Gam-COVID-Vacワクチン接種を受けた被験者の抗体反応の解剖は、SARS-CoV-2の中和におけるRBD外のエピトープの関与を示唆している
Oct 16, 2023
抽象的な： 何百万人もの人々がGam-COVID-Vacのワクチン接種を受けていますが、誘導された抗体の詳細な特異性は十分に研究されていません。 2019 年コロナウイルス感染症 (COVID-19) の未治療の被験者 12 名と回復期の被験者 10 名からの血漿を、Gam-COVID-Vac による 2 回の予防接種の前後で採取しました。 血漿サンプル中の抗体反応性（n=44）は、マイクロアレイ化された組換えフォールディングおよびアンフォールド重症急性呼吸器症候群コロナウイルス 2（SARS-CoV-2）タンパク質およびスパイクにまたがる 46 個のペプチドのパネルで研究されました。タンパク質（S）および免疫グロブリン G（IgG）サブクラス酵素結合免疫吸着検定法（ELISA）による。 Gam-COVID-Vac 誘導抗体が受容体結合ドメイン (RBD) とその受容体アンジオテンシン変換酵素 2 (ACE2) の結合を阻害する能力が分子相互作用アッセイ (MIA) で調査されました。 抗体のウイルス中和能力は、武漢湖-1とオミクロンの擬似型ウイルス中和試験(pVNT)によって研究されました。 Gam-COVID-Vacワクチン接種は、未治療者と回復期患者において同等の方法で、フォールドS、スパイクタンパク質サブユニット1（S1）、スパイクタンパク質サブユニット2（S2）、およびRBDに対する他のIgGサブクラスではなく、IgG1の有意な増加を誘導したことがわかりました。科目。 ウイルスの中和は、折り畳まれた RBD および新規ペプチド (すなわち、ペプチド 12) に特異的なワクチン接種誘発抗体と高度に相関していました。 ペプチド 12 は S1 の N 末端部分の RBD の近くに位置しており、スパイクタンパク質の融合前から融合後への立体構造の移行に潜在的に関与している可能性があります。 要約すると、Gam-COVID-Vacワクチン接種は、未治療の被験者と回復期の被験者に同等の方法でS特異的IgG1抗体を誘導しました。 RBDに特異的な抗体に加えて、RBDのN末端近くのペプチドに対して誘導された抗体もウイルスの中和に関連していた。
キーワード: SARS-CoV-2; 新型コロナウイルス-19; ガム-COVID-Vac; エピトープ; 抗体; ウイルスの中和。 分子相互作用アッセイ。 オミクロン
カンサスサプリメントの利点 - 免疫力の向上
Cistanche Enhance Immunity 製品を表示するにはここをクリックしてください
【さらに質問する】 メール:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
1. はじめに
2019年末に中国の武漢で重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2型（SARS-CoV-2）の最初の感染者が発生した後、新型コロナウイルス感染症（COVID-19）は急速に全土に蔓延しました。世界中に広がり、世界的なパンデミックに発展しました[1-4]。 新型コロナウイルス-19ワクチンの急速な開発と世界的なワクチン接種プログラムの導入は、低病原性のSARS-CoV-2変異種の出現とともに、新型コロナウイルス関連死亡の減少の重要な要因と考えられています。-19-そしてパンデミックの深刻さ[1,5]。 利用可能になった最初のワクチンは、SARS-CoV-2 表面タンパク質 S をコードする遺伝子のアデノウイルス媒介導入に基づく遺伝子ワクチンでした [6-8]。 SARS-CoV-2 S タンパク質は、ヒト細胞上の受容体 ACE2 に結合する受容体結合ドメイン (RBD) を含む S1 サブユニットと、タンパク質分解による切断によって宿主細胞膜へのウイルスの付着を確実にする S2 サブユニットで構成されます。ウイルス感染時の融合ペプチド (FP) [9]。 特定のアデノウイルスベースのワクチン（例：COVID-19ワクチンヤンセン）の遺伝子導入に使用されるS遺伝子は、タンパク質を安定化し、その切断に影響を与えるために修飾される可能性がありますが、これは他のワクチンには当てはまりません[10]。 S をコードする遺伝子を含むアデノウイルスに感染したヒト細胞は、さまざまな量の S 抗原を産生し、これが主要組織適合性複合体 (MHC) クラス II によって放出されて T 細胞に提示され、その結果 CD4+ T 細胞の助けがもたらされます。 S 特異的抗体の産生に使用されます。 トランスフェクトされた細胞によって発現される S タンパク質は、感染細胞の表面上の MHC クラス I によっても提示され、S 特異的細胞傷害性 CD8+ T 細胞の活性化を引き起こします。この細胞は、S 抗原産生細胞を認識して破壊することができます。 ワクチン接種の原理、すなわち、Sをコードする遺伝情報の宿主細胞への導入とその後の感染細胞によるS抗原の産生は、遺伝子導入の技術がアデノウイルスとは異なるものの、メッセンジャーリボ核酸（mRNA）ワクチンと似ています。ベースのワクチン。 したがって、「遺伝子ワクチン」は自然の SARS-CoV-2 感染をある程度模倣します。 ウイルスの中和に関与するワクチン接種対象者の抗体によって認識されるエピトープの同定は、既存のワクチンの作用機序を理解するだけでなく、新型コロナウイルスに対する洗練された能動ワクチン接種および受動免疫戦略の開発にとっても極めて重要である-19 [11] ,12]。 現在のワクチンのほとんどは、RBD 特異的抗体反応に特に注意を払い、S 特異的抗体反応を得ることに重点を置いています。これは、RBD 特異的抗体が SARS-CoV に対する高い中和活性と相関していることがわかっているためです-2 [ 13–15]。 しかし、それぞれの新たな懸念変異体（VOC）によって獲得された変異の数は、RBD内だけでなくRBD外にも存在する中和抗体の標的となるVOC間で保存されているエピトープを同定することの重要性を示している[16]。 実際、RBD の外側に中和エピトープが存在し、免疫化後に抗体によって認識されることを示す研究があります [17-20]。 2020 年に、スプートニク V とも呼ばれるベクターベースのワクチン Gam-COVID-Vac が臨床現場で使用できるようになり、現在 70 か国以上で使用が承認されています (https://sputnikvaccine.com/about-vaccine) / (2023 年 1 月 17 日にアクセス))。 Our World In Data (OWID) リソースによると、ロシアでは 7,900 万人が少なくとも 1 回のワクチン接種を受けており、7,200 万人が完全にワクチン接種を受けています (https://ourworldindata.org/covid-vaccinations?country= RUS (2022 年 3 月 22 日にアクセス))。 