敗血症のラットの急性肺損傷に対するCistancheDeserticolaの効果
Mar 09, 2022
連絡先：Audrey Hu Whatsapp / hp：0086 13880143964メール：audrey.hu@wecistanche.com
[概要]目的：の効果を研究することニクジュヨウ急性肺損傷（ALI）敗血症のラット。 方法：敗血症のモデルは盲腸結紮と穿刺によって作られました。 組織病理学的検査を実施し、ALIの生物学的マーカーを測定した。 結果：生理食塩水群の光学顕微鏡下で、浮腫がありました肺の隙間、多数の赤血球と好中球、および肺胞腔内の血漿タンパク質。 The肺湿重量/乾燥重量、好中球の割合、および肺肺胞洗浄液の肺血管透過性と肺肺胞透過性のタンパク質含有量、およびMDA、SOD、およびMPOは、対応して有意に増加しました。 とのグループでニクジュヨウ治療では、これらのALIの指標は、生理食塩水を使用したグループの指標よりも有意に低かった。
結論: ニクジュヨウ敗血症のラットのALIに大きな影響を及ぼします。 治療メカニズムは、おそらく好中球と酸化的フリーラジカルの阻害によるものです。
【キーワード】敗血症; 急性肺損傷; ニクジュヨウ
敗血症は臨床上の緊急事態であり重大な病気であり、効果的な治療薬を探すことは、臨床および基礎研究において常に大きな問題でした。 敗血症の伝統的な漢方薬の病因は、義の欠如と悪のあふれんばかりです。 体の邪悪な繁栄のための攻撃療法は、効果的な治療法の1つです。Cistancheは伝統的な強壮剤の漢方薬です。 薬理学的研究により、細胞のDNA合成速度を高めたり、酸素フリーラジカルに抵抗したりするなどの保護機能があることが確認されています。 著者は実験的に肺の問題の損傷に関するCistanche敗血症の治療のための効果的な調査を提供するために、敗血症で。
1材料と方法
1. 1 動物健康華中科技大学実験動物センターから提供された体重200〜250gの雄5Dラット40匹、品質検査番号：TJLA—2008—1670はランダムに3つのグループに分けられました：8つの通常の生理食塩水グループ、Ig/ありましたmLナスペーストグループで12匹、5g/mLで12匹Cistancheグループ。 実験動物は、1日2回、15日間の定期的な強制経口投与によって対応する薬物を与えられました（Cistancheデザートコラ抽出物は、この病院の伝統的な漢方薬準備室から提供されました）、盲腸結紮および穿孔の12分後に文献の方法に従って実験動物に200mg/kgの投与量を使用しました。 標本のコレクション。
1.2 ラットの肺の組織学的検査。動物の左葉を少量取ります肺各グループから、10％ホルムアルデヒドで固定し、切片をパラフィン包埋し、HE染色し、通常の光学顕微鏡で観察し、これに基づいて、肺25で1mm3を作る問題それはパーセントグルタルアルデヒド溶液で固定され、次に1パーセント四酸化溶液で固定され、エタノールとアセトンで脱水され、Epon 81に埋め込まれ、超薄切片が準備され、ウラン鉛で染色され、透過型電子顕微鏡で観察されました顕微鏡。
1.3 ラット肺問題の湿重量/乾重量比、肺胞洗浄液中の細胞数比、およびタンパク質含有量の測定重量比。別のグループのラットは開胸後に肺胞洗浄を受け、洗浄液は顕微鏡下で細胞数と細胞分類を受けた。 クマシーブリリアントブルー法を使用して、タンパク質含有量を決定し、計算します肺透過性指数（肺胞洗浄液タンパク質/血漿タンパク質、LPI）。
1.4 ラットの肺血管透過性（PVP）の変化周らによって導入された方法によると。 （2）投与後、各群の動物は盲腸結紮および穿孔を受けており、50mg /kgのランタンの大腿静脈注射を使用して胸部を開き、肺を除去した。 周囲の問題を取り除き、肺ホルムアミド溶液（ホルムアミドの量は20mg / 100g体重）で、45-50 Tインキュベーターで72時間インキュベートし、問題のすべての色素が浸出するまで待ち、問題を取り出し、遠心分離し、上澄み、紫外分光光度計を使用して620nmで測色を実行し、検量線に従ってエタノール含有量を計算して、PVPの変化を決定します。
