起立性不耐症の ME/CFS 患者の血清サンプル中のテトラヒドロビオプテリン濃度の上昇の検出: パイロット研究
Oct 09, 2023
抽象的な：筋痛性脳脊髄炎または慢性疲労症候群 (ME/CFS) は、重度の筋肉疲労、痛み、めまい、および脳霧を特徴とする多系統の慢性疾患です。 ME/CFS 患者の多くは、起立性不耐症 (OI) を経験します。これは、直立姿勢を維持しているときに頻繁にめまい、ふらつき、失神を感じることを特徴とします。 熱心な研究にもかかわらず、この衰弱状態の分子メカニズムはまだ不明です。 OI は、脳血流の減少、血圧の低下、心拍数の低下などの心血管の変化によって現れることがよくあります。 内皮一酸化窒素合成酵素 (eNOS) 酵素の必須補因子であるテトラヒドロビオプテリン (BH4) の生物学的利用能は、心血管の健康および循環と密接に関係しています。 ME/CFSにおけるBH4の役割を調査するには、CFS患者（n=32）、OIのみのCFS患者（n=10; CFS + OI）、およびOIとOIの両方を伴うCFS患者の血清サンプルを使用します。小線維多発ニューロパチー (n=12; CFS + OI + SFN) を BH4 ELISA に供した。 興味深いことに、我々の結果は、年齢/性別が一致した対照と比較して、CFS、CFS + OI、および CFS + OI + SFN 患者において BH4 発現が有意に高いことを明らかにしました。 最後に、培養ミクログリア細胞における ROS 産生アッセイとその後のピアソン相関統計により、CFS + OI 患者の血清サンプル中の BH4 の上昇が酸化ストレス応答と関連している可能性があることが示されました。 これらの発見は、BH4 代謝の調節が CFS および OI を伴う CFS の分子機構を理解するための有望な標的である可能性があることを示唆しています。
カンカは抗疲労およびスタミナ増強剤として作用することができ、実験研究ではカンカの煎じ薬が体重負荷のある水泳マウスで損傷した肝臓の肝細胞および内皮細胞を効果的に保護し、NOS3の発現を上方制御し、肝臓のグリコーゲンを促進することが示されています。合成し、抗疲労効果を発揮します。 フェニルエタノイド配糖体が豊富なカンカ抽出物は、ICR マウスの血清クレアチンキナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、および乳酸レベルを大幅に低下させ、ヘモグロビン (HB) およびグルコースレベルを増加させる可能性があり、筋肉の損傷を軽減することで抗疲労の役割を果たす可能性があります。そして、マウスのエネルギー貯蔵のための乳酸の濃縮を遅らせます。 化合物カンカタブレットは、マウスの体重負荷水泳時間を大幅に延長し、肝臓のグリコーゲン貯蔵量を増加させ、運動後の血清尿素レベルを低下させ、抗疲労効果を示しました。 シスタンキスの煎じ薬は、運動中のマウスの持久力を向上させ、疲労の除去を促進することができ、負荷運動後の血清クレアチンキナーゼの上昇を抑え、運動後のマウスの骨格筋の超微細構造を正常に保つ効果があることを示しています。体力強化や疲労回復に効果があります。 シスタンキスはまた、亜硝酸塩中毒マウスの生存期間を大幅に延長し、低酸素症や疲労に対する耐性を高めました。
「過度の疲労」をクリックします
【詳細情報:george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:8613632399501】
キーワード:私/CFS; テトラヒドロビオプテリン。 起立不耐症。 小線維性多発ニューロパチー。 内皮NOS; 活性酸素種
1. はじめに
筋痛性脳脊髄炎/慢性疲労症候群 (ME/CFS) は、衰弱性の筋肉疲労、痛み、めまい、および脳霧を特徴とする慢性多系統疾患です [1、2]。 ME/CFS 患者の一部は重度の起立性低血圧 [3] を示し、直立状態で立っているときにめまいや失神を引き起こす血圧の大幅な低下を特徴とします [4]。 この状態は、多くの場合、起立性不耐症 (OI) と呼ばれます。 OI 患者の一部は、皮膚生検サンプルのアミロイドーシスに対するコンゴレッド染色を使用して診断される小線維性多発ニューロパチーの診断基準 [5,6] も満たします [7]。 熱心な研究にもかかわらず、OI の分子機構は不明です。
BH4 はアミノ酸代謝の重要な補因子です [8]。 フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンなどのアミノ酸は、ヒドロキシラーゼ酵素の作用によって重要な細胞中間体に変換されます。 BH4 は、これらすべてのヒドロキシラーゼ酵素の必須の補因子として機能します [9-11]。 したがって、BH4 の生物学的利用能は、ドーパミンやセロトニンなどの神経伝達物質の合成にとって重要です [10]。 これらのヒドロキシラーゼ酵素とは別に、BH4 は一酸化窒素シンターゼ酵素の機能も調節し、内皮における一酸化窒素 (NO) の生成を制御します [12]。 内皮による NO の産生は、血管拡張反応を強化し、血圧を低下させ、筋肉の弛緩を助けます [13、14]。 一方、酸化ストレスの存在下では、BH4 は eNOS 誘導性 NO 生成から切り離され [15]、心臓組織 [16] および骨格筋 [17] におけるミトコンドリア ストレス応答を直接増強します。 したがって、BH4 代謝の調節は心血管機能と循環器の健康にとって重要です。 OI 患者は心血管異常を示すと報告されているため、OI 患者が BH4 代謝を変化させているかどうかを研究することに興味があります。 これまで、CFS における BH4 代謝の役割を調査した研究はありませんでした。 さらに、我々の研究では、OIを有するCFS患者がBH4生合成を変化させたかどうかも調査している。