Gam-COVID-Vac は 2 種類のワクチンで構成されており、武漢湖-1 株 SARS-CoV{{ 73}}。 スプートニク V は 2 回の注射で構成されており、1 回目は hAd26 を使用し、2 回目は hAd5 とスプートニク ライトを使用し、hAd26 のみを使用します。 2 つの異なるアデノウイルス ベクターは、ワクチン接種対象がアデノウイルスに対する S タンパク質免疫に対する免疫を生成する可能性を減らすために、1 回目と 2 回目の免疫に使用されます。 実際、アデノウイルス特異的抗体は、アデノウイルスベクター媒体の中和により追加ワクチン接種の有効性を制限します。 したがって、rAd26 を含むワクチンの初回投与後 21 日目に、rAd5 ベクターを使用して抗原送達が繰り返し実行されます [8,21]。 Gam-COVID-Vac ワクチン接種者の血清中の S および RBD 特異的抗体反応とウイルス中和活性をある程度の程度まで調査した研究はほとんどありません [10、22、23]。 Gam-COVID-Vac 投与から 3 か月後の RBD 特異的 IgG 抗体の増加が報告されており、抗体は懸念されるアルファ、ベータ、デルタ、およびオミクロン変異体と交差反応することが示されています [24-26]。 Gam-COVID-Vac は、SARS-CoV{100}} に対する他のいくつかの認可済みワクチンとも比較されており、わずかに劣るものの、スプートニク V の高いウイルス中和力と、新型コロナウイルス関連死亡率に対する高い有効性が示されました。一部の mRNA ワクチンではウイルスの中和に関することが判明しました [24]。 最後に、ヒト免疫不全ウイルス陽性 (HIV+) の抗レトロウイルス療法を受けた (ART 治療を受けた) 患者の Gam-COVID-Vac による免疫化は、SARS-CoV の元の野生型およびデルタ型変異体に対して疫学的有効性を示すことが示されました。{ 113}} [27]。 しかし、これまでのところ、Gam-COVID-Vacワクチン接種を受けた被験者における抗体によるエピトープ認識の詳細な分析は行われておらず、Gam-COVID-Vacワクチン接種を受けた被験者における免疫グロブリンのアイソタイプとIgGサブクラスの反応を理解するにはデータが必要です。 ここでは、Gam-COVID-Vac ワクチン接種を受けた被験者の 2 つのグループ、つまり以前に SARS-CoV-2 に感染したことのある被験者のグループと、SARS-CoV-2 の未感染被験者の別のグループを調査しました。 私たちは、マイクロアレイ化された SARS-CoV-2- 由来のフォールディングおよびアンフォールドタンパク質、および RBD を含む完全な S タンパク質にわたるペプチドを使用して、誘導された抗体のエピトープ特異性の綿密な分析を実行しました。 さらに、IgG サブクラスの応答を分析しました。 私たちの研究では、Gam-COVID-Vacワクチン接種を受けた被験者は、RBD-ACE2相互作用をブロックできるRBD特異的抗体をマウントすることが明らかになりました。 興味深いことに、ウイルスの中和は、RBD の外側のペプチドに対する抗体にも関連しており、これはスパイクタンパク質の融合前後の立体構造の移行に関与している可能性があることも発見しました。
カンクサ-免疫システムを改善する
2. 結果
2.1. Gam-COVID-Vac ワクチン接種を受けた被験者には、COVID-19 の未治療および回復期の被験者が含まれます
モスクワ地域での感染時に得られた有病率と配列データによれば、回復期の被験者は武漢湖-1株に感染していた。 未経験の被験者には新型コロナウイルスの症状はなく-19、募集時点ではSARS-CoV-2-特異的な抗体を持っていませんでした。 研究対象者には、年齢中央値60歳（すなわち25～70歳）の女性15名、男性7名が含まれた（表1）。
表 1. 被験者の人口統計学的、臨床的、血清学的特徴。
血漿サンプルは時点0（つまりベースライン）で各被験者から採取され（図1A）、その後、各被験者は1回目と2回目の間隔を約21日あけてスプートニクVをワクチン接種されました。注射（時点１および２）。 時点 3 で、ワクチン誘発性の抗体反応を測定するために 2 番目の血漿サンプルが収集されました (図 1A)。 被験者はさらに 120 日間観察されました。 最終ワクチン接種後 110 日目に、被験者 1 名 (つまり被験者 22) が COVID-19 に感染しましたが、他の被験者は COVID-19 の症状を発現していませんでした (表 1)。
図 1. 研究デザインとスプートニク V ワクチン接種前後の SARS-CoV-2- 特異的抗体反応。 (A) 研究デザイン。 血漿サンプルは、時点0（ベースライン）において、新型コロナウイルス感染症未治療の被験者（n=12）と回復期の被験者（n=10）から採取され、被験者は2回のスプートニクVを投与されました。ワクチン接種はそれぞれ時点1と2で行われ、血漿サンプルは時点3（つまり、最初のワクチン接種後8日目0〜85日目）に採取されました。 (B) ベースラインにおける未治療および回復期の被験者 (x 軸) におけるヌクレオカプシド特異的 IgG 抗体レベル (y 軸: ISU)。 水平線はポジティブのカットオフを示します。 (C)時点0および3(x軸)における対象におけるRBD、S、S1、およびS2に特異的なIgG抗体レベル(y軸:ISU)。 (D) 左から右へ、時点 0 および 3 ( X 軸)。 ウィルコクソン検定によって決定されたグループ間の有意差が示されています: ** p < 0.01、*** p < 0.001、**** p < 0.0001、ns - 有意ではありません。
2.2. Gam-COVID-Vac ワクチン接種は、S1、RBD、S2 を含む S に対する広範な IgG 反応を誘発します
カンサスサプリメントの利点 - 免疫力の向上
私たちは、SARS-CoV-2-の未治療および回復期の被験者からの血漿サンプル中の、SARS-CoV-2タンパク質およびSタンパク質にわたるペプチドのマイクロアレイ化されたフォールディングおよびアンフォールディングの大規模パネルに対する抗体反応の詳細な分析を実施しました。 Gam-COVID-Vac による完全な予防接種後 (図 1A、B、表 1)。 ワクチン接種後の時点 0 と時点 3 の血漿サンプルを比較すると、折り畳まれているが折り畳まれていない RBD、S、S1、および S2 に対する IgG 応答の有意な誘導が見つかりました (図 1C)。 ワクチン接種から 3 か月後、被験者は RBD 特異的 IgG 抗体の 21- 倍の増加を示しました (p < 0.{{20}}001) および {{ Ｓ特異的ＩｇＧ抗体の１８倍増加（すなわち、時点０：中央値０．２９１、時点３：中央値５．７７８）（ｐ＜０．０００１）。 S1 に対する IgG 抗体は 3.7- 倍 (p=0.0023) 増加し、S2 に対する IgG 抗体は 2.8- 倍 (p=0.0094) に増加しました (図 1C) ）。 Gam-COVID-Vac によるワクチン接種は、未治療および回復期の被験者において比較的フォールディング S、S1、および RBD に対する主に IgG 応答を誘導しました (図 1C、S2、および S3)。これは、SARS-CoV の増強に使用できることを示しています-2-回復期の被験者でも特異的な抗体反応が見られます。 RBD、S、および S1 に対する IgG 抗体の有意な増加が未治療および回復期の被験者で観察され (図 S2)、時点 3 で未治療および回復期の被験者の RBD、S、S1、および S2 に対する IgG レベルに関して有意差はありませんでした。 (図S3)。
