脳虚血ラットに対するエキナコシドの効果
Aug 30, 2023
抽象的な: 目的 の効果を研究すること。エキノシド(ECH) は、局所脳虚血ラットの線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質を研究し、脳に対する ECH の神経保護効果の考えられるメカニズムを調査します。 方法:SDラットをランダムに対照群,モデル群,ECH高用量および低用量群,およびリグストラジン(CXQ)群に分けた。 各群のラットには、対応する薬剤または生理食塩水を１日１回、７日間腹腔内に投与した。 投与３日目に、プローブスリーブを脳の線条体に埋め込んだ。 最後の投与から 1 時間後に、局所脳虚血 (MCAO) のラット モデルを作成しました。 モデルを作成した後、すぐに微小透析を実行しました。 透析液を高速液体クロマトグラフィー電気化学検出器 (HPLC-ECD) に注入して、ノルエピネフリン (NE)、ドーパミン (DA)、5-ヒドロキシトリプタミン (5-HT)、3 の含有量を測定しました。各グループの線条体の細胞外液中の、4-ジヒドロキシフェニル酢酸（DOPAC）、ホモバニリン酸（HVA）、5-ヒドロキシインドール酢酸（HIAA）。 結果:対照群と比較して、モデル群のNE、DA、および5-HTのレベルが増加し、酸性代謝産物DOPAC、HVA、およびHIAAも増加した。 モデル群と比較して、ECH の高用量群と低用量群（30、15 mg・kg - 1・d - 1）および CXQ 群の 6 物質の含有量が減少しました。 結論 ECH の神経保護効果は、脳虚血後のモノアミン神経伝達物質の増加に関連している可能性があります。
カンサス粉末
キーワード: エキノシド; 脳虚血; 線条体; HPLC-ECD; モノアミン神経伝達物質と代謝産物
エキナセオシド(ECH) は、フェニルエタノイド配糖体の有効成分であり、カンクイ, 新疆の特別な工場。 研究により、ECHには抗酸化[1-2]、神経保護[3-4]、老化防止[5]、学習と記憶の改善[6-8]などの神経保護効果があることが示されています。 Chen Hon らの結果。 ECHがパーキンソン病のDAニューロンに対して保護効果があることを確認 [9]. モノアミン神経伝達物質は、体の生理活動を調節する重要な物質の一種です。組織内の内容物は、神経伝達物質の生合成、放出、取り込み、不活性化のプロセスを反映している可能性があります [10-11]。 現時点では、脳虚血ラットの脳内のモノアミン伝達物質に対する ECH の影響に関する関連報告はありません。 本研究では、脳虚血ラットの線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質の含有量に対するECHの影響を、脳微小透析技術を用いて調査し、脳神経保護に対するECHの考えられる機構を予備調査した。
カンカンキエキス末
1.材料
1.1 実験動物
SDラット、♂、体重250～300g（新疆実験動物センターより購入、ライセンス番号：2009-0053）。
1.2 医薬品および試薬
ECH は北京大学薬学部の Tu Pengfei 教授から寄贈されました (純度 95% 以上)。 ノルエピネフリン (NE)、ドーパミン (DA)、5-ヒドロキシトリプタミン (5-HT)、3,4- ジヒドロキシフェニル酢酸 (DOPAC)、ホモバニリン酸 (HVA)
5-ヒドロキシインドール酢酸（HIAA）はシグマです。 注射用テトラメチルピラジン塩酸塩（CXQ、Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.）; リン酸亜鉛セメント（上海医科器械有限公司の製品、液体と粉末で構成され、時間をかけて混合）。 ナトリウム1-アルキル硫酸塩(DIKMA); クエン酸水和物（天津金科精密化学研究所）； クエン酸三ナトリウム (Acros); エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム (JTTakerChemicalco); メタノール (DIKMA); アセトニトリル (DIKMA); 脳微小透析灌流液は、化合物塩化ナトリウム注射剤（北京双河製薬株式会社）です。 使用する水はすべて再蒸気水です。
1.3 機器
アメリカのBAS4100ラット脳定位固定装置。 CMA/12 プローブおよびプローブ スリーブ。 CMA/120 意識のある動物装置。 CMA/402 マイクロポンプ; CMA/150 低温サンプル自動コレクター。 Esa 5600A 輸液ポンプ; Esa 5600A 輸液ポンプ; Esa 542 自動サンプル注入装置; Esa の CoulArray 電気化学検出器。 ガラス状カーボン作用電極と Ag/AgCl 参照電極。 C18 カラム (DIKMA、ODS5 μ m、150mm × 4.6mm); CoulArraywin クロマトグラフィー ワークステーション (Esa 社); ボルテックスミキサー（QL-861タイプ）; 卓上酸性度計 (HANNA-211); 卓上型高速遠心機（XYJ-2タイプ）。
2.方法
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2.1 動物のグループ分けと投与
30 匹のラットをランダムに 5 つのグループに分けました。 ① 対照グループ: 1ml・kg-1・d-1 生理食塩水。 ② モデルグループ: 生理食塩水 1ml · kg-1 · d-1; ③モデル+リグストラジン(CXQ) 30mg・kg-1・d-1; ④ - ⑤ モデル+ECH 高用量群および低用量群 (ECHB、ECHS): 30、15 mg · kg-1 · d-1; 各グループのすべての動物に 7 日間腹腔内注射しました。
