非コード RNA である Nc886 は、線維芽細胞における細胞老化の新しいバイオマーカーおよびエピジェネティックメディエーターです
Mar 27, 2023
概要：
生物とヒトモデルの機能研究により、エピジェネティックな変化が老化のプロセスに大きな影響を与える可能性があることが明らかになりました。 エピジェネティックな制御因子の 1 つであるノンコーディング RNA (ncRNA) は、mRNA とそのタンパク質の発現を変更する上で重要な役割を果たします。 細胞の表現型を仲介することができます。 長い ncRNA である nc886 (=vtRNA2-1 または pre-miR-886) は、UVB によって引き起こされるケラチノ サイトの腫瘍形成と光損傷を抑制することができることが報告されています。 この研究は、線維芽細胞の複製老化における nc886 の役割を決定し、nc886 発現を制御できる物質が細胞老化を調節できるかどうかを決定することを目的としていました。 複製老化線維芽細胞では、nc886 発現が減少し、メチル化 nc886 が増加しました。
老化細胞におけるSA{{0}}gal活性およびp16INK4Aおよびp21Waf1/Cip1の発現を含む老化バイオマーカーに変化があった。 これらの発見は、加齢に伴う nc886 の減少が線維芽細胞の細胞老化に関連していること、および nc886 発現の増加が細胞老化を抑制する可能性があることを示しています。 AbsoluTea Concentrate 2.0 (ATC) は、加齢に関連するバイオマーカーを阻害することにより、nc886 発現を増加させ、線維芽細胞の細胞老化を改善しました。 これらの結果は、nc886 がアンチエイジングの新しいターゲットとしての可能性を秘めており、ATC が強力なエピジェネティックなアンチエイジング成分になり得ることを示しています。
老化は、時間の経過とともにすべての個人に発生する、機能的および有機的な衰退の進行性のプロセスです。 多くの要因が老化に影響を与え、さまざまな社会的要因、経済、病気、栄養、遺伝、環境、および精神状態がすべて特定の役割を果たします. 老化のメカニズムは非常に複雑で、代表的な老化説としては、主に細胞突然変異説、DNA損傷説、ミトコンドリア損傷説、テロメア説、フリーラジカル説、非酵素糖化説、免疫機能変化説、神経内分泌老化説などがあります。 . 私たちの国は伝統的な漢方薬の資源が豊富で、肌の老化を遅らせるための優れた添加物を見つけるための基礎を提供しています.
たとえば、研究では、カンカにはアンチエイジング効果があることがわかりました。 カンカのアンチエイジング効果は、主にその中のアミノ酸と多糖類によるものです。 アミノ酸は人体にとって必須の栄養素であり、タンパク質を合成し、体の正常な代謝を維持することができます. カンカは、アミノ酸の含有量が非常に高いです。 これらのアミノ酸は体細胞にエネルギーを供給し、細胞の修復と再生に有益な新しい代謝を促進します。
キーワード:
線維芽細胞; 複製老化; エピジェネティックな規制; nc886; 緑茶エキス。
1.はじめに
細胞増殖の停止に続く不可逆的な状態の細胞老化は、組織の機能不全と生物の老化の潜在的に重要な原因として浮上しています [1]。 老化は、老化関連ベータガラクトシダーゼ (SA- -gal) の高い活性、p16INK4A や p21Waf1/Cip1 などの老化バイオマーカーの発現増加、および LaminB1 の発現低下によって特徴付けられます [2]。 細胞老化には、複製老化とストレス誘発性早期老化の 2 つの基本的なタイプがあります。 複製老化は、正常な細胞が限られた数の分裂に達した後に分裂を停止する現象として定義されます。 それは経年劣化に関係しています。 継続的な損傷の蓄積は、線維芽細胞の複製老化を誘発し、細胞外マトリックス (ECM) を改造および組織化する能力の喪失につながります。 老化した真皮の主な特徴は、コラーゲン線維の量の減少とマトリックスメタロプロテイナーゼ (MMP) の産生の増加であり、これが真皮の薄く無秩序な構造に寄与しています [3,4]。