2.3. Gam-COVID-Vac ワクチン接種は、S および RBD に対する主に IgG1 サブクラスの反応を誘発します
アレルゲン特異的免疫療法（AIT）は、主にアレルゲン特異的な IgG1 および IgG4 応答を誘導することが報告されています。これらの応答は、エフェクター機能に関して異なるだけでなく（IgG1 は抗体依存性細胞傷害（ADCC）および補体活性化を媒介できますが、IgG4 にはこれらの機能がありません）エフェクター機能）だけでなく、その動態（IgG1: 急速な発現と早期の減少、IgG4: ゆっくりと発現するがレベルが持続する）に関しても同様である[28-30]。 そこで我々は、スプートニクVワクチン接種を受けた被験者におけるSおよびRBDに対するIgGサブクラス（すなわち、IgG1～IgG4）の反応を調査した。 図 1D は、ワクチン接種がほぼ独占的に S および RBD に対する IgG1 サブクラス応答を誘導したことを示しています。 ワクチン接種後、S および RBD に特異的な IgG1 レベルの有意な増加 (それぞれ p= 0.0002 および p= 0.0071) が見つかりました。 ただし、S および RBD に特異的な関連する IgG2、IgG3、または IgG4 サブクラス応答は検出できませんでした (図 1D)。
2.4. Gam-COVID-Vacワクチン接種によるウイルス中和抗体およびRBD-ACE2相互作用を阻害する抗体の誘導
ウイルス中和抗体の検出には、ウイルス様粒子を元の武漢湖-1株と最近報告されたVOC OmicronのSタンパク質で擬似型分けするpVNTテストを使用しました。 武漢胡-1株に対する中和活性を有する抗体は、22人の被験者のうち1人（すなわち被験者22）を除く全員で検出されたが（図2A、表2）、一方、オミクロンに対する中和抗体力価は有意に低かった（図2B）。 20 人の被験者のうち 17 人にのみ見つかりました (図 2A、表 2)。 対象者 6、7、10、11、15 には関連する中和は見つかりませんでした (図 2A、表 2)。 オミクロンのウイルス中和力価は、WT よりも 25 分の 1 でした (武漢湖-1 とオミクロンの中央値はそれぞれ 141.9 と 5.7) (図 2B)。
図 2. スプートニク V ワクチン接種後 3 か月の血漿中のウイルス中和活性と、RBD および S 由来ペプチドに対する IgG 抗体応答との関連。 (A) 武漢湖-1株（緑）およびオミクロン（オレンジ）に対するウイルス中和（ID50）（y軸）は、未治療（青）および回復期（赤）の血漿を用いて得られた。主題 (x 軸)。 (B) ウイルス中和の比較 (y 軸: 試験対象からの血漿について得られた ID50、バーは四分位範囲 (IQR) の中央値を表す武漢胡-1 (緑色) およびオミクロン (オレンジ色)水平線は、健康で非感染の対照被験者 (健康対照、HC) からの血漿で得られた結果を表します。株間の有意差は、マン-ホイットニー検定によって決定されました: **** p < 0。 {{30}}001. (C) RBD およびペプチドの局在化は S (S1、S2) スキームにおけるウイルス中和と相関していた。(D) 武漢-湖のウイルス中和力価間の相関{{19 }} (WT) または Omicron (y 軸)、RBD およびスパイク由来ペプチド 12、32、および 46A に特異的な IgG レベル (x 軸: ISU)。青と赤の記号はそれぞれ未治療および回復期の被験者を示します。ノンパラメトリック スピアマン検定による有意な相関を示します。* p < 0.05、** p < 0.01、*** p < 0.001 **** p < 0.0001、ns=は有意ではありません。
表 2. マイクロアレイによって測定された S、S1、S2、および RBD に特異的な IgG レベルの、ACE2 への RBD 結合の阻害との比較、および血漿から測定されたウイルス中和力価 (武漢-湖-1、オミクロン)被験者を調査しました。 ヒート マッピングは、Excel を使用してパラメータごとに個別に実行されました。 最高レベルは暗赤色とみなされ、最低レベルは白とみなされます。
１人を除くすべての被験者（すなわち、被験者２２）において、ワクチン接種後にウイルス中和抗体が増加したという事実は、それらがワクチン接種によって誘導されたことを示している（表２）。 被験者 21 は、MIA における RBD-ACE2 相互作用の高度な遮断と、ベースラインでの高度なウイルス中和をすでに示しました (表 2)。 注目すべきことに、Gam-COVID-Vacワクチン接種を受けた中等度の疾患を有する回復期被験者（#1、2、17、18、21）からの血漿サンプルは、軽度の疾患（#22）または無症状の回復期被験者からの血漿サンプルよりもウイルス中和力価が高かった。 (#4、5、7、9) (表 1 および 2)。 しかし、重要な発見は、RBD の ACE2 への結合の阻害とウイルスの中和が必ずしも関連しているわけではないということでした。 RBD武漢胡-1のACE2への結合の25%を超える阻害は、ワクチン接種によるウイルス中和試験でも阻害を示した被験者6名のみに発生した(すなわち、被験者1、2、3、17、18) 、および 19) (表 2)。 興味深いことに、ウイルス中和活性（50%感染量（ID50）> 100）が6人の被験者で観察されたが、ACE2へのRBD結合の阻害は全くまたは不十分であった（表2：被験者6、10、12、13、16、20）。 。
2.5. Gam-COVID-Vacワクチン接種を受けた被験者におけるウイルスの中和は、RBDおよびS由来ペプチドに対するIgG反応と強い相関がある12
