パート Ⅰ 鉄キレート剤 PBT434 は脳微小血管内皮細胞における細胞間鉄輸送を調節する
Apr 28, 2023
概要
鉄や、銅やマンガンなどの他の遷移金属は脳機能をサポートするために不可欠ですが、過剰に蓄積すると細胞毒性があります。 この金属、特に鉄の過剰蓄積は、いくつかの神経疾患に共通しています。 これらには、アルツハイマー病、パーキンソン病、フリードリヒ失調症、および神経変性とそれに関連する脳の鉄蓄積を示すその他の疾患が含まれます。 血液脳関門による鉄流動の管理は、正常な生理機能およびこれらの病的状態における鉄の過剰蓄積に対する防御の第一線となります。 この研究では、パーキンソン病と多系統萎縮症の治療のために現在開発中の鉄キレート剤 PBT434 が、細胞外鉄のキレート化によってヒト脳微小血管内皮細胞 (hBMVEC) による鉄の取り込みを調節することを確認しました。2プラス。 PBT434 による hBMVEC の処理により、トランスフェリン受容体 (TfR) およびセルロプラスミン (Cp) の転写産物の量が増加します。 ウェスタンブロットおよびELISA分析でも、対応するタンパク質の増加が明らかになりました。 細胞内では、PBT434 により慈善的で不安定な Fe の検出レベルが増加します。2プラス; データはこの Fe を示しています2プラスフェリチンが放出されます。 さらに、PBT434 は、おそらく鉄輸出物質であるフェロポーチンの基質であるサイトゾルの第一鉄の増加により、鉄の流出を増強します。 PBT434 は、hBMVEC 血液脳関門を越えて迅速かつ双方向に平衡化します。 これらの結果は、PBT434-鉄複合体がhBMVEC取り込みの基質ではないことを示しており、したがって、PBT434が間質鉄をキレート化し、血液脳関門の内皮細胞による鉄の再取り込みを阻害するというモデルを裏付けるものである。さらに、神経血管単位の他の細胞によるその取り込みを阻害します。 全体として、これは治療用鉄キレート化のための新規かつ有望なメカニズムを示しています。
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序章
金属キレート療法 (MCT) は、遷移金属中毒や、金属の過剰蓄積を引き起こす必須金属イオンの代謝における遺伝性疾患の治療法として長い間使用されてきました [1-3]。 後者の 2 つの例は、ウィルソン病における銅の過剰蓄積 [4] と遺伝性ヘモクロマトーシスにおける鉄の過剰蓄積 [5] です。 銅と鉄はどちらも酸化ストレスの触媒であるため、細胞や生物がこれらの酸化還元活性遷移金属を「付き添う」能力を超える濃度では細胞毒性を示します[6、7]。 特に鉄の蓄積は、広くは特発性です。 実際、鉄分の増加は脳の老化の特徴です [8-10]。 病理学的には、この脳の鉄蓄積は、鉄代謝に関係のない遺伝子の突然変異の特徴である [11-15] だけでなく、他のさまざまな神経変性疾患にもみられ、その中には老化 [16]、アルツハイマー病 [ 17]、フリードライヒ運動失調症[18]、パーキンソン病[19]。 グループとして、そのような障害は脳鉄蓄積を伴う神経変性（NBIA）と考えることができますが、この頭字語は一般に、遺伝的関連が特定されているものに限定されています[11、13、14]。