66 人の被験者の血清サンプルが研究に含まれ、n=32 CFS と n=34 対照が含まれました。 二重盲検定量的ELISAを実施して、健康な対照とCFS患者の間でBH4レベルを比較した。 興味深いことに、我々は、健康な対照と比較して、CFS患者においてBH4の強い上方制御があることを観察した。 OI のある CFS 患者 (n=10) と年齢/性別が一致した対照 (n=10) の間で BH4 レベルを比較すると、OI のある CFS 患者の BH4 レベルが有意に高いことも観察されました。血清中のBH4。 まとめると、我々の現在の原稿は、CFS患者における血清BH4の上昇がOIの発症に重要な役割を果たしている可能性があることを強調している。
2. 結果
研究に含まれた被験者: 血清サンプル中の BH4 レベルを定量化するために、合計 66 人のヒト被験者が研究に含まれました。 表 1 は、これらの被験者の年齢、性別、民族、既往症をまとめたものです。 対照群の 4 人の被験者は癌関連の合併症を患っていたため、最終分析から除外されました。 対照群の最低年齢、中央値、最高年齢はそれぞれ 18 歳、64.5 歳、82 歳です。 CFS グループの場合、これらの値は 26、59、および 76 歳です。 両方のグループの年齢の度数分布プロットは同様の歪度を示し、その後のブランド・アルトマン分析テストでは差の平均がゼロに近いことが明らかになり、年齢に関する偏りがないことが示唆されました。 対照群は男性 44%、女性 56% で構成されていたのに対し、CFS グループは男性 41%、女性 59% で構成されていました。 患者は全員白人で、地理的にはネバダ州北部とカリフォルニア州に住んでいた。
ME/CFS 患者集団は、カナダの 2003 年および Fakuda の ME/CFS 基準に基づいて登録されました。 彼らはまた、SCID (医学研究所によって確立された ME/CFS の新しい名前) の診断基準も満たしていました。 対照は、ピーターソン医師の内科クリニックの患者とともに招待されたCFS被験者と年齢/性別を一致させた。
CFS + OI および CFS + OI_SFN サブセットは、診断検査記録 (カルテのレビューが完了) と臨床相関によって確立されました。 例えば、OI患者はNASAリーンテストの修正陽性結果（OIを示す）を持って来院し、全員がIV容量拡張療法（生理食塩水）を受けた。 SFN患者は生検サンプルを採取しました。 含まれる CFS + OI + SFN 被験者については、外側足首筋組織で神経突起密度をカウントするためのコンゴレッド染色が行われたマサチューセッツ総合病院のレポートが記録されました。
ME/CFS 患者の血清サンプルでは BH4 レベルが高い：合計 32 人の CFS 被験者と 34 人の対照被験者がこの研究に含まれ（表 1）、競合 ELISA によって血清 BH4 レベルが測定されました。 BH4 ELISA の標準曲線は、BH4 標準の 6 つの漸増濃度 (5、10、25、50、10{{52) から導出された負の勾配の指数曲線でした。 }}、および 150 ng/mL)。 標準曲線の傾きと切片を使用して、OD 値から BH4 の絶対レベルを測定しました。 血清サンプルの段階希釈とその後の BH4 ELISA アッセイにより、血清の 1:2 希釈がブランクまたはバックグラウンドと比較して最もコントラストの高い結果を提供することが明らかになりました。 したがって、すべての血清サンプルを 1:2 希釈に供しました。 興味深いことに、二重盲検 ELISA 分析とそれに続くノンパラメトリック マンホイットニー U 検定 [* p < 0.05 (=0.033); U= 304.5]は、n=28人の対照被験者と比較して、n=32人のCFS患者のBH4レベルが有意に高かったことを明らかにしました（図1A）。 対照群の 4 人の被験者 (n=4) は、既存のがんのため除外されました。 被験者は年齢や性別に関係なくランダムに含まれていたため、次にBH4レベルと被験者の年齢および性別との相関を分析したいと考えました。 したがって、ノンパラメトリックなスピアマン相関分析（図1B）により、BH4レベルと被験者の年齢の間に相関がないことが明らかになりました（スピアマン r=-0.1657; p=0.1835）。 次に、男性と女性の被験者間の BH4 レベルを比較しました (図 1C)。 男性と女性 (エフェクター #1 は性別) の間、および対照と CFS (エフェクター #2 は健康状態) の間の有意性を評価するために、二元配置 ANOVA 分析を実行しました。 したがって、男性と女性の被験者はBH4レベルに有意差を示さなかった(p > 0.05; =0.3496)。 しかし、性差に関係なく、対照被験者とCFS被験者の間にはBH4に有意差がありました(p < 0.05; =0.0375)。
現在のコホートは同じ地理的地域、民族性、および単一の医師の診療の下で厳しく制限されているため、年齢と性別が一致する症例と対照間のBH4のペアワイズ比較分析がより決定的になるでしょう。 合計 15 ペアを比較しました (図 1D)。 ノンパラメトリックなウィルコクソン対応ペア符号付順位検定により、CFS 患者の BH4 が有意に高いことが明らかになりました (** p<0.01; =0.0015) than age- and gender-matched controls. Collectively, our results suggest that the BH4 level is significantly higher in CFS patients compared to healthy control subjects, irrespective of age and gender differences.