前に示したように、Gam-COVID-Vacワクチン接種を受けた数人の被験者（例えば、被験者6、10、12、13、16、20；表2）からの血漿は、ウイルス中和活性を示したが、RBD-ACE2相互作用を阻害しなかった。 したがって、我々は、マイクロアレイベースのチップ分析 [13] (図 S4 および図 2C) によって S タンパク質にまたがるペプチドに対する IgG 抗体の反応性を分析し、ペプチド特異的 IgG 応答と武漢湖のウイルス中和を相関させました。{{19} } 株と Omicron (図 2D)。 折りたたまれたRBDに対するIgG応答などの3つのペプチド(すなわち、ペプチド12、32、46A)に対するIgG応答は、武漢-胡-1株の中和と有意に相関した(図2C、D)。 ペプチド 12 が際立っていたのは、アンフォールディング ペプチド 12 (図 S1) に対する抗体応答はナイーブ被験者の Gam-COVID Vac によって有意に増強されたが、アンフォールディング ペプチド 32 および 46A に対する抗体応答は顕著ではなく (図 3A)、また、オミクロンの中和と有意に相関していたためです (図 2D) ）。 回復期被験者では、ペプチド12、32、または46Aに対する有意なブーストは観察されなかった(図3A)。 ペプチド 12 の配列は SARS-CoV-2 株間で高度に保存されており (図 4)、RBD の N 末端に近い S1 に存在するため、プレ配列の移行に関連する可能性のある領域を示しています。 S タンパク質の融合後の立体構造に変化します (図 3B)。
図 3. 時点 0 および 3 (x 軸) における、ワクチン接種を受けた未治療および回復期の被験者における S 由来ペプチド (P12、P32、P46A) に対する IgG 抗体レベルの中央値 (y 軸: ISU) (A) 。 Wilcoxon 検定によって決定されたグループ間の有意差が示されています: * p < 0.05、ns=は有意ではありません。 (F) (B) 図 3. 時点 0 および 3 (x -軸) (A)。 Wilcoxon 検定によって決定されたグループ間の有意差が示されています: * p < 0.05、ns=は有意ではありません。 (B) PyMOL で生成された SARS-CoV-2 スパイクタンパク質三量体の表面表現におけるペプチド 12、32、および 46A の視覚化 (側面図、融合前立体構造)。 S-トリマーモデルではペプチド 12 が赤、ペプチド 32 が青、46A がオレンジで強調表示されています。 炭水化物は薄い灰色で表示されます。
図4. SARS-CoV-2 Sタンパク質の武漢湖-1（上）とオミクロン（下）のタンパク質配列アラインメント。 RBD は薄黄色で色付けされており、ペプチド 12、22、25、32、33、46A、および 47 には下線が引かれています。 武漢の S タンパク質配列は WA1 分離株 (GeneBank アクセッション番号: BCN86353.1) に対応し、Omicron の S タンパク質配列 Omicron はクレード GRA、系統 B.1.1.529 BA.1 (GISAID データベースに基づく) に対応します。 https://www.gisaid.org/ (2022 年 3 月 15 日にアクセス))。 アミノ酸置換は、その親水性と電荷特性に応じて色分けされています（ピンク=疎水性、緑色=中性、水色=塩基性親水性、薄赤色=酸性）親水性）。
3. ディスカッション
ベクターベースのワクチン Gam-COVID-Vac はスプートニク V とも呼ばれ、臨床現場で使用できるようになった最初の SARS-CoV-2 ワクチンの 1 つです。 しかし、新型コロナウイルスワクチン接種を受けた被験者における抗体反応の詳細な特異性に関して入手可能な情報は比較的少ない-19。 この研究では、SARS CoV-2-の未治療および感染後の回復期被験者の血漿サンプル中の、マイクロアレイ化された折り畳まれていないSARS-CoV-2タンパク質およびSタンパク質にまたがるペプチドに対する抗体反応の詳細な分析を実施しました。 Gam COVID-Vac による予防接種のフルコース。 Gam-COVID-Vac は、未治療および回復期の被験者において、フォールディング S、S1、S2、および RBD に対する主に IgG1 応答を誘導しましたが、他の IgG サブクラス応答は誘導しませんでした。これは、Gam-COVID-Vac が SARS-CoV の増強に使用できることを示しています-2-回復期の被験者でも特異的な抗体反応が見られます。 他の遺伝子ワクチンと同様に、Gam-COVID-Vac によって誘導される抗体応答は、より持続性の高い IgG4 サブクラス応答と比較して、半減期が短い IgG1 サブクラスに主に存在しました。 たとえば、特定の IgG4 サブクラス応答はアレルゲン特異的免疫療法中の長期防御に関連していますが、特定の IgG1 応答は急速に蓄積しますが、数か月後には消失します [28-30]。 したがって、中和抗体反応を高レベルに維持するには、Gam-COVID-Vacやその他の遺伝子ワクチンの追加免疫注射を頻繁に行う必要がある。 Gam-COVID-Vac によるワクチン接種は、SARS-CoV-2 の自然感染後に見られる反応を大幅に模倣する抗体反応を誘発します [13]。 さらに、自然感染後の抗体応答は主に IgG1 サブクラスに属し、フォールド S、S1、S2、および RBD に対して向けられます [13]。 私たちの研究の新しく興味深い発見は、Gam-COVID-Vacワクチン接種を受けた数人の被験者（例、被験者6、10、12、13、16、20;表2）からの血漿がウイルス中和活性を示したものの、ウイルス中和活性を阻害しなかったということでした。 RBD-ACE2相互作用。 したがって、我々は、マイクロアレイベースのチップ分析[13]によって完全なSタンパク質にわたるペプチドに対するIgG抗体の反応性を分析し[13](図2DおよびS4)、ペプチド特異的IgG応答と武漢湖のウイルス中和とを相関させた。{{62} ｝株およびＯｍｉｃｒｏｎ ＢＡ．１（図２Ｄ）。 RBDに対するIgG応答などの3つのペプチド(すなわちペプチド12、32、46A)に対するIgG応答は、武漢-胡-1株の中和と有意に相関した(図2C、D)。 ただし、ペプチド 12 は独特でした。なぜなら、抗体応答はペプチド 12 に対してのみであり、ペプチド 32 および 46A に対しては反応しませんでした。ワクチン接種によって抗体応答が大幅に増強され (図 3A)、また、Omicron の中和と有意に相関していました (図 2D)。 ペプチド 12 に対する IgG 応答のワクチン誘発性ブーストの規模は、ナイーブな被験者では控えめではありますが有意であり、S および S1 に対する IgG 抗体のブーストに非常に匹敵しました。 しかし、単離された折り畳まれていないペプチドに対する IgG 抗体 (図 S1) は、折り畳まれたタンパク質のペプチド 12 に対する抗体の一部にすぎない可能性があります。 さらに、抗体のレベルだけでなく結合力も重要です。 ペプチド 12 の配列は、武漢湖 -1 株と BA.1 Omicron VOC の間で高度に保存されており (図 4)、融合前から融合後への移行に関連すると考えられる領域に由来しています。 S タンパク質の立体構造 (図 3B)。 