パートⅡ：腎結石性ウィスター雄ラットに対するG.Fruticosusの治療効果の評価

連絡先：Audrey Hu Whatsapp / hp：0086 13880143964メール：audrey.hu@wecistanche.com

Tilahun Alelign、Tesfaye Sisay Tessema、Asfaw Debella、Beyene Petros

概要

背景：エチオピアの民間療法では、科学的証拠が不十分ですが、薬用植物が尿路結石症を治療できるという主張があります。 この研究の目的は、実験的に誘発された腎結石ラットにおけるGomphocarpusfruticosus抽出物の治療効果を評価することでした。

方法：尿路結石症は、飲料水中のエチレングリコールを28日間与えることにより、オスのWistarラットに誘発された。 治癒効果は、抽出物200 mg / kgを15〜28日間経口投与した後に評価されました。 ラットを犠牲にする1日前に尿サンプルを採取した。 血液、肝臓、および腎臓のサンプルは、28日目に麻酔条件下で収集されました。尿中の結晶も光学顕微鏡で分析されました。

結果：G. fruticosus酢酸エチル抽出物はナトリウム（P<0.001), whereas="" it="" was="" significantly="" elevated="" the="" levels="" of="" magnesium="" and="" citrate=""><0.01)compared to="" lithiatic="" control.="">G. fruticosusBuOH抽出物はカリウム（P<0.01), calcium,="" and="" phosphate="" in="" urolithiatic="" rats.="" it="" was="" also="" observed="" that="">G. fruticosus酢酸エチル抽出物は、尿中のシュウ酸塩のレベルを低下させました（P<0.001), whereas="" it="" was="" increased="" the="" levels="" of="" magnesium=""><0.05) and="" citrate=""><0.01) in="" serum="" analysis="" after="" exposure="" to="" buoh="" extract.="" in="" the="" kidneys,="" caox="" crystal="" deposits="" were="" reduced="" significantly="" by="">G. fruticosus酢酸エチル抽出物（P<>

結論：G. fruticosus酢酸エチル抽出物は、尿路結石症の治療に強力でした。 ただし、尿路結石症に対する活性化合物の有効性を評価するには、さらなる研究が必要です。 キーワード：有効性、Gomphocarpus fruticosus、in vivo、尿路結石

カンカニクジュヨウ

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結果

G.fruticosus抽出物の治療効果

治癒的（治療的）研究では、選択された抽出物の用量はラットの2 0 0 mg / kg体重であり、これは2000 mg/kg体重の最大耐量の10分の1でした[32]。 これは、2000 mg / kgまでの安全性を明らかにした、以前の急性および/または亜急性毒性試験に基づいて選択されました。 飲料水中の塩化アンモニウム（1％）と組み合わせた0.75％EGの投与による腎臓結石の誘発は、Wistar雄ラットで確認されました。

尿（24時間）顕微鏡分析

尿サンプルの分析は、結晶密度とサイズの変化を示しました。 間でG. fruticosus連続溶媒抽出物、G. fruticosus酢酸エチル抽出物（図1k）およびG. fruticosusBuOH抽出物（図11）も結晶の数とサイズを減らしました（図1）。

図1200mg/kg抽出物用量での治癒的治療後のCaOx結晶の尿顕微鏡写真。シュウ酸カルシウムの結晶の形態と数を光学顕微鏡（40倍）で観察し、ウィスターのオスのラットの朝の尿を正常な対照/ビヒクルで観察した。 bリチアティックコントロール; cクエン酸カリウム（K-Cit）による治療; d Cystone; 私G. fruticosusPET抽出物; jG. fruticosusChl。 エキス; kG. fruticosus酢酸エチル抽出物; lG. fruticosusBuOH抽出物; そしてMG. fruticosus水性画分。