エピジェネティックな調節メカニズムは、老化プロセスの重要なメディエーターであり、ゲノムおよび分子環境におけるストレッサーおよび加齢に伴う変化に適応します。 これらのエピジェネティックな変化は、コア ヒストンの大幅な減少、翻訳後修飾および DNA メチル化によるヒストンの変形、標準的なヒストンのヒストン バリアントへの置換、生物および複製老化中の非コード RNA (ncRNA) の発現の変化など、さまざまなレベルで発生します [5 、6]。 nc886 は 101 ヌクレオチド長の ncRNA であり、標的タンパク質に結合できるため、タンパク質の活性を媒介し、遺伝子発現を制御します [7]。 nc886 は、その発現パターンと、腫瘍抑制遺伝子の遺伝子座であるヒト染色体 5q31 上のそのゲノム位置によって、主に推測される腫瘍抑制因子としても提案されています。 nc886 発現の特徴は、プロモーター領域の CpG DNA メチル化による悪性腫瘍の頻繁なサイレンシングです [8]。 以前の研究に基づいて、UVB 照射による nc886 発現の減少は、ケラチノサイトのプロテインキナーゼ RNA 活性化 (PKR) 経路を介した COX-2 および MMP-9 の増加と関連していることを発見しました。 nc886 発現の促進は、UVB 保護材料を開発するための有用な戦略となり得る [9,10]。
緑茶は、にきび、酒さ、乾癬、ウイルス性疣贅、さらには皮膚がんなど、さまざまな皮膚疾患の治療法として研究されてきました. 没食子酸 (GC) とエピガロカテキン没食子酸 (EGCG) を含むフェノール化合物は、緑茶のよく知られた活性化合物です。 (-)-エピガロカテキン-3-(3"-O-メチル)ガレート (3" Me-EGCG) は、EGCG のユニークな O-メチル化形態であり、ウーロン茶と緑茶に含まれています。 特に、チャンウォン 3 号 (アモーレパシフィックの緑茶品種) には、他の緑茶品種よりも多くの 3 インチ Me-EGCG が含まれています [11]。 . この研究では、線維芽細胞の複製老化における nc886 の役割を調査し、高濃度緑茶 3 インチ Me-EGCG 調製物 (AbsoluTea Concentrate 2.0) が nc886 発現を増加させ、細胞老化を改善できるかどうかを判断しました。
2. 結果
2.1. AbsoluTea Concentrate 2.0 (ATC) の化学的プロファイル
AbsoluTea Concentrate 2.0 (ATC) の化学的プロファイルを図 1B に示します。 結果は、方法セクションで説明したように調製されたATCのHPLCを使用して得られました。 ATC には 30% 以上の 3 インチ Me-EGCG が含まれていました (図 1B)。緑茶抽出物には 3 インチ Me-EGCG が含まれていないか、濃度が 6 パーセント未満であることが知られています [13,14]。 ATCで処理された若い繊維芽細胞と老化した繊維芽細胞の両方が、緑茶の70％エタノール抽出物で処理された繊維芽細胞よりもnc886発現の増加を示しました（補足図S1A）。 さらに、ATCで処理した老化線維芽細胞のSA- -gal発現レベルは、緑茶抽出物で処理したものよりも減少しました（補足図S1B）。
2.2. nc886は線維芽細胞の細胞老化を調節する
線維芽細胞の細胞老化における nc886 の役割を観察するために、成長と継代培養による複製老化モデルを使用しました。 補足図S2に示すように、SA- -galの活性と老化マーカーp16INK4Aおよびp21Waf1/Cip1の発現レベルは増加し、ラミンB1発現は若い細胞と比較して老化線維芽細胞で減少しました。 これまでの多くの研究で、老化の原因は酸化ストレスであることが報告されています。 この一連の酸化ストレスが細胞の老化に関与しているかどうかを確認するために、若い (p3) および老化した線維芽細胞 (p30) の ROS レベルを測定しました。 結果は、ROSレベルが加齢とともに増加することを示しました（補足図S2D）。 線維芽細胞の細胞老化に対する nc886 の潜在的な影響を観察するために、継代数ごとの nc886 遺伝子発現レベルを測定しました。 nc886 発現のレベルは、継代数の増加に伴い減少しました (図 2A)。
CpG アイランドのメチル化に伴い nc886 の発現が低下することが報告されています。 老化線維芽細胞における nc886 ダウンレギュレーションが nc886 のメチル化によって媒介されたかどうかを判断するために、メチル化特異的 PCR を実施しました。 図 2A に示すように、継代数の増加に伴い nc886 のメチル化が増加しました (図 2A)。 この結果は、線維芽細胞の継代数が多い場合の nc886 の発現低下は、nc886 DNA メチル化の増加によるものであることを示しています。 線維芽細胞の老化における nc886 の役割を検証するために、nc886 の過剰発現モデルとノックダウン モデルにおける老化マーカーの変化が決定されました。 結果は、nc886 過剰発現を伴う老化線維芽細胞のグループが、SA-β-gal 活性の低下、p16INK4A および p21Waf1/Cip1 の発現レベルの低下、および laminB1 のレベルの上昇を示したことを明らかにしました。 さらに、老化した線維芽細胞における ROS の増加は、nc886 の過剰発現によって減少しました (図 2B)。 逆に、nc886 ノックダウンを持つ若い線維芽細胞のグループでは、細胞老化が加速され、p16INK4A や p21Waf1/Cip1 などの細胞老化マーカーの発現レベルが増加しました (図 2C)。 これらの結果は、nc886 が老化マーカーの発現を調節することにより、線維芽細胞の細胞老化を調節できることを示唆しています (図 2B、C)。