さらに、Omicron の新しい変異体バリアント (BA.1、BA.2、BA.4/5、BA.2.12.1、BA.2.75、BQ.1) の比較では、ペプチド 12 (284 ～ 313 aa. ）は、例えばペプチド 32 (https://covariants.org/shared-mutations、(2022 年 11 月 28 日にアクセス)) とは対照的に、アミノ酸配列の点では変化しません。 特に、ペプチド 12 が一部である N 末端ドメイン (NTD) 領域を標的とするウイルス中和能力を持つモノクローナル抗体が記載されており [31]、他のワクチンもこの領域に対する抗体応答を誘導できることが報告されています。 [18-20,32]、ペプチド 12 によって定義される領域が中和抗体の誘導に重要である可能性があることを示しています。 したがって、Gam-COVID-Vacワクチン接種によって誘導された抗体は、2つのメカニズムによってSARS-CoV-2を中和できると考えられるかもしれない。1つは単にRBD-ACE2相互作用を阻害することによるものであり、もう1つはS-CoVのペプチド12を含む領域を標的とすることによるものである。構造変化（すなわち、融合前構造からSの融合構造への移行）に関与している可能性があるタンパク質。 我々の研究には限界がある。 たとえば、擬似型レンチウイルスに基づく中和アッセイを使用しましたが、これらのアッセイは広く使用されており、信頼性があります[33]。 また、我々のマイクロアレイ上のペプチドは折り畳まれていないため、折り畳まれていないペプチドを認識する中和抗体の一部のみが同定された可能性があるのに対し、さらに多くの抗体が同定された立体構造エピトープに結合している可能性があることも、我々の研究の限界である。地域。 さらに、少数の被験者のみを分析したことは、私たちの研究の限界です。 しかし、私たちの研究は、異なるエピトープ特異性を持つ抗体がGam COVID-Vacワクチン接種の予防効果に寄与する可能性があることを明確に示しています。 さらに、この研究は、広範な中和抗体を作成するために使用できる、潜在的に保存されているペプチドに対する応答を示しています。
カンサスサプリメントの利点 - 免疫システムを強化する方法
4. 材料と方法
4.1. 研究対象集団と倫理に関する声明
2020年12月に国立研究センター研究所で、SARS-CoV-2感染歴のある健康な被験者(n {0}})または以前のSARS-CoV-2感染のない健康な被験者(n=12)が研究に登録された。ロシア連邦医学生物学庁の免疫学 (倫理番号: #12-1、2020 年 12 月 29 日)。 すべての参加者は書面によるインフォームドコンセントを提出しました。 以前の SARS-CoV-2 感染は、PCR 検査で陽性反応が出たことと新型コロナウイルスの症状によって確認された-19、またはヌクレオカプシド抗原やヌクレオカプシド抗原に対する SARS-CoV-2- 特異的抗体の存在によって確認された。 [13]に記載されているRBDおよび/またはS抗原。 すべての被験者は、3週間の間隔で2回のスプートニクV（Gam-COVID-Vac、Biocard、モスクワ、ロシア）で筋肉内免疫化された。 血液サンプルは、最初のワクチン接種の 1 日前 (T0、図 1A)、および最初のワクチン接種の 80 ～ 85 日後 (T3、図 1A) に採取されました。
4.2. SARS-CoV-2-特異的抗体反応の検出
未治療の被験者と回復期の新型コロナウイルス感染症{{0}}の免疫グロブリン反応を、スプートニクVでの免疫前後の血漿サンプルで評価しました（図1A）。 SARS-CoV-2 タンパク質と S タンパク質にわたる 46 個のペプチド（25～30 mer）の包括的なパネルに対する特異的 IgG が、以前と同様にマイクロアレイ チップ技術によって 1:50 に希釈された血漿サンプルで測定されました。と説明されている[13]。 マイクロアレイチップ上のすべての合成ペプチドのアミノ酸配列、アミノ酸数、分子量を表 3 に示します。ペプチド 12 および 32、および大腸菌 (E. coli) で発現した RBD (展開された状態)ヒト胎児腎臓 293 (HEK293) 細胞 (折り畳まれた) の円二色性 (CD) スペクトルが提供されます (図 S1)。 図S1に示すように、ペプチド12および32は、円二色性(CD)によって決定されるように、特定の二次構造を示さなかった。 詳細には、エポキシフレームで囲まれたマイクロアレイを含むスライドガラス（Paul Marienfeld GmbH & Co. KG、Lauda-Königshofen、ドイツ）をアミン反応性複合有機ポリマーMCP-2（Lucidant Polymers、カリフォルニア州サニーベール）で活性化しました。 、米国）タンパク質とペプチドの結合を促進するため。 SARS-CoV-2 抗原/ペプチドは、SciFlexArrayer S12 (Scienion AG、ベルリン、ドイツ）[13]。 タンパク質の発現と精製、およびペプチド合成については、[13] に記載されています。 マイクロアレイ抗原に対する IgG 抗体の反応性は、最初に 0.5% Tween 20 を含むリン酸緩衝生理食塩水 (PBST) でマイクロアレイを 5 分間洗浄し、Sigma 2-7 遠心分離機と MTP-11113 を使用した遠心分離によって乾燥させることによって測定しました。ローター（両方とも Sigma Laborzentrifugen GmbH、Osterode am Harz、ドイツ）。 次に、1:50 に希釈した血漿サンプル (サンプル希釈剤、Thermofisher、Waltham、MA、USA) の 35 μL アリコートを加え、22 °C で 2 時間インキュベートしました。 別の洗浄ステップの後、30 μL の二次抗体 (DyLight 550 (Pierce、イリノイ州ロックフォード、米国) 標識抗ヒト IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories、ペンシルベニア州ウェストグローブ、米国)) を適用し、22 °C で 30 分間インキュベートしました。 CRT。 次に、チップを洗浄、乾燥し、続いて共焦点レーザースキャナー (Tecan、スイス、メンネドルフ) を使用してスキャンしました。 画像解析は、MAPIX マイクロアレイ画像取得および解析ソフトウェア (Innopsys、Carbonne、France) によって実行され、測定された蛍光単位の ISAC 標準化単位 (ISU) への変換は記載されているように実行されました [13]。 特異的な抗体レベルは、ISAC 標準化単位 (ISU) で表されます。 S および RBD 特異的 IgG1-4 抗体応答は、血漿サンプル (1:50 希釈) で、以前に記載されている [13] ように ELISA によって 2 回測定しました。<5% for their average values.
