反応表面方法論による脱加工プロセスとシスチャンチ砂漠産物多糖の抗酸化活性の最適化
Mar 10, 2025
抽象的な：
客観的：Cistanche Destericola多糖類の脱色プロセスを最適化し、それらの抗酸化活性を調査します。
活性炭を脱色剤として使用する方法、活性炭の投与量、脱ラー化温度、脱ラー化時間、およびpHを含む4因子の効果、脱ラー化速度および多糖回収速度に対するpHを調査しました。単一因子の実験に基づいて、Cistanche Deserticola多糖類抽出物の脱色プロセスは、応答表面方法論を使用して最適化されました。 in vitro抗酸化活性評価方法を使用して、1、1-ジフェニル-2-ピクリルヒドラジン（DPPH）のフリーラジカル除去能力、総減少能力、ヒドロキシルラジカル除去能力、および2,2'-アジノbis（3-エチルベンゾチアゾール- 6-スルホン酸）ジアンモニウム塩（abts）カチオン砂漠砂漠産物の多糖のフリーラジカル除去能力が決定されました。結果、Cistanche Destericolaからの多糖類の抽出物の最適な脱ラー化プロセス条件は次のとおりでした：アクティブな炭素剤20％、脱ラー化温度37度、脱ラー化時間49分、pH 5.03。これらの最適な条件下では、脱植生率と多糖の回収率はそれぞれ62.66％と96.16％でした。脱色後、DPPHラジカルとヒドロキシルフリーラジカルを除去する能力が大幅に増加しましたが、ABTSアニオンラジカルを除去する能力は大幅に減少しました。結論脱色プロセスは操作が容易であり、良好な脱ラー化効果と多糖類の回収率を備えています。それは重要なアプリケーション値を持ち、後のCistanche Destericicola多糖の研究開発の基礎を提供します。
キーワード：Cistanche Deserticola多糖;脱色;応答表面の方法論;抗酸化活性
サイスンチェデザイトコラ効果
1.2.3多糖の回収率の測定
標準曲線の準備:
フェノール - 硫酸法が使用されました。約0。0 5 0 0 gのグルコース標準（105度で一定の重量から乾燥）を正確に計量し、50 mLの体積フラスコに希釈して、ストック溶液を準備しました。次に、1.0 mLのストック溶液を正確に測定し、体積フラスコで10 mLに希釈して、0.1 mg/mL標準溶液を取得しました。 10、20、30、40、50、60、70、80、90、および100μlのグルコースの標準溶液を1.5 mL遠心管に正確に測定しました。蒸留水を各チューブに加えて、総量の100μLを構成しました。 100μLの蒸留水を含む別の1.5 mL遠心チューブを、空白の制御溶液として使用しました。各チューブに、5％フェノール溶液100μlを添加し、完全に混合し、500μLの濃縮硫酸をすぐに加えました。チューブを3分間ボルテックスし、35分間放置しました。次に、200μLの反応溶液を96-ウェルプレートに移し、自動マイクロプレートリーダーを使用して吸光度を490 nmで測定しました。標準曲線は、垂直軸として吸光度（y）でプロットされ、水平軸としてグルコース濃度（x、ug/ml）をプロットしました。得られた標準曲線方程式は次のとおりです。
Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.
多糖含有量の測定:
希釈100μlのアリコートCistanche Deserticola多糖類抽出物を1.5 mL遠心分離機に正確に測定しました。吸光度値は上記の方法を使用して決定され、多糖濃度は標準曲線を使用して計算されました。
多糖の回収率の測定:
中の多糖類の質量Cistanche Deserticola上記の方法を使用して、脱色前後の抽出物を測定しました。多糖の回収率は、式（2）を使用して計算されました。
多糖の回収率（％）
=（maftermbebefore）×100％\ left（\ frac {m _ \ text {effer}}} {m _ \ text {before}} \ times 100 \％（mbeer mafter）×100％
どこ：
mbeforem _ \ text {before} mbefore and mafterm _ \ text {after} mafterは質量ですCistanche Deserticola脱色前後の多糖類（g）。
1.2.4単一因子実験設計
4つの因子活性化炭素投与量、脱ラー化温度、脱ラー化時間、および脱ロー率と多糖類回収率のpH-onの影響Cistanche Deserticola多糖類抽出物を調査しました。
活性炭の投与量の効果:
30分での脱色時間、50度での脱色温度、5.03でのpH（測定サンプル値）で固定された固定。活性炭の投与量が脱色率と多糖の回収率に及ぼす影響を研究しました。
脱色温度の影響:
20％（m：m）での活性炭投与量、30分での脱色時間、5.03でpHを修正しました。脱色温度が脱色率と多糖の回収率に対する影響を研究しました。
脱色時間の影響:
活性炭の投与量は20％、脱色温度は50度、pHは5.03で固定されました。脱色時間の脱ラー化率と多糖の回収率に対する影響が研究されました。
pHの効果:
20％（m：m）での活性炭投与量、50度での脱ラー化温度、30分での脱色時間を固定しました。脱ロー率と多糖の回収率に対するpHの影響を研究しました。