2.3. ATC は nc886 発現を調節することにより細胞老化を緩和する
上記で得られた結果は、nc886 発現の増加が老化マーカーを媒介することによって細胞老化を改善できることを示しました。 nc886 発現に対する ATC の影響を観察するために、老化線維芽細胞における nc886 の発現レベル、およびメチル化を、非細胞毒性濃度の ATC で処理した後に評価しました (図 3A)。 図 3B および C に示すように、ATC は nc886 の発現を有意に増加させ、濃度依存的に nc886 のメチル化を減少させました。 この結果は、ATC による nc886 発現の増加が nc886 メチル化の阻害を介して媒介されることを示しました。 さらに、ATC が SA- -gal 活性を阻害し、老化した線維芽細胞の老化マーカー p16INK4A および p21Waf1/Cip1 の発現レベルを低下させることが観察されました (図 3D、E)。 しかし、加齢とともに減少することが知られている LaminB1 の発現は、ATC で処理した老化線維芽細胞で増加しました (図 3E)。 これらの結果は、ATC が nc886 発現を増加させることによって細胞の老化を軽減できることを示しています。
2.4. ATC は ECM と SASP の加齢に伴う変化を規制します
線維芽細胞老化の特徴は、コラーゲンを分解する成分である MMP-1 の活性が増加する一方で、コラーゲン合成が減少することです [15,16]。 MMP-1 の増加とコラーゲンの減少は、継代数の多い老化した線維芽細胞で確認されました (図 4A)。 ただし、ATC は MMP-1 の発現を抑制し、老化した線維芽細胞のコラーゲン合成を増加させました。 この結果は、老化した線維芽細胞における MMP-1 発現とコラーゲン合成の調節を通じて、ATC が ECM の加齢に伴う変化を改善できることを示しています (図 4B)。 老化細胞が特定の炎症誘発性因子、成長因子、およびタンパク質分解酵素を分泌する老化関連分泌表現型 (SASP) は、老化関連疾患の発症および進行に寄与することが報告されている [17–19]。 SASP、特に IL-1、IL_6、IL-8 などの炎症誘発性サイトカインに対する ATC の効果を観察しました。 図 4C に示すように、ATC は老化誘導 IL-1、IL-6、および IL-8 の発現レベルを下方制御しました。 これは、ATC が SASP の抑制を通じてアンチエイジング効果を発揮できることを示唆しています。
3. ディスカッション
老化細胞は、拡大した、しばしば不規則な核およびクロマチンの再編成を含む特徴的な形態学的変化を起こします。 老化が DNA 損傷、複製の枯渇、または癌遺伝子の発現によって誘発されると、主にラミン B1 が失われます。 さまざまな内部または外部ストレッサーが DNA 損傷応答 (DDR) 経路をトリガーして、p53 および/または p16INK4A 経路を活性化する可能性があります。 p16INK4A は Cdk4/6 を不活性化し、リン酸化 pRb の蓄積を引き起こし、E2F 転写因子の調節を妨害し、細胞周期の停止または老化を誘導します [20,21]。 主に機能不全のミトコンドリアによって生成される活性酸素種 (ROS) の生成の増加は、DNA 損傷および p53、p16INK4A、および p21Waf1/Cip1 を含む老化シグナル伝達経路のトランス活性化を介して細胞老化につながる可能性があります [22]。
この研究では、継代数の増加に伴い nc886 発現が減少し、nc886 発現のアップレギュレーションが LaminB1、p16INK4A、p21Waf1/Cip1、および ROS 産生の仲介を介して細胞老化を緩和することがわかりました。 nc886 は RNA ポリメラーゼ III (Pol III) によって転写され、多くの悪性腫瘍で CpG DNA 過剰メチル化によってサイレンシングされます [8]。 nc886の発現は、老化した線維芽細胞のCpGアイランドのメチル化とともに減少することが観察されました。 この結果は、CpG アイランドの過剰メチル化が、細胞老化の抑制因子としての nc886 の機能を損なうことを示しています。