表 3. 合成 SARS-CoV-2 スパイクタンパク質由来ペプチド §。
4.3. 遠紫外円二色性 (CD) スペクトル
ペプチド、P12 および P32、ならびに大腸菌および HEK293 細胞で発現した RBD については、以前に説明した Jasco J-180 分光偏光計 (日本分光株式会社、東京、日本) を使用して CD 分析を実行しました [34]。 ペプチドおよびタンパク質の CD スペクトル (図 S1) は、10 mM NaH2PO4 (pH 8.0) 中の 0.1 mg/mL の濃度で測定され、抗原のスポットに使用されました。
4.4. 疑似ウイルスベースのウイルス中和アッセイ (PVT)
血漿サンプル中のウイルス中和活性は、以前に記載されているように、擬似ウイルスベースのウイルス中和アッセイによって測定されました[35]。 SARS-CoV-2 スパイク ウイルス様粒子 (VLP) を生成するために、HEK293T 細胞に 3 つのプラスミド、レンチウイルス パッケージング プラスミド pCMVΔ8.2R (Addgene、英国テディントン)、pUCHR-GFP、および野生型SARS-CoV-2スパイクタンパク質（参照武漢湖-1およびWA1分離株と同一）をコードするpCAGGS-SΔ19プラスミドまたはpCAGGS-SΔ19-OmプラスミドSARS-CoV-2 オミクロン スパイク タンパク質をコードするもの (ロシア科学アカデミー シベリア支部、ノボシビルスク、ロシア) pVNT で使用する前に、VLP を限界希釈によって滴定し、hACE2- でトランスフェクトされた HEK293T 細胞とともに 4 日間インキュベートしました。 50%の緑色蛍光タンパク質（GFP）陽性細胞を与えるウイルス粒子の用量が、試験で使用するために選択されました。 pVNT の場合、すべての血漿サンプルは使用前に 56 °C で 30 分間加熱不活化されました。 4日目に、感染後の細胞を再懸濁し、GFP陽性細胞の割合をフローサイトメトリーで測定しました。 ＩＤ５０値は、示された異なる血漿濃度における中和のパーセンテージによって再構築されたシグモイド曲線（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９．２．０ソフトウェア、Ｓｉｇｍｏｉｄａｌ、４ＰＬ）を使用して計算された。
4.5. 分子相互作用アッセイ (MIA)
スプートニクVワクチン接種前後の、新型コロナウイルス感染症{{0}}の回復期または未治療の被験者の血漿サンプル（表1）が、50 ng/mLのウイルスの結合を阻害する能力を検出する。 RBD-hu-1 と ACE2 受容体の分子相互作用アッセイ (MIA) を記載どおりに実施しました [13、36-39]。 このアッセイは、抗体による標識 RBD の ELISA プレート結合 ACE2 に対する阻害、または RBD-ACE2 相互作用の他の化合物の阻害を測定できます [38]。 簡単に説明すると、組換え ACE-2 (GenScript、Piscataway、NJ、USA) を NUNC Maxisorb 96 ウェル プレート (Thermofisher) 上に一晩コーティングしました (2 μg/mL)。 その後、洗浄緩衝液を用いて３回の洗浄サイクルを実施し、次いでプレートをブロッキング緩衝液を用いて室温で３時間ブロックした。 血清サンプルを PBS、0.05% Tween 20、1% BSA で 1:2 に希釈し、50 ng His タグ付き組換え RBD (GenScript) とともに 2 時間プレインキュベートしました。 次に、プレインキュベートした血清サンプルを ACE-2 を含むプレートに 3 時間添加し、プレートを洗浄し、1:1000 に希釈したマウスモノクローナル抗 His タグ抗体 (Dianova、ハンブルク、ドイツ) とともに一晩インキュベートしました。 。 3 回の洗浄ステップの後、1:1000 に希釈した HRP 結合抗マウス IgG1 抗体 (GE Healthcare、米国イリノイ州シカゴ) を 2 時間添加し、ABTS で検出を実行しました。 結合した RBD に対応する平均光学密度 (OD) 値を、統合ソフトウェア i-control 2.0 を備えた TECAN Infinite F5 ELISA リーダー (Tecan Group Ltd.、スイス、メンネドルフ) で 405 nm および 492 nm (参照) で測定しました。 バッファー コントロール (RBD なしのオーバーレイ) を各結果から差し引いた。 測定は二重に実行され、結果はばらつきのある平均値として示されています。<5%.