CFS patients with OI have upregulated levels of BH4 in serum: Next, we wanted to analyze BH4 levels between control (n = 10) and CFS patients with OI (n = 10). An unpaired t-test revealed that CFS + OI patients had significantly higher BH4 [t1,18 = 2.499; * p < 0.05 (=0.0223)] levels compared to control subjects (Figure 2A). Table 2 displays that all controls were carefully matched with CFS + OI subjects in terms of age and gender. Moreover, a Kolmogorov–Smirnov normality distribution analysis followed by a Q-Q (quantile-quantile) plot (Figure 2B) indicated that all data points were normally distributed [p >アルファ ({{0}.05)]。 すべての CFS サンプルと対照サンプルは年齢と性別と一致しているため、一対の比較分析を実行しました。 その後の対応のある t 検定 (t1、9=3.834; ** p < 0.01=0.004) は、CFS + OI 血清サンプルが対照血清サンプルと比較して有意に高い BH4 を有することを示しました (図 2C) ）。 累積カラム統計テスト (図 2D) により、CFS + OI 患者 10 人中 7 人が中央値 (=99.63 ng/mL) よりも有意に高い BH4 レベルを有していたことがさらに明らかになりました。 一方、BH4 が中央値よりも高かったのは、10 人の対照被験者のうち 2 人だけでした。 総合すると、これらのデータは、CFS + OI 患者の BH4 が対照被験者と比較して有意に高いことを示唆しています。
CFS 患者のサブセット (n=12) は OI と SFN の両方を患っています。 健康な対照とCFS + OI + SFN被験者間のBH4レベルの比較(図3A)により、CFS + OI + SFN患者のBH4レベルが有意に高いことが明らかになった[t1,22=2.371; *p<0.05 (=0.0269)]. Table 3 shows that the cohort of 24 serum samples (n = 12 Control + n = 12 CFS + OI + SFN) was carefully selected based on age and gender. Subsequently, a Q-Q plot demonstrated all data points from both groups were normally distributed (Figure 3B). Since all subjects were matched in terms of age and gender, a paired analysis of control and CFS + OI + SFN subjects was performed. Accordingly, a significant difference in BH4 expression (* p < 0.05) was observed between these two groups (Figure 3C). A cumulative statistical analysis (Figure 3D) further indicated that n = 6 CFS + OI + SFN patients and n = 3 controls have higher BH4 levels than the median (=81.83 ng/mL) suggesting that the BH4 level is strongly elevated in serum samples of CFS + OI + SFN subjects.