nc886 の影響を受ける特定の遺伝子発現経路は不明です。 それらには、他の ncRNA について以前に報告されたものが含まれる可能性があります。 nc886 は、クロマチン構造、転写因子活性、転写後、および翻訳後の遺伝子調節のレベルで老化シグナル伝達経路を直接的または間接的に媒介することにより、細胞老化において重要な役割を果たすことができます [23]。 たとえば、nc886 は、細胞周期進行の老化経路を仲介することができます。 ncRNA としての AK156230 は、オートファジーおよび細胞周期進行におけるその役割を通じて、線維芽細胞の複製老化の誘導に関連していることが報告されています。 AK156230 のダウンレギュレーションは、サイクリン依存性キナーゼ 1 (CDK1) を減少させながら、p53 と p21 を活性化することにより、細胞が老化応答を示すように誘導しました [24]。 老化関連 ncRNA1 (SAL-RNA1)、MALAT1、および MIAT は、細胞老化の負の調節因子として知られています。 それらは老化した繊維芽細胞で減少します。 これらの遺伝子のダウンレギュレーションは、SA-gal、p16、p21、および p53 などの老化マーカーの増加につながる可能性があります [25]。 細胞老化に対する MALAT1 の効果は、発癌性転写因子 b-Myb/Mybl2 の減少によって達成されました。
老化の間にさまざまな ncRNA の発現が影響を受けますが、老化に機能的に関与するものはごくわずかです。 機能に関与するメカニズムを理解するには ncRNA の局在化が重要であるため、老化に影響を与える分子メカニズムを説明する際には、核と細胞質の ncRNA を別々に説明します [26]。 細胞質に位置する ncRNA は、標的 mRNA との塩基対合を介して翻訳調節因子として機能する可能性があります [27]。 ncRNA は、mRNA の安定性を増減させることによって、タンパク質の発現レベルに影響を与えることができます [28]。
たとえば、RAS による老化の間、細胞質の UCA1 は hnRNPA1 を隔離することによって p16 mRNA の安定化に寄与します [29]。 nc886 には、プロテイン キナーゼ RNA 活性化 (PKR) 結合部位が含まれています。 PKR–nc886 結合は、PKR 活性を阻害する可能性があります。 二本鎖 RNA (dsRNA) の細胞質受容体である PKR は、感染、サイトカイン、酸化ストレス、および照射 (UV を含む) によって活性化されるセリン/スレオニンプロテインキナーゼによって調節され、その後の炎症およびアポトーシスの誘導につながる [20 、21] [30、31]。 nc886 は、dsRNA に匹敵する親和性で PKR に結合し、PKR が活性化されるのを防ぎます。 nc886 ノックダウンは、PKR 経路を介して真核生物開始因子 2 サブユニット (eIF2) のリン酸化を引き起こし、細胞死を引き起こし、全体的な細胞タンパク質合成を阻害します。 COX-2、IL-8、および TNF- による MMP の産生は、ヒト軟骨細胞の PKR 経路によって媒介されることが報告されています [32]。 以前の研究では、UVB による炎症がケラチノサイトの nc886-PKR 経路を介して調節できることも実証しました [10]。
さらに、PKR は、新生児の心筋細胞における酸化ストレスによる損傷に関連しています。 PKR の阻害は、アポトーシスと炎症を軽減することにより、H2O2- による損傷から保護します [33]。 炎症と酸化ストレスは、老化プロセスを誘発する主要な要因です。 したがって、PKR 経路は nc886 枯渇によって誘導される線維芽細胞の細胞老化を仲介できます。 線維芽細胞の細胞老化に対する nc886 の効果に関与する詳細な調節メカニズムを解明するには、さらなる研究が必要です。
緑茶抽出物の老化防止効果は、以前の研究で広く報告されています。 緑茶の抗酸化作用と抗炎症作用は、アンチエイジング効果に寄与するメカニズムとしてよく知られています。 予備試験では、ATC が緑茶の 70% 以上のエタノール抽出物によって nc886 発現を大幅に増加させることがわかりました (補足図 S1A)。 この結果は、3" Me-EGCG を含む濃縮カテキンが nc886 発現のアップレギュレーションに起因する可能性があることを示唆しています。nc886 刺激剤が細胞の老化を防止できるかどうかを判断するために、老化した線維芽細胞に対する ATC の効果を観察しました。老化線維芽細胞の nc886 遺伝子のメチル化レベルを阻害する (図 3B、C). ATC は、SA- -gal 活性、LaminB1、p16INK4A、および p21Waf1/Cip1 などの老化バイオマーカーを媒介することにより、細胞老化も緩和しました (図 3E ）。