1.5 ラット肺問題におけるマロンジアルデヒド（MDA）の測定チオバルビツール酸（TBA）法を使用して、MDA活性を測定しました。 4mLの1.67mol/L硫酸を加えます。 0 .541パーセントのホスホン酸を50mLの試験片に加え、よく混合し、3000r / minで10分間遠心分離し、上記のように沈殿をもう一度処理してから、1mLの再蒸留水、1mLのTBA溶液、95パーセントの無水物を加えます。 60分間浴し、5 mLのn-ブタノール、標準としてテトラエトキシプロパンで抽出し、最終濃度はlnmol / L、吸光度を測定するために532nmの蛍光分光光度計を使用します。
1.6 ラットの肺の問題におけるスーパーオキシドジスムターゼ（SOD）の測定文献[4]の方法によれば、SOD活性はHuangpuyinオキシダーゼ法（Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineeringから購入したキット）によって決定されました。
1.7 ラットにおけるミエロペルオキシダーゼ（MPO）の測定肺問題。肺の問題を取り上げて、残留血液を等張食塩水で可能な限り洗浄し、{{0}}。5パーセントの臭化セチルトリメチル（PH6.0）を含むリン酸緩衝液に入れます。ホモジネートの5パーセントを作成します。キットの説明書に従って操作してください。
1.8 統計的手法SPSS統計ソフトウェアを使用し、t検定とX2検定を使用して（x±s）形式でデータを測定します。
Cistanche
2件の結果
2.1ウェット/ドライ重量比の比較肺各グループの問題、細胞数比、および肺胞洗浄液中のタンパク質含有量を表1に示します。肺生理食塩水群の湿重量/乾重量比は、Cistancheグループ（P<0.05 or="" 0.01).="" the="" cell="" count="" ratio="" and="" protein="" content="" in="" the="" alveolar="" lavage="" fluid="" of="" the="">Cistancheグループは生理食塩水グループよりも有意に低かった（P<0.05 or="" 0.01).="" 0.="" 01),="" and="" with="" the="" increase="" of="" the="" dose="" concentration,="" it="" shows="" a="" significant="">
表1各グループのラットの肺胞洗浄液中の肺の問題の湿重量/乾重量比と細胞数比およびタンパク質含有量の比較（X±S）
通常の生理食塩水群と比較して、P<0.><001. below="" is="" the="">
2.2各グループのラットの肺の問題の形態学的変化の比較。 一般的な観察：肺生理食塩水群では、表面にさまざまな程度のうっ血と浮腫があり、縁に多数の肺梗塞があり、著しく拡大して暗赤色でした。 の肺Cistancheグループは明るい赤で、表面は軽度のうっ血と浮腫で、明らかな肺梗塞はありませんでした。 光学顕微鏡観察は、生理食塩水群において、肺胞および肺間質性うっ血および浮腫、肺胞腔への多数のびまん性好中球浸潤、いくつかの膿瘍形成、および様々な程度の無気肺、壊死、および代償性気腫があったことを示した。 、血栓および同様の透明な膜形成。 Cistancheグループの上記の病変は有意に減少しました。 生理食塩水群では、肺胞上皮細胞が腫れ、層状小体が明らかに空になり、大きな液胞が形成され、毛細血管内皮細胞が腫れ、内皮細胞が継続的に損傷し、細胞間空間が広がり、毛細血管および肺胞基底膜が緩んで広がった。 不規則な厚み、不均一な厚み。 Cistanche群では、肺胞上皮細胞は腫れず、層状小体の排出が減少し、形成された液胞の数は少なく、毛細血管内皮細胞間の接続は正常に近く、基底膜はわずかに緩んで不規則に厚くなっていました。 Ig / niL cistancheグループと比較して、5g / mL cistancheグループは、肺の問題の形態学的変化の範囲が狭く、肺損傷の程度は軽かった。
