カンカのアクテオシドとエキナコシドの測定
Apr 27, 2023
[概要]目的：高速液体クロマトグラフィーによるカンカの薬効成分（薬効成分ステート側とエキナセア側）の定量法を構築する。 カンカの 2 つの生息地、4 つの宿主、および 4 つのバッチの主成分含有量を比較します。 カンカ類の利用に関する科学的証拠を提供すること。 方法: Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm、5 μm) クロマトグラフィー カラムを使用。 移動相: メタノール、アセトニトリル-1 パーセント酢酸 (14∶9∶77)。 流量: 1.0 mL・min-1; 検出波長は334nm。 カラム温度は 30 度でした。 結果: 2 つの成分は、テストで標準曲線の良好な直線範囲を持っていました (r=0.999,9)。 平均回収率は 96.89 パーセントと 100.7 パーセントで、RSD パーセントは 0.91 パーセントと 1.96 パーセントでした。 分析の結果、Cistanche tubulosa の異なる地域、バッチ、宿主における主な有効成分の含有量 (ステートサイドとエキナコシド) の間に有意な差があることが示されました。 結論: この方法はシンプル、正確、再現可能です。 これは、Cistanche tubulosa の薬効の実験的根拠を提供します。
【キーワード】 カンクイ。 アクテオシド; エキナコシド; 内容決定
カンクサの実験
【さらに質問する】 メール:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
カンクサは「神農マテリアメディカクラシック」に初めて記録され、腎臓の強壮と陽を強化する処方で最も頻繁に使用される薬の1つです。 近年、キスタンケ・デスティコーラの大規模な発掘により、野生資源が急速に減少しています。 カンクサの代替品として、新疆ウイグル自治区で生産される管状花カンクサが国内の供給量の60パーセントを占めている。
カンサス粉末
エキナコシドやエルゴステロール配糖体などのフェニルエタノール配糖体は、Cistanche tubulosa の主要な薬理学的成分の 1 つです。 エキノシドには、神経保護効果 [3]、骨保護効果 [4]、および老化防止効果 [5] があります。 エルゴステロシドには、記憶障害の改善、アルツハイマー病の治療、アンドロゲン様作用があります。 管状キスタンシュ: 紅流大雲としても知られ、タマリクス L. [8-9] のさまざまな植物が宿主となります。 著者は HPLC 法を使用して、Cistanche desserticola に含まれる上記 2 つの成分の含有量を測定しました。 測定方法と結果は、この薬の品質管理と薬効に科学的根拠を提供します。
フェニルエタノール配糖体はCistanche desserticolaの主な有効成分です
1 器具と検査薬
試薬および試験薬: エキナセチン (バッチ番号 111670-200401)、エルゴステロール (バッチ番号 111530-200505)、中国医薬品生物製品管理研究所から提供された参照物質。 アセトニトリルとメタノールはクロマトグラフィー的に純粋ですが、水は超純水です。 他のすべての試薬は分析的に純粋です。 カンクサのすべての薬用材料は、内モンゴル医科大学の Ju Aihua 教授によって収集され、特定されました。 機器: American Agilent 1100 高速液体クロマトグラフィー。
2 方法と結果
2.1 クロマトグラフィー条件とシステム適応性テスト
クロマトグラフィーカラム: Kromasil C18 クロマトグラフィーカラム (4.6 mm × 250 mm、5 μ m); 移動相: アセトニトリル メタノール 1% 酢酸溶液 (9:14:77); 検出波長: 334 nm; フロー速度: 1.0 mL · min-1; カラム温度 30 度; 注入量 20 μ L. エキナセア配糖体の計算に基づく理論プレート数は 5000 未満であってはなりません. 2 つの薬理成分の分離度隣接するピークからの分離度が 1.5 を超えており、良好です (図 1-3 を参照)
図 1 エキナセチン標準物質のクロマトグラム
図2 エルゴステロール標準物質のクロマトグラム
図 3 カンクのクロマトグラム
2.2 試料溶液の調製
約 0.5 g のキスタンケ デスティコーラ パウダー (60 メッシュのふるいにかけたもの) を正確に量り、100 mL の茶色の三角フラスコに入れます。 移動相 50 mL を正確に加え、質量を量り、40 分間超音波処理し、室温に置きます。 再度質量を量り、移動相を使用して重量損失を補い、よく振って濾過し、濾液を再度取り出し、脇に置きます。
2.3 参照溶液の調製
適切な量のエキナセチンおよびエルゴステロール標準物質を正確に秤量し、移動相を加えて、1 mL あたり約 {{0}} エキナセチン 0.14 mg およびエルゴステロール 0.10 mg をそれぞれ含む溶液を調製します。
2.4 線形関係の検査
エキナセア標準物質 6.4 mg とエルゴステロール標準物質 3.0 mg をそれぞれ正確に量り、10 mL メスフラスコに入れ、移動相で希釈し、均一に振ります。 0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0 mL を正確に吸引しますそれぞれを 5 mL メスフラスコに移し、移動相で目盛りまで希釈し、振盪します。 それぞれ 20 μ L サンプルを注入し、上記のクロマトグラフィー条件に従って測定します。 Y 軸はピーク面積を表し、X 軸は注入量を表します。 標準曲線を描きます。 測定データは、エキナセチンの量が 0.26 μ g-7.75 μであることを示しています。ピーク面積と g 間の注入量の間に良好な線形関係があり、回帰式は Y=831.41X21 です。 88、R2=0.9999; エルゴステロール配糖体の量は 0.30 μ g-7.50 μ です。ピーク面積と g 間の注入量の間に良好な線形関係があり、回帰式は Y=671.53X プラス 158.71, R{ {39}}.9999。