鉄過剰の場合、目的は細胞の鉄の取り込みまたは排出の欠陥による過剰な鉄を身体から「浄化」することです。 ここでの目的は、この薬で生理学的鉄キレート剤に勝つことです。 良好な薬物動態を有し、第一鉄に対する親和性が高い化合物が標的薬剤です。 体内には必須金属が過剰に含まれているため、治療中に欠乏症が誘発される心配はほとんどありません。 鉄キレート療法による脳疾患の治療には、別の戦略が必要です。 これは全身的な鉄過剰の問題ではなく、下流に有害な後遺症を伴う病理領域における鉄の蓄積の問題です。 たとえば、パーキンソン病 (PD) における加齢に伴う鉄の蓄積は、酸化ストレスに関連した細胞損傷に寄与する可能性があります [20]。 過剰な不安定鉄は、黒質ニューロンにおけるαシヌクレインのミスフォールディングを促進します。 高親和性キレート剤の使用は、脳の鉄負荷のある程度の減少につながる可能性があるが、鉄欠乏症を誘発することは最も確実であり、少なくとも高齢者では、その年齢層に共通する全身性鉄欠乏症を考慮すると禁忌である[21]。 。 最適な親和性を備えたキレート剤は、鉄の蓄積だけでなく、過剰な不安定な鉄や根底にある疾患プロセスに起因する付随する酸化ストレスを軽減する可能性があります。
カンクイとシスタンケの効果
サラセミア患者における輸血誘発性鉄過剰症の治療での使用が承認されているキレート剤の 1 つは、デフェリプロン (DFP、商品名フェリプロックス) です [5、22]。 DFP はフリードライヒ運動失調 [23] やパーキンソン病 [24、25] の治療にも使用されています。 メタ分析では、DFP は、古典的な鉄キレート剤であるデフェロキサミンよりも心筋鉄含有量の大幅な減少と、サラセミア患者の心臓保護効果を高めることが示されています [5]。 一方、DFPは肝臓によって急速に代謝され[26]、最近の研究では、DFPが鉄依存性ヒストンリシンデメチラーゼの活性部位でFe2+をキレートすることが示されており、この活性はこれまで認識されていなかった細胞毒性と相関している[27]。 この発見は、鉄キレート療法の使用における重要な制限、すなわち貯蔵鉄または補欠鉄種を保持するタンパク質のいずれにおいても生理学的に必須の鉄をめぐる薬剤による競合を強調している。 それにもかかわらず、例えばDFPは、分析指標(T2-強調MRIによる脳鉄負荷の減少)と行動指標(認知および運動ニューロン機能)の両方によって示されるように、パーキンソン病の第2相試験治療において有効性を示した[ 24、25]。
しかしながら、Fe3 プラスに対する DFP の親和性には懸念が残ります。 安定した DFP 鉄種はトリス錯体、[Fe(DFP)3] 0 です [28]。 この複合体の中性は鉄を細胞外に動員するのに理想的ですが、安定性定数が約 1037 であるため、DFP は真の鉄スカベンジャーになります。 これに関連して、リジンデメチラーゼのような鉄酵素の阻害は予測可能です [27]。 この懸念は、DFP の膜透過性を有するが、Fe2+ と Fe3+ の両方に対する親和性が著しく弱い鉄キレート剤を開発する必要性を反映しています。 この後者の特徴は、補綴金属の薬物捕捉と、活性酸素種の生成を引き起こす第一鉄の自動酸化を触媒するキレート剤の熱力学的潜在力を制限します。 本質的に、強力な第二鉄キレート剤は、Fe2 プラスの酸化促進特性を触媒します [29]。 本研究では、中程度の第二鉄および第二鉄親和性を持つこのような鉄キレート剤が、血液脳関門（BBB）を形成する脳微小血管内皮細胞における鉄の流動をどのように調節するかを報告する。
カンクサの丸薬
この薬物、PBT434 [5,7-ジクロロ-2-((メチルアミノ)メチル)-8-ヒドロキシ-3-メチルキナゾリン-4 (3H)-オン、図1A] 、Fe に対して ~11 および ~15 の対数安定性定数を持つビス鉄錯体を形成します。2プラスと鉄3プラス、それぞれ[30]。 PBT434は、パーキンソン病の2匹のマウスモデルにおいて、全身性鉄貯蔵量の明らかな枯渇を引き起こすことなく、黒質緻密部（SNpc）ニューロンの喪失を防ぎ、黒質-シヌクレイン蓄積を低下させ、PD疾患モデルに関連する中脳の鉄含有量を減少させ、運動能力を回復させた[30]。 