CFS 単独患者と CFS + OI 患者の間で BH4 レベルを比較すると、CFS + OI 患者 (n=14) の血清サンプルでは、対照被験者 (n {{ 6}}）。 QQ プロット分析は、データの分布が両方のグループで正規であることを示し (図 4B)、平均を比較するためにパラメトリック検定を採用できることを示唆しています。 したがって、グループ間の平均の有意性を分析するための対応のない t 検定により、強い差異が明らかになりました [t1,22=2.592; * p < 0.05 (=0.0166)]。 選択したコホート (n=22) の列統計は、CFS + OI 患者 14 人中 9 人が中央値 119.7 ng/mL と比較して血清 BH4 レベルが高いことを示しました (図 4C)。 総合すると、我々の結果は、OIを有するCFS患者の血清中のBH4レベルが上昇していることを示唆している。 まとめると、我々の現在の原稿は、CFS + OI および CFS + OI + SFN 患者の潜在的な血液由来バイオマーカーとして BH4 を特定しています。
BH4 レベルの上昇は、酸化ストレスの増加と関連している可能性があります。血清中の BH4 上昇の機能的重要性を理解するために、OI を有する CFS 患者 (n=10) の血清サンプルの ROS 誘導能力を調査しました。 DCFDAを注入したミクログリア細胞を、10 CFS + OIおよび10人の年齢/性別が一致した対照からの1:2希釈血清サンプルで90分間処理した後、蛍光プレートリーダーを使用してROS産生を測定しました（例：Em { {12}} nm/535 nm）は、材料と方法のセクションで説明されているとおりです。 我々が以前に報告したように[18]、ヒストグラム分析は、CFS + OI血清サンプルのROS産生能力が対照血清サンプルよりも有意に高いことを示した(図5A) [t1,18=2.541; p < 0.05 (=0.0205)]。 両方のグループのすべてのデータ ポイントが正規分布しているため (図 5B)、パラメトリック検定を実行してグループ間の平均の有意性を調べました。 興味深いことに、このコホートにおけるピアソン相関統計分析により、BH4 レベルと ROS 産生の間に中程度の正の相関が存在することが明らかになり、CFS + OI 血清サンプル中の BH4 レベルの上昇が酸化反応の増加と関連している可能性があることが示唆されました (図 5C)。
まとめると、我々の現在の原稿は、CFS患者は血清中のBH4レベルの上昇と関連しており、上方制御はOIを有するCFS患者でより顕著に観察されたことを強調している。 さらに、BH4 の上昇は酸化ストレス応答と関連している可能性があり、CFS および OI を伴う CFS の発症における BH4 代謝の潜在的な役割を強調しています (図 5D)。
3. ディスカッション
テトラヒドロビオプテリン (BH4) 生合成は、健康において厳密に制御された代謝プロセスであり、その異常な発現は一連の疾患に関連しています。 その欠乏は、アミノ酸代謝の代謝欠陥[19,20]、ドーパミン調節の障害[21]、血流の障害[22,23]を引き起こし、高血圧、糖尿病、アテローム性動脈硬化、老化、および他の代謝障害。 一方、上方制御された BH4 生合成は、ミトコンドリアのエネルギー生成を損ない [24]、酸化ストレス [25] を誘発し、オートファジー障害を増大させます [26]。 BH4 の上昇は、内皮 NOS の活性化を介して血管拡張反応を誘導することにより、血圧の低下にも関連しています [27]。 したがって、BH4 の生合成の上方制御は、血圧または低血圧の低下を直接促進する可能性があります。 研究では、BH4 の欠乏がマウスの LPS 誘発性低血圧を軽減することが示唆されています [23]。 これまで、CFS 患者、特に OI を伴う CFS 患者における BH4 代謝の役割は調査されていませんでした。 したがって、我々の目標は、この患者集団における血清 BH4 発現を評価することでした。 驚くべきことに、我々のELISA分析により、CFS患者からの血清サンプルは、年齢と性別が一致した健康な対照被験者と比較して、有意に高いBH4レベルを有していたことが明らかになった。 したがって、スピアマン相関統計は、年齢と性別のいずれに関してもBH4アップレギュレーションに有意な相関関係がないことを示し、これらの患者における年齢または性別に関連したBH4生合成障害の可能性を無効にしました。
次に、CFS + OI 患者の血清サンプルも、年齢と性別が一致した対照の血清サンプルと比較して、BH4 の強い上昇を示したことを観察しました。 我々の累積カラム統計により、CFS + OI 患者 10 人中 7 人で BH4 レベルが著しく高かったことが明らかになり、血清中の BH4 上昇が OI の発症に関連している可能性が示唆されました。 この結果は、小線維多発性ニューロパチー（SFN）を有するCFS + OI患者のサブセットも、年齢と性別が一致した対照と比較して血清サンプル中でBH4の高い発現を示したことでさらに裏付けられた。 興味深いことに、CFS のみと OI を伴う CFS 患者の間の血清 BH4 レベルの比較により、OI 患者では BH4 レベルが有意に上昇していることが実証されました。