電解質および腎機能検査のための尿および血清分析

実験ラットでは、G. fruticosus酢酸エチル抽出物は、リチアティックコントロール（P<0.001). the="" level="" of="" potassium="" was="" reduced="" by="">G. fruticosusBuOH抽出物（P<0.010). treatment="" with="" the="" aqueous="" extract="" of="" etoac="" and="" buoh="" extracts="" of="">G. fruticosus尿中タンパク質排泄の有意な減少を示した（P<0.011) in="" relation="" to="" lithiatic="" control.="" sodium="" concentration="" was="" also="" reduced="" very="" significantly="" with="" the="" treatment="" of="" etoac="" extract="" of="">G. fruticosus (P<0.001). treatment="" by="" the="" extract="" of="">G. fruticosusBuOHは、リチアグループと比較して尿酸のレベルを下げました（P<0.050). however,="" lithogenic="" induction="" may="" cause="" impairments="" of="" renal="" function="" as="" evidenced="" by="" raising="" the="" levels="" of="" creatinine,="" proteins,="" and="" uric="" acids.="" in="" the="" serum="" analysis,="" the="" level="" of="" potassium="" was="" reduced="" by="">G. fruticosusリチウム化対照と比較したEtOAc抽出物（P<0.010). it="" was="" also="" found="" that="" the="" effects="" of="">G. fruticosus塩化物レベルのBuOH抽出物は通常の対照に近かった。 クレアチニンのレベルはによって上げられましたG. fruticosus粗抽出物およびPET抽出物（P<0.01)compared to="" the="" normal="" control="" (table="">

カンカニクジュヨウ

表2治療後28日目に200mg/kgの用量で選択された植物抽出物で治療された実験的雄ウィスターラットにおける腎結石形成電解質および腎機能マーカーの尿中（24時間）排泄および血清分析。混合抽出物{{0}}A.Aspera、S。punctata、およびR. abyssinicus抽出物（1：1：1の比率）、水性（aq。）、酢酸エチル（EtOAc）、ブタノールの組み合わせ（BuOH）、クロロホルム（Chl）、および石油エーテル（PET）。 データは、各グループの6匹のラットの平均±SDで示されました（n=6）。 平均間の比較は、グループI（車両制御）とグループII（リチア制御）に対して行われました。 *p<0。{{10}}5、**><0。01、*** p=""><0.001は、グループi（車両制御）、＃p><0.05、## p=""><0.01、### p=""><>

結晶形成阻害剤および促進剤の尿および血清分析

表3に示すように、マグネシウムのレベルは、G. fruticosusリチウム化対照と比較したEtOAc抽出物（P<0.010). similar="" to="" k-cit,="" the="" effects="" of="">G. fruticosus酢酸エチル抽出物はクエン酸塩のレベルを大幅に増加させました（P<>G. fruticosusBuOH抽出物は、罹患した（結石）対照（グループIラット）と比較して、尿中のカルシウムとリン酸塩のレベルの上昇を有意に低下させました（P<0.010). it="" was="" also="" observed="" that="">G.fruticosus酢酸エチル抽出物は、リチアティックコントロールと比較して、ライン中のシュウ酸塩のレベルを低下させました（P<0.001). in="" the="" serum="" analysis,="" the="" excretions="" of="" calcium,="" oxalate,="" and="" phosphate="" were="" grossly="" increased="" in="" lithiatic="" induced="" male="" wistar="" rats.="" the="" etoac="" extract="" of="">G. fruticosusマグネシウム（P<0.052). the="" serum="" level="" of="" citrate="" was="" increased="" after="" exposure="" to="" buoh="" extract="" of="">G. fruticosus(P<0.011), suggesting="" similar="" effects="" to="" potassium=""><0.001).>G. fruticosusChl。 抽出物は、通常のコントロールと比較して、クエンレートレベルを大幅に低下させました（P<0.001)(table>

表3処理後28日目のオスのウィスターラットの尿中排泄（24時間）および血清結晶阻害剤と促進剤の変化に対する200 mg/kg用量の植物抽出物の影響。混合抽出物{{0}}A.aspera、S。punctata、およびR. abyssinicus抽出物の組み合わせ（1：1：1の比率）。 データは、各グループの6匹のラットの平均±SDとして表されました（n=6）。 平均間の比較は、グループI（車両制御）とグループII（リチア制御）に対して行われました。 *p<0。{{10}}5、**><0。01、*** p=""><0.001は、グループi（車両制御）、＃p><0.05、## p=""><0.01、### p=""><>

アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）の血清レベルは、正常な（健康な）コントロール（P<0.050).>G. fruticosusPET抽出物は血清ASTレベルを有意に増加させました（P<0.001)compared to="" the="" healthy="" control.="" buoh="" extract="" of="" g.fruticosus="" lowered="" significantly="" the="" level="" of="" ast="" similar="" to=""><0.001) compared="" to="" lithiatic="" control="" (table="">