2.2 モデリング方法と微小透析
投与3日目に各ラットをカニューレで埋葬した。ラットは10%抱水クロラール(3.5ml・kg-1)で麻酔し、BAS4100脳定位固定装置に固定し、 GeorgePaxinos の「ラット脳の定位マップ」に関して、プローブ カテーテルを左線条体 (座標 AP:+0.2mm; ML: - 3.0mm; DV: - 3.5mm) に埋め込みました。 最後の投与後、1 時間後にラットを麻酔し、Yang Zanzhang [12] の改良型 Longa 縫合法を使用してラットを局所脳虚血モデル (MCAO モデル) を作成しました。 対照群では釣り糸を10mm挿入するだけで、その他の手順は手術群と同じであった。 モデリング後、意識があり自由に動く状態でマイクロ透析プローブを挿入し、リンガー液を使用してμ 脳マイクロ透析液を 4 度で収集し、透析液のチューブを 20 分で収集しました。 透析液の各チューブを収集したら、直ちに - 20 度の冷蔵庫に保管し、透析後は - 70 度の冷蔵庫に移すものとします。 プローブの回収率は使用前に測定され、透析液中のモノアミン神経伝達物質の濃度を換算するために使用されました。
カンクサの働き - 記憶力の向上
2.3 HPLC-ECD 分析
移動相構成: 移動相には、1 リットルあたり 829ml の 0.15mol・L-1 クエン酸-クエン酸ナトリウム緩衝液が含まれます。 0.1mol・L-1 EDTA二ナトリウム 1ml; メタノール 150ml; {{10}}アルキル硫酸ナトリウム0.283g。 移動相の流量を 0.7ml・min-1 に設定し、カラムオーブンの温度を 28 度に設定します。 電気化学検出器の動作電圧は、それぞれ 2、3、4 チャンネルで、200mV、400mV、600mV です。 ゲインは2nAです。 注入量は25μlです。 標準曲線は、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5mg・L-1のグラジエント混合標準液で描きます。
2.4 統計処理
実験データは x フィールド ± s で表され、繰り返し測定データは SPSS13.0 統計ソフトウェアを使用して分析されます。
図1-6は、ラット線条体の細胞外液中のNE、DA、DOPAC、HIAA、HVA、および5-HTレベルの変化を示しています。 この図から、脳虚血後、線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質の代謝障害が生じ、各神経伝達物質の含有量が増加していることがわかる。 一定の範囲内では、虚血時間が長くなるにつれて増加がより顕著になります。 90分の虚血では、線条体の細胞外液中のDAおよびNEの濃度は、対照群のレベルの3倍を超えていた。 対照群のNE、DA、DOPAC、HIAA、HVA、および5-HTのレベルは高値から低値に減少しました。これは、左総頚動脈結紮後の左脳の一時的な虚血に関連している可能性があります。プローブの挿入による損傷。 変化曲線から、ECH と CXQ は脳虚血後の DA、DOPAC、HIAA、HVA、および 5-HT のピーク濃度を低下させることができ、CXQ と高用量 ECH はより明らかです。 各神経伝達物質の時間経過曲線の下方へのシフトは、ECH が脳虚血ラットの脳における神経伝達物質およびその代謝物の増加を阻害できることを示しています。
図2 ラットの線条体におけるDAの細胞外レベルに対するエキノシドの影響
図 3 ラット線条体における DOPAC の細胞外レベルに対するエキノシドの効果 図 4 ラット線条体における HIVV の細胞外レベルに対するエキノシドの効果
図 5 ラットの線条体における HVA の細胞外レベルに対するエキノシドの効果 図 6 ラットの 5-HT 線条体の細胞外レベルに対するエキノシドの効果
4.議論
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脳虚血によって引き起こされる脳損傷のメカニズムは複雑です。 脳虚血の場合、脳内のモノアミン神経伝達物質が障害され、NE、DA、5-HT の含有量が大幅に減少します。 脳虚血が重度であればあるほど、脳組織内の NE、DA、および 5-HT の含有量は低くなります [13]。 脳内微小透析法により、脳虚血中に細胞外液中のモノアミン神経伝達物質の含有量が増加し、虚血期間全体にわたって持続し、虚血時間が延長するとさらに増加することが証明された。 実験結果は報告書[14]と一致していた。エキノシド新疆ウイグル自治区の特別な植物であるCistanche desserticolaから単離精製されたフェニルエタノイド配糖体の有効成分です。 老化防止、学習と記憶の改善、抗ニューロンアポトーシスなど、多くの神経保護効果があります。。 この研究では、HPLC-ECD 検出技術と組み合わせた国内の先進的な脳微小透析を使用して、その効果を予備的に調査しました。エキノシド脳虚血実験用ラットの線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質とその代謝産物に関する研究。 その結果、ECHは脳虚血による線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質の増加を抑制し、脳虚血組織の損傷を改善する効果が高いことが示されました。