1.2.5応答表面最適化実験設計
単一因子実験で特定された最適な条件範囲に基づいて、ボックスビーンケンの実験設計法を使用して、脱色条件の4要素、3レベルの設計を実施しました。Cistanche Deserticola多糖類抽出物。脱ロー率と多糖の回収率を評価指数として使用しました。設計パラメーターを表1に示します。
1.2.6の抗酸化活性の決定Cistanche Deserticola多糖
（1）の決定Cistanche Deserticola多糖のDPPHラジカル除去能力
Kan Jintao et alによる方法に基づいています。 [21]わずかな修正により、0。5mlの1。0 mg/ml多糖の水溶液を2.4 mlの0。 （1、{{1 0}}ジフェニル{-2-ピクリルヒドラジン）および1.1 mLの蒸留水。混合物を37度37度で30分間反応させました。反応溶液の吸光度を517 nmで測定し、脱浸潤の前後に1.0 mg/mL多糖のDPPHラジカル除去速度を式（3）を使用して計算しました。
DPPHラジカル除去率（％）
{{0}}} [1-（a1 -a2）a 0]×100％=} \ left [1 -} \ frac {（a _1 - a _2）} {_2}} 100 \％= [1 -a0（a1 -a2）]×100％
どこ：
a1a _1 a1は、サンプル試験管の吸収性です。
A2A _2 A2は、無水エタノールがDPPH溶液を置き換えると吸光度です。
A {{0}}} a _0 a0は、蒸留水がサンプルを置き換えると吸収性です。
（2）の総還元力の決定Cistanche Deserticola多糖
Lu Xue et alによる方法を参照してください。 [22]、1。0脱色が準備された前後の多糖類が準備された後、1 mg/ml多糖。 5μlのサンプルと180μlのFRAP（鉄還元抗酸化剤の発生液）作業溶液を96-ウェルプレートに加え、完全に混合し、37度で5分間反応させました。吸光度は593 nmで測定され、多糖類の総減少力は、FESO4標準溶液の濃度の観点から発現しました。
（3）のヒドロキシルラジカル除去能力の決定Cistanche Deserticola多糖
文献[23]に記載されている方法と、脱色化前後のヒドロキシルラジカルスカベンジングアッセイキットの指示に従って、1。0 mg/ml多糖類が準備された。蒸留水を使用して、コントロールグループの吸光度（Acontrola _ \ Text {Control} Acontrol）の過酸化水素を置き換え、蒸留水を使用してサンプルを空白のグループ吸収性に置き換えました（{4}} \ Text {Blank} ablank）。吸光度値は550 nmで測定され、ヒドロキシルラジカル除去速度は式（4）を使用して計算されました。
ヒドロキシルラジカル除去率（％）
= [（acontrol -asample）（acontrol -ablank）]×100％= \ left [\ frac {（a _ \ text {control} - a _} \ {sample}}} {{{{{{{{{{{{{{{6 -{{{{{_} a _ \ text {blank}）} \ right] \ times 100 \％= [（acontrol -ablank）（acontrol -asample）]×100％
どこ：
asamplea _ \ text {sample} asampleはサンプルグループの吸収性です、
acontrola _ \ text {control} acontrolは、コントロールグループの吸収性です。
ablanka _ \ text {blank} ablankは、ブランクグループの吸収性です。
（4）ABTSカチオンラジカル除去能力の決定Cistanche Deserticola多糖
文献[24]に記載されている方法およびABTS陽イオンラジカル除去アッセイキットの指示によれば、1。0 mg/ml多糖類が準備された後。 10μLのサンプルを20μLの試薬作動溶液4および170μLのABTS作動溶液と混合し、徹底的に混合し、室温で暗所で6分間反応させました。脱イオン水を空白のコントロールとして使用しました。吸光度は405 nmで測定され、ABTS陽イオンラジカル除去速度は式（5）を使用して計算されました。
ABTS CATION RADICAL SCAVENGING速度（％）
= [（bblank -bsample）bblank]×100％= \ left [\ frac {（b {3}} \ text {blank} - b _ \ text {sample}）} {b _ \ the \ s \ s \ s \ the \ the \ the \ the \ the \ s \ the 100 \％= [bblank（bblank -bsample）]×100％
どこ：
bblankb _ \ text {blank} bblankは、蒸留水とABTS溶液の間の反応の吸収性です。
bsampleb _ \ text {sample} bsampleは、サンプルとABTS溶液の間の反応の吸収性です。
1.3データ処理
Sigmaplot 12.5ソフトウェアがプロットに使用され、設計エキスパート8。0。6ソフトウェアがデータ分析に使用されました。
