組み合わせた細菌発酵とその生物学的活動中に生成された微生物酵素に関する研究ⅲ
Oct 28, 2024
第3章酵素の抗酸化活性に関する研究
多くの人間の病気はに関連していることが証明されています活性酸素とフリーラジカル、 のような炎症, 動脈硬化症,エージング, 糖尿病, 癌、など過剰なフリーラジカル体内では、タンパク質の変性、細胞の損傷と死、さらには体の病理学的変化を引き起こす可能性があります。したがって、国内外の多くの研究は、食事を通じてフリーラジカルによって引き起こされる病気を予防および調節するための天然の抗酸化成分が豊富な食品を探しています。今日、生活水準が増加しているため、人々は徐々に自分の体に焦点を移したので、ますます多くの健康製品が無限の流れに現れています。ただし、本当に便利になるのは簡単ではありません。酵素は、人々の生活の中で自分で作ることができる一種の食べ物です。コストはそれほど高くなく、多くの利点があります。
微生物酵素には、抗菌性や抗炎症性などのさまざまな健康機能があり、代謝を促進し、免疫、ホワイトニングと抗老化、解毒、抗がんの改善があります。現在、国内外の微生物酵素の抗酸化特性に関する研究は比較的少ないため、それらについて詳細な研究を実施する予定です。このホワイトペーパーでは、Apple酵素を研究オブジェクトとして採用し、総フェノール含有量を使用して、パワー、DPPH・フリーラジカル、フリーラジカル、スーパーオキシドフリーラジカル、ABTSフリーラジカルスカベンジング能力を測定指数として、3ヶ月の発酵後のリンゴ酵素の包括的かつ体系的な調査を実施します。抗酸化活性成分の組成と含有量が研究され、その抗酸化活性が理解されました。
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3.1材料と方法
3.1.1材料
（1）実験材料
滅菌条件下で滅菌水で新鮮なリンゴを洗い、無菌の手術テーブルで自然に乾燥させ、皮をむき、後で使用するためにスライスします。 1：1の質量比で、滅菌ガラス瓶に白砂糖とリンゴを加えます。実験に必要な細菌を活性化し、最適なスキーム（この操作ステップは対照群で省略されている）に従って酵素に接種し、密閉して涼しく乾燥した場所に置きます。 3か月の室温発酵の後、サンプルを採取して、パルプを含む酵素液全体を取得し、ろ過します。上清を実験サンプルとして使用し、関連データを決定する前に、高速遠心分離機で10000rpmでサンプルを15分間遠心分離します。不必要な汚染を避けるために、酵素を作る過程で、すべての操作が無菌条件下で行われることは注目に値します。
（2）主な楽器
分光光度計：v -1100、上海アンティング科学機器工場。
一定の温度水浴：HH -2、Wuhan Litian Technology Instrument Co.、Ltd。その他の楽器は2.1.3と同じです。
3.1.2メソッド
（1）総フェノール含有量の決定[53]
standard標準曲線の準備：
正確に{{{0}}}。123gの胆嚢酸を溶かし、少量の蒸留水に溶解し、5 0 0 ml体積フラスコに移して体積を補います。 8をクリーン1 {{1 {1 {12}}}} ml体積フラスコ、追加{0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、および1.4 mlの胆嚢酸標準溶液をそれぞれ追加します。 min、冷却し、20 mlに希釈し、室温で30分間置きます。分光光度計を使用して、650 nmの波長で吸光度Aを測定し、水平軸として吸光度Aと垂直軸としてサンプル濃度を備えた標準曲線を描画します。 ②検出
蒸留水を100μL、200μL、300μL、400μL、および500μLサンプル溶液に46mLに加え、フォリンフェノール試薬1mLを加え、均等に混合し、3分間反応し、20％NACO3の3mLを加え、25度一定温度水で揺れ、吸収性を備えた吸収剤としての吸収剤を使用します。分光光度計。総フェノール含有量は胆嚢酸の等価物として表され、総フェノール含有量は標準曲線方程式に従って計算されます。
（2）還元アッセイ[54]
1 0 0μl、2 {00μl、300μl、400μl、および500μlのサンプルを0.2mol/Lと6.6のpH値で2.5mlのリン酸緩衝液に加えて、ポタスミン濃度1の濃度1％の濃度で2.5mlを追加します（ 30分間50度。次に、2.5mlのトリクロロ酢酸（w/v）を10％の質量濃度で加え、高速遠心分離機で3000rpmで10分間遠心分離します。取り出した直後、2.5mlの上清を容積フラスコにして、蒸留水2.5mlと0.5mlの塩化鉄（w/v）を0.1％の0.5ml（w/v）を加えます。蒸留水を空白の制御として使用し、分光光度計を使用して700nmの波長で吸光度Aを測定します。電力を低下させる強さは、吸光度値によって判断できます。吸光度が高いほど、還元力が強くなります。
（3）スーパーオキシド陰イオンの測定フリーラジカル除去効果[55]