2.3各グループのラットのLPIとPVPの比較を表2に示します。生理食塩水グループのLPIとPVPは、CistancheグループのLPIとPVPよりも有意に高かった（PV0。05または0.01 ）。 CistancheグループのLPIとPVPは低く、有意な用量効果関係がありました。
2.4MDA.SOD.MPOの活動の比較肺各グループのラットの問題を表3に示します。肺生理食塩水群の問題は、Cistanche一方、Cistancheグループの肺の問題におけるSOD活性とMPO活性は有意に増加しました（F<0.05 or="">
3ディスカッション
多臓器不全は、敗血症の後期における不可逆的な状態と高い死亡率の根本的な原因です（5）。 臓器機能を保護することは、敗血症の高い臨床的死亡率を低下させる上で非常に重要です。 肺は多臓器不全の最初の臓器です。 敗血症の患者の1/3は、急性肺損傷（ALI）および急性呼吸窮迫症候群（ARDS）で死亡します。 ALIの主な病態生理学的メカニズムは、肺の問題における多数の好中球の蓄積であり、血管内皮細胞を活性化して付着させます。 同時に、単一電子を伝達する還元型補酵素IIオキシダーゼの濃度が上昇し、呼吸バーストを引き起こし、大量の酸素フリーラジカルを生成し、強力な酸化によって細胞膜と膜構造の損傷と機能を引き起こします。 障害物⑹。 過酸化脂質は、問題の酸素フリーラジカルの変化を反映しており、肺損傷の程度に直接関係しています（7）。 身体の酵素的および非酵素的抗ラジカル酸化システムでは、SODの活性は問題のある損傷の程度との良好な相関関係を維持します⑺。 生理食塩水群と比較して、Cistanche群のMDAおよびSOD活性は統計的に有意な差を示しました。 Cistancheには、免疫機能、アンチエイジング、細胞DNA合成速度を高める機能があります。 実験結果は、Cistancheグループの肺係数、PLT、肺胞洗浄液好中球比、および肺血管透過性が有意に減少し、肺問題のMDA活性が有意に減少し、SODが有意に増加し、MPO活性が減少したことを示した。 同時に、形態学的観察により、肺の問題による損傷の程度が大幅に減少し、好中球の浸潤が減少し、5g/mLのCistancheグループはIg/mLのCistancheグループよりも肺損傷が少なく、良好であったことが示されました。用量効果の関係。 これは、CistancheがALIに対して重要な保護効果を持っていることを示唆しています。 メカニズムは次のとおりです。（1）炎症細胞の移動を阻害する肺、好中球および他の活性化細胞によって生成される酸素フリーラジカルを減らして、バイオフィルムを保護します。 （2）核酸とタンパク質の合成を促進し、肺の損傷を防ぎます。 （3）食細胞の免疫機能を高め、減らす肺エンドトキシンによって引き起こされる問題の損傷。 実験結果は、体を強化し、欠乏を強化することにより、臨床的敗血症における急性肺損傷の治療のための実験的基礎を提供します。
参照
[1]JinHuiming。 盲腸結紮および穿孔後の敗血症モデル[J]。 病理生理学の中国ジャーナル"990、6（2）：126〜127。
[2] Zhou WG、Mc Collum MO、Levine BA、他。 ラットの膵炎関連急性肺損傷における血小板活性化因子の役割[J]。 Am J Pathol、1992、140：971 -979。
[3] Wang Qian、Zhu Xiaofeng、ZhaoXilong。 現代医学の実験方法[M]。 北京：People's Medical Publishing House、2007：508。
[4] Zhang Xiuming、Li Jianzhai、WeiMingjing。 現代の臨床生化学実験科学[M]。 北京：People's Military Medical Press、2008年：896。
[5]羅Zhengyao。 ショック研究[M]。 Tianjin：Tianjin Science and Technology Press、2008：345。
[6] Xanthous CA、ホールJB。 サムセルRW。 ヒトの疾患におけるエンドトキシン、パート2抗エンドトキシン療法の生物学的効果と臨床評価[J]