表4処理後28日目の200mg/kg抽出物用量での腎臓結石処理に関連する血清酵素活性に対する植物抽出物の影響。混合抽出物{{0}}A.aspera、S。punctata、およびR. abyssinicus抽出物の組み合わせ（1：1：1の比率）。 データは、各グループの6匹のラットの平均±SDとして表されました（n=6）。 平均間の比較は、グループI（車両制御）とグループII（リチア制御）に対して行われました。 *p<0。{{10}}5、**><0。01、*** p=""><0.001は、グループi（ビークルコントロール）、＃p><0.05、## p=""><0.01、### p=""><>

腎臓ホモジネート分析

カルシウム、リン、シュウ酸塩のレベルの濃度は、正常な対照（グループI）と比較して、石化したグループ（グループII）で増加しました。 すべての治療は、リン酸塩（P<0.050), except="" treatment="" with="" buoh="" and="" chl.="" extracts="" of="" g.fruticosus.="" the="" administration="" of="" the="" aqueous="" mixed="" extract="" and="">G. fruticosus酢酸エチル抽出物は、未処理のリチアグループと比較して、シュウ酸塩のレベルを大幅に低下させました（P<0.011)(table>

表5200mg / kgの用量で28日目に治癒試験を行った後の、リン酸塩、シュウ酸塩、カルシウムの腎臓ホモジネート成分に対する植物抽出物の影響。混合抽出物{{0}}A.aspera、S。punctata、およびR. abyssinicus抽出物の組み合わせ（1：1：1の比率）。 データは、各グループの6匹のラットの平均±SDとして表されました（n=6）。 平均間の比較は、グループI（車両制御）とグループII（リチア制御）に対して行われました。 *p<0。{{10}}5、**><0。01、*** p=""><0.001は、グループi（ビークルコントロール）、＃p><0.05、## p=""><0.01、### p=""><>

CaOx結晶沈着に対する腎臓の評価腎臓の組織切片におけるCaOx結晶の光学顕微鏡検査は、管状内腔におけるCaOx結晶を明らかにした。 CaOx沈着物のサイズと量は、結石症の対照と比較して、治療群間で減少しました。 の効果G. fruticosus酢酸エチル抽出物（G）とそのBuOH画分（H）は、リチアティックコントロール（B）と比較して結晶数を減らしましたが、G. fruticosus（I）（図2）。

図2抗CaOx結晶沈着効果（抽出物の用量200mg / kg）のための植物抽出物中の試験雄ウィスターラットの腎臓切片の代表的な顕微鏡（100倍）画像。腎臓組織の組織病理学a正常対照/ビヒクル、b結石コントロール、c K-Cit、d Cystone、eによる治療G. fruticosusPET抽出物、fG. fruticosusChl。 抽出、gG. fruticosusＥｔＯＡｃ抽出物、ｈG. fruticosusBuOH抽出物、および私G. fruticosusaq。 分数。 混合抽出物（A. aspera、S。punctata、およびR. abyssinicus抽出物の1：1：1の比率の組み合わせ）。 尿細管の多形性の不規則なCaOx結晶（黄色の円/矢印）。 画像は、ヘマトキシリン-エオシン染色を施した厚さ5μmのパラフィン切片でした。

カンカニクジュヨウエキスの利点：フリーラジカルを除去する

腎臓におけるCaOx沈着に対するG.fruticosus抽出物の効果

結晶沈着物の数は、4つの顕微鏡視野の平均をとることによって、皮質、延髄、および乳頭から数えられた。 岩石生成グループと比較して、腎臓のCaOx結晶沈着は大幅に減少しましたG.fruticosus酢酸エチル抽出物p<0.010). the="" number="" of="" crystal="" deposits="" was="" counted="" via="" a="" sagittal="" section="" or="" longitudinal="" plane="" of="" each="" renal="" tissue="" specimen="" divided="" into="" 4="" equal-sized="" regions(two="" virtual="" lines)and="" taking="" the="" mean="" of="" all="" fields(fig.="" 3).="" it="" has="" been="" noted="" that="">G. fruticosus酢酸エチル抽出物は、尿路結石症の治療において最も強力な薬剤であり、BuOH抽出物がそれに続きました。

図3G.fruticosusのさまざまな連続抽出物（抽出物の用量：200mg / kg）で処理した後の治癒的研究におけるCaOx結晶沈着スコア。データは、グループあたりn匹の{{0}}ラットの平均±SDとして表されました。 * p<0。05、** p=""><0.01、および*** p=""><>