カンサスサプリメントの利点 - 免疫システムを強化する方法
4.6. スパイクタンパク質構造内のペプチドの可視化
SARS-CoV-2 スパイクタンパク質の表面表現は、PyMOL (PyMOL Molecular Graphics System、バージョン 2.5.0a0、Schrödinger, LLC、ニューヨーク、ニューヨーク、米国) に基づいて生成されました。 PDB エントリ 6XR8 にあります。
4.7. 統計分析
統計分析は、GraphPad Prism (バージョン 9.2.0 GraphPad Software、La Jolla California) を使用して実行されました。 2 つまたは複数のグループ間の比較には、ウィルコクソン検定 (図 1C、D、および 3A)、マン・ホイットニー検定 (図 2B および S3)、およびフリードマン検定 (図 S2) を使用しました。 p < 0.05 は統計的に有意であると考えられました。 2 つのグループ間の相関関係は、Spearman 順位検定によって決定されました (図 2D)。 正規化された非線形回帰は、GraphPad Prism ソフトウェア (Sigmoidal 4PL) を使用して実行されました。 データは中央値 ± IQR として表示されます。 アスタリスクはグループ間の有意差を示します。* p < 0.05、** p < 0.01、*** p < 0.001、**** p < 0.0001、 ns - 重要ではありません。
5。結論
要約すると、私たちの研究は、Gam-COVID-Vacによって誘導される抗体のエピトープおよびIgGサブクラス特異性を詳細に研究し、抗体によるGam-COVID-Vac誘導ウイルス中和のさまざまなメカニズムを明らかにした最初の研究です。 特に、本発明者らは、S1のN末端部分のRBDの近くだが外側に位置するペプチド(すなわち、ペプチド12)に対する抗体がウイルスの中和に関連しているという証拠を入手した。 ペプチド12-特異的抗体の潜在的なウイルス中和活性は、スパイクタンパク質の融合前構造から融合後構造への移行を妨害する能力によるものである可能性があります。 このエピトープ領域に対する抗体を誘導し、そのようなワクチンによって誘導される抗体をウイルス中和に関して試験するために、ワクチンに免疫原性形態のペプチド12によって定義される領域を含めることを検討することを提案します。 ワクチンのウイルス中和を強化できる場合、免疫原性ペプチド 12 エピトープを含めることで、COVID-19 ワクチンの有効性が向上する可能性があります。 さらに、受動免疫用に定義されたペプチド12-に対する抗体の開発を検討することもできます。 ペプチド12-で定義されたエピトープは現在知られているSARS-CoV-2変異体で保存されているため、ペプチド12に対するワクチンと抗体はSARS-CoV-2変異体に対して交差防御する可能性があります。 したがって、我々は、新型コロナウイルスに対する新たな能動的および受動的ワクチン接種戦略の開発に役立つ可能性のある新たな知識を提供します-19。
参考文献
1. ロドリゲス＝コイラ、J. Sokolowska、M. SARS-CoV-2 候補ワクチン - 組成、作用機序、臨床開発段階。 アレルギー 2021、76、1922 ～ 1924 年。 [相互参照] [PubMed]
2. シャルマ、A. フロリダ州アフマド; ラル、SK COVID-19: 新型コロナウイルス感染症の進化、伝播、検出、制御、予防に関するレビュー。 ウイルス 2021、13、202。[CrossRef] [PubMed]
3. アルシャド、B. イクバル、T. Bhatti、KP レビュー - 軽度および重度の新型コロナウイルス感染症に対する適応外治療戦略に関する洞察。-19。 パク。 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． 科学。 2021、34、1469–1484。 [相互参照] [PubMed]
4. ザマン、W. サキブ、S. ウラ、F. COVID-19: 系統発生学的アプローチは、自然治癒のためのリソースを見つけるのに役立つ可能性があります。 フィトテル。 解像度 2020、34、2783–2785。 [相互参照]
5. ルビオ＝カシージャス、A. レドワン、EM; バーモント州ウバースキー SARS-CoV-2 自然選択の結果としての断続的な毒性。 新型コロナウイルス 2022、2、1089–1101。 [相互参照]
6. ダイワ州ログノフ。 ドルジコワ、IV; Zubkova、OV 2 つの製剤における rAd26 および rAd5 ベクターベースの異種プライムブースト COVID-19 ワクチンの安全性と免疫原性: ロシアでの 2 つの非ランダム化第 1/2 相オープン試験。 Lancet 2020、396、887–897、Lancet 2021、397、98 の訂正。[CrossRef]
7. フォレガッティ首相。 エワー、KJ; Aley、PK SARS-CoV-2 に対する ChAdOx1 nCoV-19 ワクチンの安全性と免疫原性: 第 1/2 相、単盲検ランダム化比較試験の予備報告。 Lancet 2020、396、467–478、Lancet 2020、396、1884 の訂正。[CrossRef]
8. ダイワ州ログノフ。 ドルジコワ、IV; Shcheblyakov, DV rAd26 および rAd5 ベクターベースの異種プライムブースト 新型コロナウイルス-19 ワクチンの安全性と有効性: ロシアにおけるランダム化比較第 3 相試験の中間分析。 Lancet 2021、397、671–681、Lancet 2021、397、670 の訂正。[CrossRef]
9. ジャクソン、CB。 ファーザン、M. チェン、B. Choe, H. SARS-CoV-2 の細胞侵入のメカニズム。 ナット。 モル牧師。 セルバイオル。 2022、23、3–20。 [相互参照]
10. ハインツ、FX。 Stiasny, K. 現在の COVID-19 ワクチンの際立った特徴: 抗原提示と作用機序の既知と未知。 NPJ ワクチン 2021、6、104。[相互参照]
11. リム、HX; マソミアン、M. ハリド、K。 クマール、オーストラリア; ペンシルベニア州マカリー。 Poh, CL バイオインフォマティクスとモノクローナル抗体ターゲティングによる SARS-CoV-2 スパイクタンパク質に対する中和抗体を誘発するための B 細胞エピトープの同定。 内部。 Ｊ．Ｍｏｌ． 科学。 2022、23、4341。[相互参照]
12. モロイ、G. Tuffery, P. SARS-CoV-2 攻撃に対するペプチドベースの戦略: 最新のインシリコの視点。 フロント。 薬。 ディスコブ。 2022、2、899477。 [相互参照]
13. ガッティンガー、P. ニースポツィアーナ、K. Stiasny, K. SARS-CoV-2の中和には、立体構造受容体結合ドメインエピトープに対する抗体が必要です。 アレルギー 2022、77、230–242。 [相互参照]
14. ニウ、L. ウィットロック、カンザス州。 クラボー、GC SARS-CoV-2 受容体結合ドメインに対する中和抗体の構造的概観。 フロント。 イムノール。 2021、12、647934。[CrossRef]
15. シャン、S. モク、CK; Zhang, S. SARS-CoV-2 変異体に対する強力で保護的なヒト中和抗体。 フロント。 イムノール。 2021、12、766821。[CrossRef]