0。0 5 mol/l ph 8.2 Tris-HClバッファーを25度の水浴で2 0} minで予熱します。それぞれ10％、20％、30％、40％、および50％、および0.4 mlの25 mmol/Lピロガロール溶液の濃度を持つ1 mlの酵素サンプル溶液を加えます。よく混ぜ、25度の水浴で5分間反応します。 1.0 mlの8 mol/L HClを加えて、反応を終了します。 TRIS-HCLバッファーを参照として使用し、分光光度計を使用して299 nmの波長で吸光度Aを測定して、除去速度を計算します。空白のコントロールグループでは、サンプルの代わりに1 mLの溶媒を使用しました。 o 2-清掃率は、式3.1：o 2-除去速度（％）=（1- a2）/a1×100（3.1）/a1×100（3.1）に従って計算されました。 A2はサンプルの吸光度です。
（4）ヒドロキシルラジカルに対する除去効果の決定[56]
1 00μl、200μl、300μl、400μl、500μlのサンプル溶液を2mlに加えた後、6mmol/lのモル質量濃度で1.4mlの過酸化水素に加えてから、0.6mlのサリシル化ナトリウム濃度を含む0.6mlのサリチル酸ナトリウム濃度を添加して添加します。 1.5mmol/l、および1時間37度の一定温度水浴で加熱します。蒸留水でゼロに調整し、分光光度計を使用して562nmの波長で吸光度Aを測定します。治療ごとに3つの複製を実行します。フォーミュラ3.2に従ってヒドロキシルラジカル除去速度を計算します：ヒドロキシルラジカル除去速度（％）= [（a 1- a2）/a1]×100（3.2）×100（3.2）a1は空白の平均吸収性です。 A2は、サンプル溶液の平均吸光度です。 （5）DPPHフリーラジカル除去効果の決定[57]
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1 0％、20％、30％、40％、および50％の濃度の酵素サンプル溶液を正確にピペット2 mlの体積フラスコにし、体積フラスコに80％DPPHエタノール水溶液を加えます。モル質量濃度は2×10-4 mol/lです。混合後、室温で30分間立ってください。参照として80％のエタノール溶液を使用して、517 nmの波長でサンプルの吸光度を測定します。これはA1として記録されています。 2 mLのDPPH溶液と2 mLのエタノール溶液を80％の質量濃度と混合し、A0として記録された同じ波長で吸光度を測定します。 2 mLの酵素溶液と2 mLのエタノール溶液を80％の質量濃度と混合し、A2として記録された同じ波長で吸光度を測定します。式3.3に従ってDPPHフリーラジカル除去率を計算します。
DPPHフリーラジカル除去率（％）{{0}}} [1-}（a 1- a2）/a 0]×100（3.3）×100（3.3）ここで、A1は2 mL DPPH 80％イーサノールAquousソリューションの吸収と2 MLゼンメイズです。 A2は、質量濃度による2 mLの酵素溶液と2 mL 80％エタノールの混合溶液の吸光度です。 A0は、質量濃度による2 mL DPPH溶液と2 mL 80％エタノールの混合溶液の吸光度です。
（6）ABTSフリーラジカル除去能力[58]
混合溶液の最終濃度が2.45 mmol/Lになるまで、硫酸カリウムを7 mmol/L ABTS溶液に加えます。混合溶液を涼しく乾燥した場所に室温で12〜16時間置きます。 1μl、3μl、5μl、7μl、および9μlのサンプル溶液を5mmol/l ph7.4リン酸緩衝液で10μlで補充し、上記の硫酸カリウムとABTS混合溶液の10mlと均等に混合し、30度の反応温度と5minの反応時間で反応させました。蒸留水でゼロ、分光光度計を使用して734NMの波長で吸光度Aを測定します。式3.4に従ってABTSフリーラジカル除去率を計算します：
ABTSフリーラジカル除去速度（％）= [（a 1- a2）/a1]×100（3.4）×100（3.4）：a1は空白のコントロールグループの吸光度です。 A2は、実験グループの吸光度です
3.2結果と分析
3.2.1総フェノール含有量
（1）標準曲線
図3.1に示すように、総フェノール含有量の標準曲線は、水平軸として胆嚢の濃度と垂直軸として吸光度値aを描画しました。
図3.1総フェノール含有量の標準曲線
図3.1から、標準曲線方程式はy =11。375x+0。
（2）サンプルの決定
対照群におけるリンゴ酵素の総フェノール含有量測定の結果と、異なる濃度での実験群の測定を図3.2に示します。
図3.2総フェノール含有量の曲線
図3.2に示すように、対照群と実験群の両方のリンゴ酵素は、総フェノール含有量が高い、追加されたサンプル溶液の量の増加とともに増加します。同じ濃度勾配では、対照群のリンゴ酵素の総フェノール含有量は0。673mg。673mgから2.8 0 7mgに増加し、実験グループの総フェノール含有量は0.961mgから4.185mgに増加しました。実験グループの総フェノール含有量は、対照群のそれよりもはるかに高く、上昇傾向はより明白です。総フェノール含有量によると、実験グループの全体的な抗酸化活性は、対照群の抗酸化活性よりも大きい。
3.2.2電力の低減