エキノシド、カンクサの主な化学成分
2.5 精度試験
上記薬用粉末｛｝｝｝．５ｇを正確に量り、「２．２」に記載の方法により試験液を調製し、連続６回注入し、２成分のピーク面積を記録する。 エキナコシドのピーク面積の RSD パーセントは 1.46 パーセントです。 エルゴステロール配糖体の含有量は 1.62% です。
2.6 安定性試験
試料粉末{{0}.5gをとり、「2.2」の方法に従って試験液を調製する。 準備後、0、1、2、4、8、12 時間後にサンプルを注入します。 結果は、エキナセチンのピーク面積の RSD パーセントが 1.5 パーセントであることを示しました。 エルゴステロール配糖体の含有量は2.0パーセントです。
2.7 再現性試験
新疆ホータン市ミンフェンで製造された同じバッチからの粉末サンプル 6 個を正確に計量します。それぞれの重量は約 0.5g です。 「2.2」の方法に従ってピーク面積を準備し測定します。 6 つのサンプルにおけるエキナコシドのピーク面積の RSD パーセントを 1.85 パーセント、エルゴステロールを 1.93 パーセントとして計算します。
2.8 サンプル添加・回収試験
新疆ホータン市ミンフェンで製造された同じバッチからの 6 つの薬用粉末サンプルを正確に計量します。各サンプルの重量は約 0.1 g です。 エキナセチンおよびエルゴステロールを一定量加え、「2.2」の方法に従って試験液を調製する。 平均回収率はそれぞれ96.89パーセントと100.7パーセントで、RSDパーセントはそれぞれ0.91パーセントと1.96パーセントでした。 (表 1-2 を参照)
表 1 パイナップル果汁グルコシド回収試験の結果
表2 エルゴステロール配糖体回収試験結果
2.9 サンプルの決定
各チューブからカンクの薬用粉末を取り出し、「2.2」の方法に従って操作します。 測定結果を表３に示す。
表 3 カンクサのエキナセチンおよびエルゴステロシドの測定
3 ディスカッション
3.1 移動相の選択
2 セットの移動相を比較しました。1) メタノール アセトニトリル 1% 酢酸溶液 (14:9:77)。 (2) メタノール: 1% ギ酸 (21.5:78.5)。 結果は、移動相 (1) を使用した溶出により、相対保持時間が中程度になり、不純物のピークが少なくなり、2 つの成分が良好に分離されることがわかりました。
3.2 抽出条件の選択
移動相を抽出溶媒として使用し、有効成分の含有量に及ぼすさまざまな抽出方法 (加熱還流、超音波) および抽出時間 (40 分、50 分) の影響を比較しました。 最終的に、50 分間加熱還流した後に最も高い含有量が測定されましたが、ピークの形状が悪いため選択の余地がないことがわかりました。 超音波40分と超音波50分では測定内容が類似しているため、抽出条件として超音波40分を選択した。
3.3 研究によると
漢方薬のカンクサ
宿主と生息地が異なると、カンクサのエキナコシドとエルゴステロールの含有量に大きな違いがあり、医薬品の品質が場所と宿主によって大きく影響されることを示しています。 したがって、カンカの起源、宿主、薬用原料の品質との相関関係を体系的に研究することは、最適な宿主植物の選択やカンカの品質評価を行う上で非常に重要である。
参照
[1] Chen Fei、Chen Zhuo、Xing Xuefei、他。 カンクサの研究の進捗状況 [J]。 医薬品評価研究、2013、36 (6): 469-475
[2] 宋海龍、賈暁光、謝海輝。 カンカの化学成分に関する研究の進展 [J]。 新疆伝統中国医学、2010、28 (01): 76-78
[3] ZHU M、LUC、LIW。 エキナコシドへの一時的な曝露は、Trk シグナル伝達を活性化し、神経細胞をロテノンから保護するのに十分です [J]。J Neurochem、2013、124(4): 571-580。 [4] LIF YANG X、YANG Y、他。卵巣摘出ラットにおけるエキナコシドの抗骨粗鬆症活性 [J].Phytomedicine、2013、20(6):549-557。
[5] XIE H、ZHU H、CHENG C、他。 エキナコシドはヒト線維芽細胞MRC-5[J]の細胞老化を遅らせます。 Pharmazie、2009、64(11):752-754。
[6] 朴景華、溥小平、馬建他。 セリアオシドによるスコポラミン誘発性記憶獲得障害の改善[J]。 中国薬理学報、2001 年、17 (6): 625-626
[7] ライ・チンハイ、ワン・リンリン、ディン・フイ、他。 カンクサによる骨粗鬆症の治療に関する研究の進歩 [J]。 遼寧中医学大学ジャーナル、2016、18 (3): 102-104
[8] Wang Changlin、Guo Yuhai、Tu Pengfei 他。 タマリクスのさまざまな種に寄生するカンガルーの RAPD 分析 [J]。 中国伝統中国医学雑誌、2009 年、34 (3): 264-268
[9] Huang Xiaofang、Xu Rong、Chen Jun、他。 カンクイの生息地の特徴、寄生機構、栄養輸送に関する研究状況と展望 [J] 中国伝統医学ジャーナル、2012 年、37 (19): 2831-2835