カンカニクジュヨウエキスの利点：抗菌

討論

腎臓は血液から老廃物をろ過し、尿中に排泄します。これは、老廃物が尿に完全に溶解せず、腎臓結石の形成につながる場合は不可能です[59]。 バイオミネラリゼーションのプロセスには、過飽和、核形成、成長、凝集、尿細管内での保持などの連続的な物理化学的変化が含まれます[60,61]。 高シュウ酸尿症は、高シュウ酸尿症よりも腎結石形成の主な危険因子です[62]。

シュウ酸塩、リン酸塩、カルシウムの尿中排泄は増加しましたが、マグネシウムとクエン酸塩のレベルは、200mg / kg体重の投与量で治療群と比較して減少しました。これは、Lemannらによって報告された研究と同様でした。 [63]およびSathishetal。 [39]。 尿中のミネラル成分の増加は、腎尿細管再吸収の欠陥が原因である可能性があります。 同様に、電解質（ナトリウム、カリウム、および塩化物）は、腎結石の形成を促進する腎アシドーシスをスクリーニングするために使用されます[64]。 治癒的研究では、ナトリウムレベルは次のように大幅に減少しましたG. fruticosus酢酸エチル抽出物（P<0.001).in contrast,="" previous="" studies="" reported="" that="" excessive="" excretions="" of="" sodium="" and="" chloride="" in="" the="" urine="" indicate="" the="" diuretic="" activity="" of="" the="" test="" extract="" [65,="" 66],="" with="" increasing="" urinary="" output,="" which="" inhibits="" stone="" developments="">

マグネシウムはシュウ酸塩イオンと結合して尿中に可溶性シュウ酸塩複合体を形成し、カルシウムと結合してCaOxを形成するシュウ酸塩の利用可能性を低下させます[68,69]。 したがって、CaOx石は、マグネシウムが不足している人々によって形成される可能性が最も高いことが示唆される可能性があります。 これは、G. fruticosus酢酸エチル抽出物はマグネシウムとクエン酸塩のレベルを上昇させました（P<0.010) similar="" to="" k-cit="" in="" the="" curative="" test.="" the="" etoac="" extract="" of="">G. fruticosus尿中のシュウ酸塩のレベルを低下させた（P<0.001) compared="" to="" lithiatic="" control="" in="" the="" curative="" study.="" in="" the="" curative="" test,="" a=""><0.01) reduction="" in="" urinary="" levels="" of="" calcium="" and="" phosphate="" following="" g.fruticosus="" buoh="" extract="" administration="" indicates="" the="" presence="" of="" caox="" inhibitory="" constituents,="" which="" interfere="" with="" crystal="" nucleation="" and="" aggregations.="" moreover,="" an="" increase="" in="" calcium="" concentrations="" is="" a="" favoring="" environment="" for="" nucleation,="" and="" precipitation="" of="" calcium="" oxalate="" or="" calcium="" phosphate="" with="" subsequent="" crystal="" growth="" [32,39].="" similarly,="" increased="" urinary="" phosphate="" and="" oxalate="" excretions="" also="" provide="" a="" favorable="" environment="" for="" the="" formation="" of="" calcium="" phosphate,="" in="" turn,="" leading="" to="" calcium="" oxalate="" crystal="" depositions="" in="" the="" renal="" tubules="" [18,="">

