概要

目的: 一般的かどうかを明らかにすることシスタノシド(GC) が改善する認知機能障害特定のアンドロゲン受容体（AR）を媒介することにより急速に老化するマウス（SAMP8）シナプスタンパク質の発現制御． 

方法: 合計 76 7- 月齢の雄 SAMP8 マウスをモデル群、GC 群、GC + フルタミド (F) 群、GC + フルベストラント (ICI) 群、F 群、および ICI 群にランダムに分けました。 各グループのマウスの学習および記憶機能をモリス水迷路でテストしました。 ウェスタンブロッティングとRT-PCRを使用して検査しました。シナプトフィジンの発現レベル各グループのマウスの ( SYN)、シナプス後密度 － 95 ( PSD － 95)、および脳由来神経栄養因子 (BDNF)。

結果:GC は SAMP8 マウスの学習機能と認知機能を大幅に改善した。

GCs 群と比較して、GCs + F 群および GCs + ICI 群のマウスの学習および記憶機能は有意に低下しました。 ウェスタンブロッティングおよびRT-PCRの結果、BDNF、SYN、およびPSD-95の発現レベルが、モデル群と比較してGC群でタンパク質レベルおよび遺伝子レベルで有意に増加していることが示されました(P < 0。 {{ 11}}5) ． SYN 発現レベルは GCs + F および GCs + ICI 群で増加し、BDNF および PSD － 95 の発現レベルは GCs 群と比較して GCs + F および GCs + ICI 群で有意に減少しました（P ＜ 0. 05）。 ．

結論: GC は AR を特異的に媒介して SAMP8 マウスのシナプス可塑性を強化し、それにより学習機能と認知機能が改善される可能性があります。

キーワード:一般的なシスタノシド; アンドロゲン受容体; シナプス可塑性。 SAMP8 マウス

シスタンシュ サプリメント 認知機能改善 栄養補助食品 PhGs75% Ech 30% Act 12%

アルツハイマー病(AD) は一般的です神経変性疾患、臨床的には進行性の認知機能の低下と精神的および心理的状態の変化を特徴とします[1]。 研究によると、男性のAD患者のテストステロンレベルは正常な男性よりも大幅に低いことがわかっています。

の患者の認知機能その後、さまざまな程度に改善されましたケトン体補充療法[2]、これは、加齢に伴うアンドロゲンレベルの低下が、高齢男性におけるアルツハイマー病の危険因子である可能性があることを示しています。

キスタンケ デスティコーラ総配糖体 (一般的なシスタノシド、GC）は、カンクサの主な抽出物の 1 つであり、アルツハイマー病関連の学習と学習を改善することができます。認知機能障害[3]。 さらに、胃管栄養法による GC の投与により、動物のテストステロン レベルが大幅に増加しました [4]。 GCには陽を促進する機能もあり、効果を発揮できます。

アンドロゲン様の薬力学的効果。 これまでの研究では、テストステロンがアルツハイマー病モデル動物の学習機能と認知機能を改善できることが報告されており、このプロセスは特定のアンドロゲン受容体（アンドロゲン受容体、AR）媒介に依存しています[5]。

AD患者の認知機能障害がシナプス可塑性と密接に関連していることはよく知られています。 しかし、GC がシナプス可塑性を調節し、それによって学習機能や認知機能を改善する具体的なメカニズムはまだ不明です。 この研究は、GCが特定のARRRを媒介してシナプス可塑性に影響を与え、それによってADの学習機能と認知機能を改善するかどうかを調査することを目的としました。

1 材料と方法

1.1 実験動物と実験器具

3- 月齢の雄 SAMP8 マウスを北京大学医学部 (SCXK [北京] 2016-0010) から購入し、生後 7 か月になるまで飼育しました。 動物は(24±1)度の清潔な環境に保管され、

動物には自然光が与えられ、餌と水は自由に摂取でき、実験動物の使用に関する 3R 原則に従って人道的ケアが行われました。 この実験研究は、包頭医科大学の実験動物倫理委員会によって承認されています（包頭医科大学番号 20201102）。

実験で使用する主な試薬は次のとおりです。キスタンケ デスティコーラ 総配糖体(GC、西安慈源生物有限公司); アンドロゲン受容体拮抗薬フルタミド（Sigma Company、米国）； エストロゲン受容体拮抗薬フルベストラント（ICI 182780、米国）Med Chem Express）。 ウサギ抗マウスBDNF抗体、