さらに、細胞老化によって誘発される MMP-1 の増加とコラーゲン産生の減少は、ATC によって回復されました (図 4B)。 SASP 因子は、細胞の種類と加齢によるストレスの種類によってわずかに異なります。それらは、IL-6 や IL{{6} などの炎症性サイトカインを調節する NF-κB の標的遺伝子として一般的に知られています。 }。 この研究では、老化細胞における IL-1、IL_6、および IL-8 の発現増加が ATC によって抑制されることを確認しました (図 4C)。 細胞老化に対する緑茶の改善効果が、nc886 調節、抗酸化、抗炎症などの複数のメカニズムによって達成される可能性を排除することはできません。 ただし、我々の結果は、ATCによるnc886の増加が細胞老化の抑制に重要な役割を果たし、その後線維芽細胞のECM産生に影響を与えることを示唆しています。
4.材料と方法
4.1. ATCの準備
現在の研究に使用されている乾燥緑茶葉 (Camellia sinensis var. sinensis cv. Jangwon No. 3) は、韓国の済州島のドルソンギ茶園 (33°16023.900 N 126°28058.300 E) で栽培された茶の木から得られました。 乾燥茶葉 (170 g) を 70% EtOH (v/v) で室温で 16 時間抽出しました。 次に、抽出物を凍結乾燥機（TF10D、TEFIC BIOTECH、西安、中国）を使用して粉末化しました。 ATC を調製するために、EtOH 抽出物をロータリーエバポレーターで 10 倍に濃縮し、AB-8 樹脂を充填したカラム (内径 5 cm、長さ 45 cm) にロードしました。 カラムの溶媒溶出は、20%、30%、および 100% EtOH (v/v) の 4 倍のベッド ボリューム (BV) で実行されました。 この研究では、溶出前にカラム内の残留溶媒をエアコンプレッサーで除去しました。 ３０％ＥｔＯＨ溶出液を２０倍に濃縮し、ポリアミドカラム（内径２．５ｃｍ、長さ４０ｃｍ）にかけた。 ポリアミドカラムは、１０パーセントおよび１００パーセントＥｔＯＨのＢＶの５倍で溶出された。 100% EtOH 溶出液を注意深く濃縮し、凍結乾燥しました。
4.2. ATCによる細胞培養と細胞処理
ヒト皮膚線維芽細胞 (HDF) は ATCC (米国バージニア州マナサス) から購入しました。 細胞培養は、10% のウシ胎児血清 (Thermo Fisher Scientific、米国マサチューセッツ州ウォルサム) および 1% のペニシリンを添加したダルベッコ改変イーグル培地 (WELGENE、大邱、韓国) を使用して、37 ℃、5% CO2 の制御条件下で実施しました。 -ストレプトマイシン (WELGENE、大邱、韓国)。 細胞を 2 × 105 細胞/プレートの密度で 6- ウェル プレートに播種しました。 60% のコンフルエンスに達した後、指定濃度の ATC で 72 時間処理しました。
4.3. SA- -ギャル染色とフローサイトメトリー分析
製造元の指示に従って、SPiDER- -Gal (Dojindo、熊本、日本) を使用して細胞を染色しました。 EVOS® FL Cell Imaging System (Thermo Fisher Scientific、米国マサチューセッツ州ウォルサム) および BD FACS Calibur フローサイトメーター (BD Biosciences、米国ニュージャージー州フランクリンレイクス) で細胞を分析しました。
4.4. 細胞内ROS測定
細胞内 ROS の生成は、蛍光 ROS インジケーターである C20,70 - ジクロロジヒドロフルオレセイン ジアセテート (H2DCFDA; Molecular Probes) を使用してモニターされました。 細胞を H2DCFDA (5 µM) とともに 37 ℃ で 30 分間インキュベートしました。 BD FACS Caliburフローサイトメーター（BD Biosciences、Franklin Lakes、NJ、USA）で細胞関連蛍光を検出しました。
4.5. リアルタイム PCR およびメチル化特異的 PCR
ＴＲＩｚｏｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国マサチューセッツ州ウォルサム）を使用して全ＲＮＡを抽出した。 RNAの定量測定は、Epochマイクロプレート分光光度計（BioTek、Winooski、VT、USA）を使用して実行されました。 cDNAは、am-fiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix（GenDEPOT、Barker、TX、USA）を使用して合成されました。 AccuPrep® Genomic DNA Extraction Kit (BIONEER、大田、韓国) を使用して、ゲノム DNA を抽出しました。 バイサルファイト変換は、EZ DNAメチル化キット（Zymo Research、CA、USA）を使用して実施しました。 qRT-PCRを実行するために、AMPIGENE®cDNA合成キット（Enzo Life Sciences Inc.、Farming-dale、NY、USA）およびABI7500リアルタイムPCRシステム（Ambion Inc、Austin、TX、USA）を使用しました。 この研究で使用されるプライマー シーケンスは、表 1に記載されています。
4.6. 乳酸脱水素酵素アッセイ
LDHアッセイは、損傷した細胞から放出される乳酸脱水素酵素（LDH）活性を測定することにより、細胞毒性を決定するために使用されました。 製造元の指示に従って、ＬＤＨ細胞毒性ＷＳＴアッセイキット（Ｅｎｚｏ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ、ＮＹ、ＵＳＡ）を使用してアッセイを行った。
4.7. nc886過剰発現のためのDNAトランスフェクションおよびnc886ノックダウンのためのsiRNAトランスフェクション
細胞内での nc886 の過剰発現のための DNA を取得するために、テンプレートとして HDF のゲノム DNA と表 2 に記載されている以下のプライマーを使用して、AccuPower® PCR PreMix (BIONEER、大田、韓国) で DNA を増幅しました。
4.8. ウェスタンブロッティング
細胞溶解物は、PRO-PREP™ Protein Extraction Solution (iNtRON Biotechnology、京畿道、韓国) を使用して調製しました。 総タンパク質をNuPAGE電気泳動システム（Thermo Fisher Scientific、米国マサチューセッツ州ウォルサム）で分離し、ポリフッ化ビニリデン（PVDF）膜に転写しました。 p16INK4A、p21Waf1 / Cip1（Cell Signaling Technology、Danvers、MA、USA）、MMP1、Col1A2、および-actin（Santa Cruz Biotechnology、Inc.、Dallas、TX、USA）に対する一次抗体を使用して、免疫ブロッティングを実施しました。 ImageJ、ソフトウェアバージョン1.52a（国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、米国）を使用して、バンドのスキャン濃度測定値を分析しました。
4.9。 酵素免疫測定法
指示されたインキュベーション後、培養上清中のコラーゲン（Procollagen Type I C-Peptide EIA Kit、Takara、滋賀、日本）および MMP-1（R&D Systems、ミネアポリス、ミネソタ州、米国）を、酵素免疫測定法を使用して測定しました。 (ELISA) キットは製造元の指示に従ってください。
4.10. 統計分析
すべての結果は、平均 ± 標準偏差 (SD) として表示されます。 GraphPad Prism を使用した t 検定または分散分析 (ANOVA) によって、2 つのグループ間の違いを評価しました。 統計的有意性は、p < 0.05 または p < 0.01 として示されました。
5。結論
結論として、nc886 発現の調節は、線維芽細胞における細胞老化の潜在的な標的となり得、ATC は強力なエピジェネティックなアンチエイジング成分となり得る。
著者の貢献:
概念化、YK、KH、および EJ。 方法論 YK、HJ、N.-HP、および K.-SL。 データキュレーション、YK、HJ、および EC。 調査、YK、HJ、EC、K.-SL、N.-HP、および EJ。 プロジェクト管理、WP、DP、および EJ。 リソース、WP および DP。 監督、DP、および EJ。 執筆—原案、YK; 書き込み—レビューと編集、N.-HP、KH、WP、DP、および EJ すべての著者は、原稿の公開版を読み、同意しました。
資金:
この研究は外部からの資金提供を受けていません。
治験審査委員会の声明:
適用できない
インフォームド コンセント ステートメント:
適用できない。
データ利用可能性に関する声明:
データはリクエストに応じて提供されます。
利益相反:
著者は利益相反を宣言していません。
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