治癒的研究では、G. fruticosus酢酸エチル抽出物（P<0.010) reduced="" serum="" levels="" of="" potassium.="" in="" addition,="" the="" effects="" of="">G. fruticosus塩化物レベルのBuOH抽出物は、治癒的研究中に通常の対照に近いことがわかりました。 ナトリウムの血清レベルは大幅に減少しましたG. fruticosusBuOH抽出物（P<0.050) compared="" to="" lithiatic="" control="" in="" the="" curative="" study.="" there="" was="" a="" decrease="" in="" serum="" oxalate="" excretions="" by="" etoac="" and="" buoh="" extracts="" of="">G.fruticosus岩石制御と比較して。 これは、シュウ酸塩形成の阻害、またはシュウ酸塩代謝の妨害のいずれかが原因である可能性があります。 同様に、G. fruticosusＥｔＯＡｃおよびＢｕＯＨ抽出物（ｐ<0.050) decreased="" calcium="" levels="" compared="" to="" lithiatic="" control="" in="" the="" curative="" test.="" the="" ability="" of="" these="" extracts="" to="" alter="" calcium="" and="" oxalate="" excretions="" may="" be="" due="" to="" the="" disintegration="" of="" mucoproteins,="" which="" are="" promoters="" of="" crystallization="" as="" reported="" by="" doddola="" et="" al.="" [34].="" in="" the="" present="" study,="" the="" level="" of="" citrate="" in="" the="" serum="" was="" increased="" by="">G. fruticosusBuOH抽出物（P<0.011), suggesting="" a="" possible="" curative="" effect="" close="" to="" k-cit="" treated="" group=""><0.001). the="" presence="" of="" tannins="" and="" flavonoids="" can="" lead="" to="" the="" relaxation="" of="" smooth="" muscles="" of="" the="" urinary="" tract,="" which="" could="" facilitate="" the="" expulsion="" of="" kidney="" stones="" as="" studied="" in="" rats="" [54],="" which="" were="" confirmed="" their="" presence="" in="" the="" phytochemical="" analysis="" of="">G. fruticosus本研究の抽出物。 現在の治療研究では、Gが。 fruticosusBuOH抽出物はASTレベルを非常に大幅に低下させました（P<0.001), which="" was="" close="" to="" k-cit="" compared="" to="" the="" lithiatic="" control="" in="" the="" curative="" studies.="" this="" can="" be="" attributed="" to="" the="" fact="" that="" abnormal="" levels="" of="" liver="" enzymes,="" particularly="" aminotransferases="" including="" alanine="" aminotransferase(alt),="" and="" aspartate="" aminotransferase="" (ast)="" are="" prognostic="" features="" (indicators)of="" the="" damages="" of="" liver="" cells,="" and="" the="" cellular="" integrity="" of="" the="" kidneys="" [71,="">

腎臓で実験的に誘発されたCaOx結晶沈着は、その部位への単球およびマクロファージの浸潤によって証明されるように、局所的な炎症にも関連しています[73]。 G.fruticosusのEtOAc抽出物（P<0.051)and its="" buoh="" extract=""><0.051) treated="" groups,="" the="" severity="" of="" caox="" crystal="" depositions="" reduced="" the="" kidneys="" compared="" to="" lithiatic="" control,="" which="" was="" similar="" to="" a="" study="" on="" the="" other="" herbal="" extract="" [74].="" in="" the="" curative="" study,="" etoac="" extract="" of="">G.fruticosusリン酸塩のレベルを大幅に減らしました（P<0.051)compared to="" the="" lithiatic="" control.="" tissue="" injury="" could="" be="" caused="" by="" exposures="" to="" phosphate="" and="" calcium="" phosphate="" crystals,="" leading="" to="" the="" generation="" of="" oxidative="" stress,="" lipid="" peroxidation,="" and="" depletion="" of="" antioxidant="" enzymes="" [75].="" consequently,="" the="" renal="" epithelial="" injury="" promotes="" crystal="" retention,="" as="" epithelial="" injury="" exposes="" a="" variety="" of="" crystal="" adhesion="" molecules="" on="" epithelial="" surfaces="" and="" promotes="" stone="" formation="" [73,="" 76].="" com="" accumulates="" in="" the="" kidneys="" by="" attaching="" to="" tubular="" cell="" membranes,="" followed="" by="" internalization="" by="" endocytosis,="" leading="" to="" cell="" death="" [75].="" the="" precipitation="" of="" oxalate="" as="" com="" in="" the="" tubular="" lumen="" has="" been="" linked="" with="" renal="" toxicity="" and="" inflammation,="" damaging="" the="" structures="" of="" mitochondria,="" inhibiting="" mitochondrial="" respiratory="" functions="" in="" proximal="" tubular="" cells,="" altering="" cellular="" permeability,="" and="" leading="" to="" renal="" cell="" death="">

研究の主な制限は、データ品質を改善したであろうCOM結晶とCOD結晶を区別するために、生体内の結晶化を拡大してよりよく解像する偏光顕微鏡を使用できないことです。 尿中利尿作用に対する試験抽出物の効果は評価されませんでした。 これらの制限にもかかわらず、本研究の強みは、研究で使用された伝統的な薬用植物の潜在的な有効性をテストするための標準的な実験計画と手順の使用でした。

cistancheは抗炎症することができます

結論

本研究は、伝統的な使用のいくつかの証拠を提供しましたG. fruticosus尿路結石管理における抽出物。 インビボ/動物試験により、G. fruticosus生化学的および組織病理学的所見から証明された抽出物。 今回の調査結果は、CaOxの治療効果を実証しましたG. fruticosus酢酸エチル抽出物。 尿路結石症の治療に関与する活性化合物を特定するには、さらなる研究が必要です。

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