BH4の上昇はME/CFSの発症にどのように寄与するのでしょうか? BH4 の上昇が ME/CFS の発症に直接寄与する経路は複数あります (図 5D)。 まず、BH4 の上方制御は、電子伝達鎖の複合体 I および IV の阻害を介してミトコンドリアのエネルギー代謝障害を引き起こし、その結果、ミトコンドリア膜電位の低下、シトクロム C の放出、およびアポトーシスを引き起こすことが報告されています [24]。 BH4 への曝露は酸化ストレスを引き起こすことも報告されています [29]。 生理学的には、BH4 は eNOS 活性化による内皮 NO 生成をサポートしますが、スーパーオキシドによる BH4 の酸化により BH4 が eNOS から切り離され、心臓組織に酸化ストレスが与えられ、心血管の健康に影響を及ぼします (図 5C)。 これを裏付けるように、我々の結果は、CFS + OI 血清サンプル中の BH4 レベルの上昇が ROS 誘導能力と正の相関関係があることを実証しました。 さらに、BH4 は哺乳類のラパマイシン複合体 1 (mTORC1) キナーゼの標的も活性化し、オートファジーを障害します。 以前、我々は、mTORC1の活性化とその後のオートファジーの障害がME/CFSの病因に関連している可能性があることを報告しました。 mTORC1- 依存性のオートファジー障害 [18] とエネルギー代謝のミトコンドリア欠損 [30] の両方が、ME/CFS の発症に寄与することが報告されています。 したがって、ME/CFS 患者の血清サンプル中の BH4 レベルの上昇は、CFS 患者における酸化ストレスを誘発し、eNOS 脱共役を増強し、続いて心血管ストレス、低血圧、ミトコンドリア毒性、オートファジー障害を引き起こす可能性があります。
4. 材料と方法
サンプルの取得: サンプルの取得、匿名化、および保管計画については以前に議論されました [18]。 簡単に説明すると、血液サンプルとアンケート データは、ダニエル ピーターソン博士 (シエラ内科、インクライン ビレッジ、ネバダ州、米国) (Western IRB) #20201812 の監督の下で収集されました。 血液サンプルを遠心分離し、血清サンプルを等分して、すぐに -80 °C で凍結しました。 各サンプルには固有の識別番号が与えられ、IRB が承認したプロトコルに従って、日付と署名とともにノートブックと Microsoft Excel の両方に記録されました。 その後、サンプルはドライアイスで一晩かけてウィスコンシン州の研究施設に届けられました。 サンプルを受け取ったら、すぐに処理して分析しました。 アンケートと匿名化された臨床データは、Sierra Internal Medicine の研究スタッフと臨床フェローが管理する安全でアクセスが制限された Redcap サーバー データベースに保存されます。 患者記録は、Sierra Internal Medicine が定めたプライバシー ポリシー ガイドラインに従って保管されました。 OI および OI + SFN グループの ME/CFS 患者のサブセットは、ブラインド チャート レビューを使用して確立され、検査後の分析は臨床 PI によって確認されました。 4 人の癌患者はこの分析に盲目的に組み込まれ、疾患陽性対照として機能しました。
OIの診断基準には、臨床カルテレビューからの関連所見（心臓傾斜表の結果）が含まれていました。 さらに、採血時に臨床研究員は NASA のリーン分析を完了しました。 SFNの診断は、臨床カルテのレビューと脛骨前部から採取した皮膚パンチ生検の組織学的検査によって確立されました。 皮膚生検は、皮膚表面積の神経突起密度を研究するために表皮神経終末の形態計測的定量化のためにマサチューセッツ総合病院で独立して評価されました。
BH4 競合 ELISA: メーカーの指示に従って、ME-CFS 患者および年齢が一致した健康な対照の血清サンプル中の BH4 レベルを測定および定量しました (ヒト BH4 競合 ELISA キット; ベンダー: MyBioSource, Inc, San Diego, CA 92195, USA; Cat ＃MBS733839）。 このキットは当社の研究室 (Perkin Elmer Victor X3 マルチモーダル プレート リーダー、Perkin Elmer、米国マサチューセッツ州ウォルサム) で検証され、標準曲線 (R2=0.98) と 1 ng/mL の低い感度を備えていました。ポジティブコントロールに関する濃度。 簡単に説明すると、血清サンプルをアッセイ希釈液 (または 1 × PBS) で希釈し、ポリクローナル抗 BH4 抗体でプレコーティングされたマイクロプレート上にピペットで移しました。 サンプルと 30 分間インキュベートした後、BH4-HRP コンジュゲートをプレートに添加し、37 °C でさらに 1 時間インキュベートしました。 残留血清サンプルをデカントし、マルチチャンネルピペットを使用してプレート上で1×洗浄緩衝液(あるいは1×PBS-T)で5分間、3回洗浄した。 洗浄後、各ウェルを暗所で10分間TMB基質と反応させた。 発色は、振とう条件下での基質の 10 分間のインキュベーション後に起こります。 BH4-HRP コンジュゲートは、コーティングされた一次抗体に結合するために血清 BH4 と競合します。 したがって、サンプル中の血清 BH4 が多ければ多いほど、BH4-HRP 結合が少なくなり、生成される色も少なくなります。 合計66の血清サンプル（34の対照+ 32 ME-CFS患者）が適切な施設規制ガイドラインに従って取得され（詳細は「サンプルの取得」セクション）、GLP条件下で分析されました。 「サンプルサイズの正当化」セクションで説明したように、サンプル分布はランダムであり、アッセイは二重盲検で行われました。