16. バジパイ、P. シン、V. Chandele, A. SARS-CoV に対する広範な中和抗体-2は、変異体や他のヒトコロナウイルスの中和に関する新たな洞察を提供します。 フロント。 細胞。 感染する。 微生物。 2022、12、928279。[相互参照]
17. ヴィシュワカルマ、P. ヤダブ、N. ZA州リズビ 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2スパイクタンパク質ベースの新規エピトープは、生体内で強力な免疫応答を誘導し、試験管内でウイルス複製を阻害する。 フロント。 イムノール。 2021、12、613045。[CrossRef]
18.メイン州ギャレット。 ジェームス州ギャロウェイ。 Wolf, C. SARS-CoV-2 スパイクタンパク質に対する抗体応答の包括的な特徴付けにより、軽度の感染のエピトープを超える追加のワクチン誘導性エピトープが発見されました。 eLife 2022、11、e73490。 [相互参照]
19. ペン、M。 ドゥ、X。 Zhang, X. 不活化SARS-CoV-2ワクチンを3回投与した後の免疫シグネチャーによって明らかになった防御抗原エピトープ。 フロント。 イムノール。 2022、13、938378。[相互参照]
20. ポルヴェレ、I. パレラ、A. Zerillo, L. さまざまな新型コロナウイルス-19ワクチンに対する体液性免疫反応の多様性: 「グリーンパス」政策への影響。 フロント。 イムノール。 2022、13、833085。[相互参照]
21. トゥクバトゥリン、AI; ドルジコワ、IV; Shcheblyakov, DV 健康な成人のコロナウイルス感染予防を目的とした単回投与ワクチン「スプートニク ライト」の安全性、忍容性、免疫原性に関するオープン非ランダム化第 1/2 相試験。 ランセット登録 健康ユーロ。 2021、11、100241. [CrossRef] [PubMed]
22. ゴンザレス、S. オルシェヴィツキ、S. Salazar, M. 60～79歳の患者におけるSARS-CoV-2確認感染、入院、死亡率の減少に対するGam-COVID-Vac（スプートニクV）の最初の成分の有効性：アルゼンチンでの後ろ向きコホート研究。 EClinicalMedicine 2021、40、101126. [CrossRef] [PubMed]
23. バージニア州グシチン。 ドルジコワ、IV; シチェティニンAM、懸念される変異種（VOC: B.1.1.7、B.1.351、P.1、B.1.617.2、B.1.617.3）およびモスクワ風土病SARSに対するスプートニクVワクチン接種者由来の血清の中和活性-CoV-2 の変異体。 ワクチン 2021、9、779。 [CrossRef] [PubMed]
24. ヴォコ、Z。 キス、Z。 Surjan, G. ハンガリーにおける 5 つの SARS-CoV-2 ワクチンの全国的な有効性 - HUN-VE 研究。 クリン。 微生物。 感染する。 2022、28、398–404。 [相互参照] [PubMed]
25. ジェワンダラ、C. フェルナンド、S. プシュパクマラPD スプートニクV（Gam-COVID-Vac）の初回投与後の免疫反応。 科学。 議員 2022、12、1727。[相互参照]
26. 池亀、S. ミネソタ州シディキー; コネチカット州フン SARS-CoV-2 変異株に対するスプートニク V ワクチン血清の中和活性。 ナット。 共通。 2021, 12, 4598. [CrossRef]
27.バージニア州グシチン。 ツィガノバ、EV; オガルコバ、DA 抗レトロウイルス療法を受けている HIV 感染者におけるスプートニク V の新型コロナウイルス感染症からの保護-19。 EClinicalMedicine 2022、46、101360。[CrossRef]
28. スイス、シャムジ。 ヴァレンタ、R. Jardetzky, T. アレルギー疾患におけるアレルゲン特異的 IgE、IgG、および IgA の役割。 アレルギー 2021、76、3627–3641。 [相互参照]
29. エクル・ドルナ、J. ウェーバー、M. Stanek, V. 組換え草花粉アレルギーワクチン BM32 による 2 年間の治療により、アレルゲン特異的 IgG4 応答が継続的に増加します。 EBioMedicine 2019、50、421–432。 [相互参照]
30. スイス、シャムジ。 カッペン、JH; Akdis, M. アレルギー性鼻結膜炎およびアレルギー性喘息に対するアレルゲン免疫療法の臨床効果をモニタリングするためのバイオマーカー: EAACI ポジションペーパー。 アレルギー 2017、72、1156–1173。 [相互参照]
31. マサチューセッツ州トルトリシ; ベルトラメロ、M. レンプ、FA 超強力なヒト抗体は、複数のメカニズムを介して SARS-CoV-2 攻撃から保護します。 サイエンス 2020、370、950–957。 [相互参照]
32. シア、G. プッチ、F. Rooman, M. 開放型または閉鎖型 SARS-CoV-2 スパイクタンパク質立体構造を標的とする抗体の中和活性の分析。 内部。 Ｊ．Ｍｏｌ． 科学。 2022、23、2078。 [CrossRef]
33. 孟B. ダティール、R. Choi, J. SARS-CoV-2 スパイク N 末端ドメインは、TMPRSS2- に依存するウイルス侵入と膜融合性を調節します。 セル代表 2022、40、111220。[相互参照]
34. レシュ、Y. ウェグホーファー、M. Seiberler, S. Der p 10 の分子的特徴付け: チリダニアレルギーにおける広範な感作の診断マーカー。 クリン。 経験値 アレルギー 2011、41、1468–1477。 [相互参照]
35. ビャズロワ、M. ユスバリエバ、G. Spiridonova、A. 急性 COVID 患者における循環 SARS-CoV-2- 特異的抗体分泌と記憶 B 細胞生成のパターン-19。 クリン。 翻訳。 イムノール。 2021、10、e1245。 [相互参照]
36. ガッティンガー、P. ボロホバ、K. Dorofeeva, Y. 軽度の COVID-19 後の回復期患者の血清中の抗体は、ウイルスと受容体の結合を必ずしも妨げるとは限りません。 アレルギー 2021、76、878–883。 [相互参照]
37. ガッティンガー、P. ツラエバ、I. ボロホバ、K. オミクロン: SARS-CoV-2 の変異種は本当に懸念されています。 アレルギー 2022、77、1616–1620。 [相互参照]
38. ガッティンガー、P. オラダノバ・レピック、A. Valenta, R. SARS-CoV-2 中和抗体を測定するアッセイの重要性、用途、および特徴。 内部。 Ｊ．Ｍｏｌ． 科学。 2023、24、5352。[相互参照]
39. ガッティンガー、P. クラッツァー、B. ツラエバ、I. ニースポツィアーナ、K. オラダノバ・レピック、A. ゲベツベルガー、L. ボロホバ、K. ガーナー・スピッツァー、E. トラピン、D. ホーファー、G. 他。 SARS-CoV-2 変異体に対する滅菌免疫を誘導する可能性のある、折りたたまれた受容体結合ドメインと PreS 融合タンパク質をベースにしたワクチン。 アレルギー 2022、77、2431–2445。 [相互参照]
