure 6A–6C). At baseline, the p-AMPK protein level and pAMPK to AMPK ratio were dramatically elevated in miR-29b2/c KO microglia when compared with WT microglia. 24 h after the treatment of LPS, p-AMPK level [F(1, 17) = 5.066, P=0.0379] and the ratio [F(1, 17) = 5.537, P=0.0309] were elevated only in WT microglia (Figure 6D). At one hour after the treatment, the phosphorylated-NF-κB p65 (p-p65) proteins and pp65 to p65 ratio, but not p65 proteins, increased in wildtype and miR-29b2/c KO microglial cells, yet the ratio decreased modestly in miR-29b2/c KO microglial cells when compared with WT microglia (p=0.071) (Figure 6E). The expression of COX-2 was enhanced in the two genotypes of microglial cells; whereas, the level of COX-2 in mutant microglia decreased when compared with WT controls after 24 h-treatment of LPS [F(1, 17) = 5.33, P=0.0338] (Figure 6D). Nitrite product was induced by the treatment of LPS in both genotypes of microglia, however, it was dramatically lower in miR- 29b2/c KO microglia at baseline and after the treatment of LPS [F(1, 20) = 14.03, P=0.0013] (Figure 6F).

議論

miR-29 ファミリーメンバーの発現は、個人が高齢になると複数の組織で上方制御されます [30-32]。 私たちの研究室や他の研究者による研究では、miR-29 とパーキンソン病との関連性が示されています [33]。 本研究では、老化とパーキンソン病における miR- 29b2/c の役割が研究されました。 miR-29 は、組織、種、発達段階に応じて老化促進効果と老化防止効果を発揮します。 3-生後 1 か月の miR-29b2/c KO マウスは骨格と脂肪組織が正常で、4-生後 1 か月の miR- 29 b2/c KO マウスは正常であることがわかりました。他の研究 [11、34] と一致します。 3-生後 1 ヶ月の miR- 29b2/c KO マウスで筋力低下と不安定な歩行が検出されました。 生後13か月のmiR-29b2/c KOマウスは真皮の肥厚を示した。 しかし、それらは大腿骨の正常な微細構造を持っていました。 体重の減少は、16-月齢の miR-29b2/c KO マウスに存在しました。 この年齢では、miR-29b2/c KO マウスは腹部脂肪と褐色脂肪が少なく、明らかな後弯症を示しました。 miR-29 は、p53- 媒介の細胞周期停止 [35、36] および p16/Rb 駆動の細胞老化 [37] に関与しています。 しかし、細胞老化は miR-29b2/c KO マウスの脳では明らかではありませんでした。 したがって、miR-29b2/c は老化の調節に寄与しますが、末梢組織と脳におけるその役割は異なる可能性があります。

miR-29 の血清レベルは、健康な対照と比較して PD 患者では下方制御されていました [24]。 ここで、PD マウス血清における miR-29 の発現が、MPTP 投与後 3 日から 120 日まで変動することを発見しました。 miR-29 は脳に豊富に存在します [6, 30]。 GEO プロファイルを調べると、PD 患者の黒質で miR{{8}c 発現が上方制御されていることがわかります (p=0.0059、マン-ホイットニー検定による)。さらに、miR{{12上前頭回における }}c の発現は、対照被験者と比較した場合、差がありませんでした (p=0.47、Student-T 検定による) (補足図 10)。 ここでは、miR-29b2/c KO マウスに MPTP を投与して PD 様損傷を誘発しました。 変異マウスは、黒質線条体ドーパミン作動性系への損傷がそれほど深刻ではなく、グリア活性化がより軽度であり、その後ある程度の行動抵抗を示した。 したがって、miR-29b2/c は PD の病理において有害な役割を果たします。 MPTP誘発マウスPDモデルでは、p21、p53、およびPai1転写産物の線条体レベルが変化しないことが観察され、細胞老化が起こらない可能性が示唆されました。 加齢はPD発症の高リスク因子とみなされている[38]が、加齢に伴う脳の変化、特にドーパミン作動系の変化の方がより関連性の高い因子である可能性がある。

WT マウスと miR-29b2/c KO マウスの初代グリアを培養して、根底にあるメカニズムを調査しました。 MPP と治療により、miR-29b2/c 欠損混合グリアにおける GDNF 発現が増加し、IL-1 発現が減少しました。 MPP プラスは、WT 星状細胞における炎症誘発性遺伝子の発現も増加させましたが、miR{6}}b2/c 欠損星状細胞では増加しませんでした。 同様に、LPSで処理したBV2細胞の馴化培地に曝露した後の変異型アストロサイトは、WTアストロサイトと比較してNOの産生が少なくなりました。 ミクログリア初代培養では、LPS 処理 WT コントロールと比較して、抗炎症サイトカイン IL-10 および神経栄養因子 IGF-1 の転写物が著しく高く、炎症誘発性サイトカイン IL{ {15}} は、LPS 処理された miR-29b2/c KO ミクログリアで減少しました。 miR-29b2/c KOミクログリアでは、ベースラインおよびLPS中毒後にNOレベルが減少しました。 研究により、miR-29 および多くの予測標的遺伝子が代謝プロセスに関与していることが示されています [34、39-41]。 AMPK は必須の調節因子として、活性化されると PD を保護することが証明されています [42]。 AMPK の活性化はサーチュイン 1 を刺激し、NF-κB 活性化と下流の炎症性標的遺伝子を間接​​的に阻害します [43]。 我々は、リン酸化AMPKタンパク質レベルおよびAMPKに対するp-AMPKの比率が、それぞれLCM処理およびMPPプラス処理miR- 29b2/c KOアストロサイトにおいて上方制御されることを観察した。 COX-2 タンパク質レベルは、WT アストロ サイトと比較して、LCM 処理した変異アストロ サイトで減少しました。 ベースラインでは、AMPK 活性は miR-29b2/c KO ミクログリアで上昇していました。 COX-2 タンパク質の量は、LPS 処理後の WT コントロールと比較した場合、miR-29b2/c KO ミクログリアで有意に減少しました。 LPS 処理下では、変異体ミクログリアでは p-p65 と p65 の比がわずかに下方制御され、NF-κB シグナル伝達経路が緩和されたことが示唆されました。 我々の結果は、グリアにおけるAMPK活性の増強と炎症反応の低下が、miR-29b2/c KOマウスの黒質線条体経路を保護することを示しています（図6G）。 結論的には、miR-29b2/c は黒質線条体ドーパミン作動性システムの老化と損傷において重要な役割を果たしています。

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Xiaochen Bai 1,2、Xiaoshuang Zhang 1、Rong Fang 1、Jinghui Wang 1、Yuanyuan Ma 1、Zhaolin Liu 1、Hongtian Dong 1、Qing Li 1、Jingyu Ge 1、Mei Yu 1、Jian Fei 3、4、Ruilin Sun 4、ファンファン1

1. トランスレーショナル神経科学部門、上海静安区センター病院、国家医療神経生物学重点研究所およびMOEフロンティア脳科学センター、復旦大学脳科学研究所、上海200032、中国

2. 上海交通大学付属第六人民病院リハビリテーション医学科、上海200233、中国

3. 同済大学生命科学技術学部、上海 200092、中国

4. 上海工学モデル生物研究センター、上海モデル生物センター、INC、上海 201203、中国