サンプル サイズの正当化と統計分析: サンプル サイズは、次の式を使用して正当化されました。 サンプルサイズ {{0}} n=z2p(1−p)/ε2=1.282∗0.95∗(1−0。 95)/0.052=32。 Z は z スコアで、検出力 0.8 の場合は 1.28 です。 p は人口比率です。 95% 信頼区間の場合、p は {{20}}.95 になります。 ε は誤差の範囲であり、0.05 です。 したがって、p < 0.05 でグループ間の平均の差の有意性を達成するために、グループごとに合計 n=32 個のサンプルが含まれました。 対照患者と CFS + OI 患者との比較のために、グループあたり n=10 個のサンプルが含まれました。 対照群と対照＋ＯＩ＋ＳＦＮ群を比較する際には、同様のサンプルサイズが含まれた。 サンプル サイズの計算は、ε=0.05 および p=0.99 に基づいて実行されました。 2 つのグループが同一で正規のデータ分布を示した場合は常に、2 つのグループ間の平均の有意性を検定するために、ノンパラメトリック マン-ホイットニー U 検定が採用されました。 それ以外の場合は、パラメトリック対応のない t 検定が実行されました。 グループ間の対応のある分析では、両方のグループからのデータ ポイントが正規分布している場合、パラメトリックな対応のある t 検定が実行されました。 それ以外の場合は、グループ間の有意性を評価するためにウィルコクソン順位検定を実行しました。 事後ボンフェローニまたはテューキーを用いた二元配置分散分析を適用して、性別 (男性または女性) と健康 (健康または CFS) をエフェクターとして考慮した 2 つ以上のグループの平均の有意性を検定しました。 すべての統計分析は、GraphPad Prism バージョン 9.5.1 (733) ソフトウェア (Boston, MA 02110, USA) で実行されました。
ROS アッセイ:HMC3 ヒト胚性ミクログリア細胞を完全 DMEM 培地で増殖および継代しました。 簡単に説明すると、ROS 蛍光分析研究のために、HMC3 細胞を 96 ウェル プレートに播種しました。 細胞を 75 ～ 80% コンフルエンシーまで増殖させ、DCFDA プローブ (カタログ番号 ab113851; Abcam、ケンブリッジ、英国) とともに暗所、37 °C で 45 分間インキュベートしました。 最適な蛍光値を達成するために、標準培地を 100 μL (1:2 希釈=50 μL 血清 + 50 μL 培地) の血清添加培地と 90 分間交換しました。 インキュベーション期間の終わりに培地を吸引し、PerkinElmer Victor X3 プレートリーダー (Perkin Elmer、米国マサチューセッツ州ウォルサム) の 485 nm および 535 nm フィルターセットを使用して励起発光を測定しました。
著者の寄稿:AR はアイデアを思いつき、デザインし、調査を実施し、原稿を書きました。 CGG は調査を実施し、原稿を執筆しました。 RW は血液サンプルの収集と患者の記録の保管を手伝いました。 DP は臨床 PI であり、生体試料の収集、アンケート、治験審査委員会の承認を担当していました。 すべての著者は原稿の出版版を読み、同意しました。
資金提供:この研究は、Ramsay Award 2023 から AR by Solve ME イニシアチブおよびヘッセ シビラ財団、ケベック州、ケベック州、カナダへの資金の結果として、非営利の 501C 研究組織である Simmaron Research Inc. (所在地 NV 89451、Incline Village) によって支援されました。
治験審査委員会の声明:画像やテキストを含むこの研究論文のいかなる部分も、これまでに書籍、論文、その他の出版文献で公開または複製されたことはありません。 画像はオリジナルであり、他のソースからコピーされたものではありません。 これは臨床試験ではなく、施設内観察研究です。 生体試料の収集、アンケートのガイドライン、記録の保管、および固有の識別番号の生成は、ウェスタン IRB、プロトコル #20201812 (現在の更新日 #7/21/23) によって実行されました。
インフォームド・コンセントの声明:すべての著者は、このレビュー記事を公開することに同意しました。
データの可用性に関する声明:この文書に関連する電子データシートはありません。 電子リポジトリにデータがありません。
利益相反:AR、CGG、RW、および DP は、501C 非営利研究組織である Simmaron Research INC の従業員です。 著者は利益相反がないことを宣言します。
略語
ME/CFS=筋痛性脳脊髄炎または慢性疲労症候群。 OI=起立性不耐症; SFN=小線維多発性神経障害; BH4=テトラヒドロビオプテリン; eNOS=内皮一酸化窒素合成酵素。 NO=一酸化窒素。 ROS=活性酸素種。 ME/CFS=筋痛性脳脊髄炎または慢性疲労症候群。 OI=起立性不耐症; SFN=小線維多発性神経障害; BH4=テトラヒドロビオプテリン; eNOS=内皮一酸化窒素合成酵素。 NO=一酸化窒素; ROS=活性酸素種。