異なる濃度での対照群および実験群におけるリンゴ酵素の電力測定を減らす結果を図3.3に示します。
図3.3に示すように、リンゴ酵素の力を低下させる傾向の変化は、総フェノール含有量の変化する傾向に似ています。実験グループの削減力は、コントロールグループの電力よりも高く、実験グループであろうとコントロールグループであろうと、実験で提示された濃度範囲内で、還元力は、サンプル溶液の量の増加に伴い、増加する傾向を示しています。また、実験データは、電力の低減に関して、実験グループの抗酸化活性が対照群の抗酸化活性よりも大きいことを確認しました。
3.2.3スーパーオキシドアニオンフリーラジカル除去能力
コントロールグループにおけるリンゴ酵素のスーパーオキシド陰イオンのフリーラジカル除去能力および異なる濃度の実験群の結果を図3.4に示します。
図3.4に示すように、実験グループと対照群の間でスーパーオキシドアニオンフリーラジカル除去能力に大きな違いがあります。実験で提示された濃度範囲内で、サンプル濃度が10％から20％であり、濃度が20％を超えた後、変化が明らかではない場合、実験グループのスーパーオキシドアニオンフリーラジカル除去能力は最も大きく変化します。濃度が50％の場合、スーパーオキシドアニオンのフリーラジカル除去能力は85.4％に達します。対照群が示すスーパーオキシドフリーラジカル除去能力は、トレンドチャートから明確に見ることができます。酵素濃度が増加するにつれて、このフリーラジカルの除去能力も増加し、ゆっくりと変化し、徐々に安定した状態になります。清掃能力は最大42.6％に達します。実験グループは、コントロールグループのほぼ2倍の高さです。
3.2.4ヒドロキシルフリーラジカル除去能力
対照群のリンゴ酵素と異なる濃度の実験群のヒドロキシルフリーラジカル除去能力の変化を図3.5に示します。
図3.5ヒドロキシルフリーラジカルの除去の曲線
図3.5から、実験で提示された濃度範囲内で、実験群と対照群の酵素のヒドロキシルフリーラジカル除去能力が増加して増加したことがわかります。実験グループのヒドロキシルフリーラジカル除去能力は、対照群のそれよりも低く、低濃度では非常に貧弱に機能しました。高濃度では、ヒドロキシルフリーラジカル除去能力が大幅に増加しました。その理由は、発酵プロセス中に、実験群と対照群のリンゴ酵素の微生物の種類と内容が異なっており、発酵によって生成された各製品の二次代謝産物と成分の内容は異なっていたため、示されている抗酸化剤能力は異なっていたためです。
3.2.5 DPPH・フリーラジカル除去能力
他の検出方法と比較して、DPPH・フリーラジカル除去能力は、短期間で抗酸化活性を評価するために広く使用されています[59]。図3.6に示すように、異なる濃度でのDPPH・さまざまな濃度でのフリーラジカル除去能力を、対照群および実験群のリンゴ酵素の結果に従ってプロットしました。
図3.6に示すように、コントロールグループのリンゴ酵素の濃度が30％未満である場合、DPPH・フリーラジカル除去能力は50％未満でしたが、実験グループのリンゴ酵素は、低濃度でより高いDPPH・フリーラジカル除去能力も示しました。実験結果は、オレイザエ、酵母、好熱性連鎖球菌、ブルガリアのラクトバチルスの添加が、酵素のDPPH・フリーラジカル除去能力に有益であることを示しています。酵素濃度が50％の場合、この能力は91.4％に達し、同じ濃度で対照群の69.8％よりもはるかに高くなります。
3.2.6 ABTSラジカル除去能力
対照群および異なる濃度の実験グループのABTSラジカル除去能力の結果を図3.7に示します。
図3.7 ABTSラジカル除去能力の曲線
図3.7から、酵素添加量が5μLを超えると、実験群のリンゴ酵素の除去率が高くなることがわかります。エレルらによる研究。 ABTSラジカルの除去能力は、より高い濃度のフェノール物質に大きく依存することを示しました[60]。総フェノール含有量の測定の結果は、実験グループの総フェノール含有量が対照群のそれよりも高いことを示しました。図3.7の実験結果は、ABTSラジカルの除去能力が対照群の容量よりも大きいことを確認しました。
3.3この章の概要
この章では、4つの選択されたリンゴの株を発酵させた発酵によって生成されたリンゴ酵素の抗酸化活性、酵素サンプルの濃度、および抗酸化活性成分の比較と、実験グループと対照群間のフリーラジカル除去能力の関係を研究します。実験結果は、対照群のリンゴ酵素の総フェノール含有量が実験群のそれよりも低く、その還元力、スーパーオキシドアニオンフリーラジカル、DPPHフリーラジカル、およびABTSフリーラジカル除去能力がコントロールグループのものよりも優れていることを示しています。対照群の酵素は、ヒドロキシルフリーラジカルに対して特に優れた除去能力を持っています。
一般に、実験群はより高い抗酸化活性を示し、微生物酵素を作るために株を人為的に添加することの実現可能性をさらに確認しました。このようにして、微生物酵素食品は、元の自然発酵に基づいて、人間の健康に有益な物質が多く、人々が予想される方向に向上させることができます。