PSD-95抗体、SYN抗体、-アクチン抗体（米国Proteintech Company）; タンパク質電気泳動溶液、タンパク質転写溶液、TEMED、アクリルアミド緩衝液、過硫酸アンモニウム、Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNA合成キット、タレント蛍光定量検出

試薬キット（Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.）など。主な実験設備には、垂直プレート電気泳動タンク、電気泳動装置、トランスファータンク、脱色シェーカー（Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.）、タンパク質ゲルイメージング分析システムが含まれます。 （Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.）、リアルタイム蛍光定量PCR装置（米国Roche）など

1.2 グループ化と管理

2 匹のマウスは給餌過程で自然に死亡し、残りの 78 匹のマウスはモデル グループ、GC グループ、GC + フルベストラント (F) グループ、GC + フルベストラント (ICI) グループ、F グループ、ICI にランダムに分けられました。

それぞれ 13 匹の動物からなるグループ。 モデル群、F 群、ICI 群を除く他の群には、GC を 50 mg/(kg・d) の用量で 30 日間継続投与しました。

GC投与24日後から、GC＋フルタミド（F）群とGC＋フルベストラント（ICI）群には、GC投与3｛｝｝｝分後にF（5mg/kg/日）を腹腔内注射した。強制経口投与により。 ）、ICI（1 mg/kg/日）、7日間の連続注射。 マウスの最大胃容積が 0.5 mL、1 回/日になるように投与濃度を調整します。

1.3モリス水迷路テスト

マウスは1日前に水環境に適応した。 モリス水迷路は6日間続きました。 最初の 5 日間は測位とナビゲーションのテストでした。 マウスは、4 つの象限のそれぞれで 1 日 1 回、毎回 1 分間訓練されました。 各トレーニング間隔は 15 分で、記録も同時に記録されました。 動物の測位およびナビゲーションテストの逃走潜時。 6日目にプラットフォームを水から取り出し、宇宙探査テストを実施します。 プラットホームを横切った回数と、マウスのターゲット象限で費やした時間の割合を記録します。 ターゲット象限）および空間探査水泳軌跡（空間プローブテストの水泳軌跡）およびその他の指標。

1.4 ウェスタンブロット検出

SYN、PSD-95、BDNF シナプス関連タンパク質の発現。 モリス水迷路テストの後、すべてのマウスに定期的に麻酔をかけ、頭を切り落とし、脳を取り出し、海馬を剥ぎ取りました。 海馬組織をタンパク質溶解し、4度の超音波によって破壊し、氷上に30分間放置し、12,000 r/minで15分間、4度で遠心分離した。 上清を採取し、BCA法によりタンパク質濃度を測定した。 タンパク質をロードした後、80 V の定電圧でスタッキングゲル電気泳動、120 V の定電圧で分離ゲル電気泳動、および 300 mA の定流量でウェットトランスファーを実行します。 PVDF メンブレンを取り出し、5% スキムミルクで室温で 80 分間ブロッキングし、TBST で 3 回洗浄します。 15分/回、一次抗体を4度の振とう台上で一晩インキュベートしました。 翌日、膜をTBSTで3回洗浄した。

15分/回、二次抗体を室温で2時間インキュベートした後、ECL発色を実行し、化学発光イメージングシステムでイメージングを実行しました。 β-アクチンを内部標準として使用し、バンドの光学濃度値をImage Jソフトウェアを使用して分析しました。

1. 5ＲRT－PCRＲ検出

SYN、PSD-95、および BDNF の mRNA 発現は、Trizol 抽出法に従って海馬組織の全 RNA から抽出され、逆転写後に cDNA が生成されました。 相対蛍光定量検出には、Talent 蛍光定量検出キットを使用しました。 実験を 3 回繰り返し、その結果を 2 - に換算し、ΔΔCT を解析しました。 マウスアクチン、SYN、PSD-95、および BDNF プライマーは Shanghai Sangon Company によって設計され、プライマー配列を表 1 に示します。

1.6 統計分析

SPSS 25. 0 統計ソフトウェアを使用して処理し、Graphpad Prism 8 ソフトウェアを使用して統計グラフを描画し、一元配置分散分析を使用して複数のサンプルのペア平均を比較しました。 P < 0。 05 は、差が統計的に有意であることを意味します。