参考文献
1. リム、EJ; アン、YC; ジャン、ES; サウスウェールズ州リー。 リー、SH; Son、CG 慢性疲労症候群/筋痛性脳脊髄炎 (CFS/ME) の有病率に関する系統的レビューとメタ分析。 Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ． 医学。 2020、18、100。 [CrossRef]
2. 息子、C.-G. 世界中の慢性疲労の蔓延に関するレビュー。 J.韓国医学。 2012、33、25–33。
3. バージニア州ナテルソン; リン、J.-MS; ブレート、M. カーン、S. チェン、Y。 Unger、ER 慢性疲労症候群における起立不耐症の生理学的評価。 Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ． 医学。 2022、20、95。[相互参照]
4. ベイトマン、L. ベステッド、AC。 ボニラ、HF; チェダ、BV; チュー、Ｌ． カーティン、JM。 デンプシー、TT; メイン州ディモック。 ダウェル、TG; Felsenstein, D. 筋痛性脳脊髄炎/慢性疲労症候群: 診断と管理の要点。 メイヨークリニックの議事録にて。 エルゼビア：オランダ、アムステルダム、2021年。 2861–2878ページ。
5. ニューヨーク州バサンツヴァ。 スターシノバ、AA。 ドリ、A. ジンチェンコ、YS; ヤブロンスキー、PK; Shoenfeld, Y. 小線維性神経障害の定義、診断、治療。 ニューロール。 科学。 2019、40、1343–1350。 [相互参照]
6. ショーンフェルド、Y. リャブコバ、バージニア州。 シャイベンボーゲン、Ｃ． ブランチ、L. マルティネス・ラビン、M. 池田真也; ハイデッケ、H. ワタッド、A. ブラガッツィ、ニュージャージー州。 Chapman, J. 自己免疫性自律神経失調症および小線維性神経障害に関連する慢性疼痛、疲労、認知障害の複合症候群。 クリン。 イムノール。 2020、214、108384。[相互参照]
7. レオナルディ、L. アダム、C. ボードネ、G. ボーヴェ、D. コーキル、C. 違います、A。 モラッシ、O. ベンマレク、A. トラサード、O. エカニズラグナ、A. 他。 遺伝性トランスサイレチンアミロイドーシスにおける神経障害の発症と進行のマーカーとしての皮膚のアミロイド沈着と神経線維の喪失。 ユーロ。 Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ． 2022、29、1477–1487。 [相互参照] [PubMed]
一ノ瀬博、 8． 野村哲也; スミ・イチノセ、C. テトラヒドロビオプテリンの代謝: モノアミン作動性ニューロンおよび神経障害との関連性。 化学。 記録 2008、8、378–385。 [相互参照] [PubMed]
9. 夏、T。 グレイ、ワシントン州。 Shiman、R. ラット肝臓フェニルアラニンヒドロキシラーゼの制御。 Ⅲ． (6R)-テトラヒドロビオプテリンとフェニルアラニンによる触媒作用の制御。 Ｊ．Ｂｉｏｌ． 化学。 1994、269、24657–24665。 [相互参照]
長津哲也; 10． Nagatsu, I. パーキンソン病 (PD) の薬物治療と遺伝子治療に関するチロシンヒドロキシラーゼ (TH)、その補因子テトラヒドロビオプテリン (BH4)、その他のカテコールアミン関連酵素、およびそれらのヒト遺伝子: 歴史的概要と展望。 J. Neural Transm. 2016、123、1255–1278。 [相互参照]
11. 澤田正人； 杉本哲也; 松浦真司； Nagatsu, T. (6R)-テトラヒドロビオプテリンは、ラット縫線切片におけるトリプトファンヒドロキシラーゼの活性を増加させます。 Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． 1986、47、1544 ～ 1547 年。 [相互参照]
12. チェン博士、D.-D. チェン、L.-Y. 謝、J.-B. シュウ、Ｃ． ヤン、T. 周、Ｓ． ユアン、H. Chen、AF eNOS 酸化還元機能のテトラヒドロビオプテリン制御。 カー。 薬局。 デス。 2014、20、3554–3562。 [相互参照] [PubMed]
東 裕也; 13． 佐々木真司； 中川和也; 木村正人； ノーマ、Ｋ． 原 和也; 実樹、D. 後藤C. 大島 哲也; Chayama, K. テトラヒドロビオプテリンは、一酸化窒素生成の増加を通じて、加齢に伴う内皮依存性血管拡張の障害を改善します。 アテローム性動脈硬化 2006、186、390–395。 [相互参照]
14.WZ、ワン； ファング、XH; スティーブンソン、LL; キアバニ、KT; ワシントン州ザンボーニ 骨格筋における長期虚血後の BH4 補給の効果。 マイクロサージャリー 2007、27、200–205。 [相互参照]
15. ヤン、Y.-M. ファン、A. ケイリー、G. Sun, D. 老化した血管における eNOS 脱共役と内皮機能不全。 午前。 J. Physiol.-Heart Circ. 生理。 2009、297、H1829–H1836。 [相互参照]
16. カルバッハ、S. ウェンゼル、P. ワイズマン、A. マンゼル、T. Daiber, A. 心血管疾患における eNOS 脱共役 - 酸化ストレスと炎症の役割。 カー。 薬局。 デス。 2014、20、3579–3594。 [相互参照]
17.アラバマ州シンドラー。 メリーランド州デルプ、 レイエス、R. ウー、G. Muller-Delp、JM 骨格筋抵抗細動脈における eNOS 脱共役に対する加齢と運動トレーニングの影響。 Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ． 2009、587、3885–3897。 [相互参照]
18. ゴットシャルク、G. ピーターソン、D. ノックス、K。 メイナード、M. ウィーラン、RJ; Roy, A. ME/CFS 患者の血清中の ATG13 の上昇は、終末糖化産物受容体 (RAGE) の活性化を介してミクログリア細胞の酸化ストレス応答を刺激します。 モル。 細胞。 神経科学。 2022、120、103731。[CrossRef] [PubMed]
19. ブラウ、N. トニー、B. スパーダ、M. Ponzone, A. テトラヒドロビオプテリンと遺伝性高フェニルアラニン血症。 トルコ人。 J. Pediatr. 1996、38、19–35。 [パブメッド]
20. バーンバッカー、R. シャイベンライター、S. ブラウ、N. ビーグルマイヤー、C. フリッシュ、H. Waldhauser, F. 高プロラクチン血症、テトラヒドロビオプテリン欠乏症の治療管理のツール: 罹患した少女の内分泌研究。 小児科。 解像度 1998、43、472–477。 [相互参照]
21. ハイランド、K. カシム、Ｓ． 江上和也 アーノルド、L. Jinnah, H. レシュ・ナイハン病の遺伝的マウスモデルにおけるテトラヒドロビオプテリン欠乏症とドーパミン喪失。 J.継承します。 メタブ。 ディス。 2004、27、165–178。 [相互参照]
22. リー、L. チェン、W。 レズバン、A. ジョー、H。 Harrison, DG テトラヒドロビオプテリン欠損と一酸化窒素シンターゼの脱共役は、流れの乱れによって誘発されるアテローム性動脈硬化の一因となります。 動脈硬化。 血栓。 バスク。 バイオル。 2011、31、1547 ～ 1554 年。 [相互参照]
23.チュアイピチャイ、S. スター、A. ナンディ、M. ケンタッキー州シャノン。 McNeill, E. 内皮細胞のテトラヒドロビオプテリン欠乏は、LPS 誘発性の血管機能不全と低血圧を軽減します。 バスク。 薬理学。 2016、77、69–79。 [相互参照] [PubMed]
24. チョイ、HJ; リー、SY; チョー、Ｙ． いいえ、H。 サウスウェールズ州キム。 Hwang, O. テトラヒドロビオプテリンはドーパミン作動性細胞のミトコンドリア機能不全を引き起こす: パーキンソン病への影響。 神経化学。 内部。 2006、48、255–262。 [相互参照] [PubMed]
25. リー、SY; ムーン、Y。 ヒ・チョイ、D. ジン・チョイ、Ｈ． Hwang, O. テトラヒドロビオプテリンに対するラット中脳ドーパミン作動性ニューロンの特定の脆弱性: パーキンソン病との関連性。 ニューロビオール。 ディス。 2007、25、112–120。 [相互参照]
26. クァク、SS; スーク、J. チョイ、JH; ヤン、Ｓ． キム、JW。 ソン、S. チョン、JH; ホン、YH; リー、DH。 アン、JK。 他。 テトラヒドロビオプテリン欠損によるオートファジーの誘導。 オートファジー 2011、7、1323–1334。 [相互参照] [PubMed]
27. ポーカート、M. シャー、S. アメリカ、レディ。 チーマ、F. ネスナー、Ｃ． コルム、P. ジョーンズ、DP; フーパー、C. テイラー、WR。 ハリソン、Ｄ． 他。 テトラヒドロビオプテリン: 新しい降圧療法。 J. ハム。 高血圧。 2008、22、401–407。 [相互参照] [PubMed]
28. Channon, K. テトラヒドロビオプテリン：血管疾患における内皮一酸化窒素合成酵素の調節因子。 心臓血管のトレンド。 医学。 2004、14、323–327。 [相互参照]
29. フォン、Y. フェン、Y. グー、Ｌ． リュー、P. カオ、J. Zhang, S. 放射線感受性の調節におけるテトラヒドロビオプテリン (BH4) 代謝の重要な役割: 天使または悪魔としての BH4/NOS 軸。 フロント。 オンコル。 2021、11、720632。 [CrossRef]
30. アーカンソー州マンダラノ。 マヤ、J. ジロトー、L. DL州ピーターソン。 メイナード、M. ゴットシャルク、CG; Hanson, MR 筋痛性脳脊髄炎/慢性疲労症候群の患者は、T 細胞代謝とサイトカイン関連の変化を示します。 Ｊ．クリン． 調査します。 2020、130、1491–1505。 [相互参照] [PubMed]
免責事項/発行者注:すべての出版物に含まれる声明、意見、およびデータは、個々の著者および寄稿者のみのものであり、MDPI および/または編集者のものではありません。 MDPI および/または編集者は、コンテンツ内で言及されているアイデア、方法、指示、または製品に起因する人や財産への損害について責任を負いません。
【詳細情報:george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:8613632399501】