PBT434は、多系統萎縮症（MSA）[30、31]のマウスモデルにも有効である。多系統萎縮症（MSA）は、パーキンソン病と症状が似ているが、β-シヌクレインのミスフォールディングとその後の蓄積によって特徴付けられ、特徴であるグリア細胞質封入体の形成を引き起こす運動障害である。病気の病理学 [32]。 重要なことに、PBT434は、マウスPDモデルにおける酸化ストレスのマーカーを減少させた[30]。これは、1) PBT434が、そうでなければ酸化促進剤として機能するように準備されていた貯蔵鉄を標的としたこと、および2) PBT434が、この初期の酸化に基づく細胞毒性を増強しなかったことを示している。 PBT434 は第 1 相試験を順調に完了しました [33]。
ここで発表された研究は、PBT434 が脳の関門細胞、つまり下にあるグリアとともに血液脳関門を形成する微小血管内皮細胞における鉄輸送に及ぼす影響を調査するために設計されました。 これらの研究では、十分に検証された不死化内皮細胞株を単層培養形式とトランスウェル培養形式の両方で使用しました[34-37]。 これらの研究の主な目的は、これらの細胞からの鉄の取り込みと流出の動態、および PBT434 による鉄の調節を決定することでした。 トランスウェル BBB モデルは、内皮細胞バリアを通過する双方向の PBT434 経細胞フラックスを実証するためにも使用されました。 このモデルは、PBT434 が鉄の流出を刺激しながらキレート化によって鉄の取り込みを阻害することを分子的に実証しました。 細胞イメージング研究は、PBT434 が古典的な Fe によってプローブされたのと同じ不安定な鉄プールにアクセスすることを示しています2プラスキレート剤、2,2'-ビピリジンまたはビピリジル、および第一鉄の蛍光プローブ。 この結果は、BBB での全身鉄の取り込みの阻害とその後の間質腔での脳鉄の隔離を含む、PBT434 の作用機序の可能性を示唆しています。
結果
1. PBT434 は脳微小血管内皮細胞に対して細胞傷害作用を持ちません。
インビトロ細胞培養における PBT434 の作業濃度の適切な範囲を決定するために、MTT アッセイを利用して、PBT434 に応答する hBMVEC ミトコンドリア機能をモニタリングしました。 以前の報告 [30] に基づいて、最大 100 μM の範囲の PBT434 濃度で 24 時間治療されました。 どの濃度で試験しても、hBMVEC の生存率に有意な変化は観察されませんでした (図 2)。
2. PBT434 は急速に取り込まれ、hBMVEC バリアを越えて輸送されます。
PBT434 は、マウスとヒトで行われた研究で見られるように、BBB に容易に浸透できる経口で生物学的に利用可能な薬剤です [30、38、39]。 我々は、放射性トレーサーとして 14C 標識 PBT434 を使用して、単層で成長させた hBMVEC における PBT434 の蓄積をモニタリングしました。 データは、第 1 段階で 14C-PBT434 が取り込み媒体と細胞の間で急速に平衡化したことを示しました。 この最初の取り込みに続いて、3 時間にわたってさらにゆっくりと蓄積し、30.1 ± 9.8 pmol/mg/h の速度を示しました (図 3A)。 取り込みプロトコールでは、14C-PBT434 蓄積のための処理の前に、取り込みをクエンチし、細胞を 4℃で洗浄します (方法)。 別の実験では、30 分間のローディング期間後の hBMVEC からの 14C-PBT434 の流出を調べました。 流出プロトコルでは、細胞は 25℃で洗浄されます。 図 3B のデータは、25 ℃での洗浄で、細胞に蓄積した 14C-PBT434 の約 92 パーセントが失われたことを示しています（3A の 30 分で 550 pmol 14C-PBT434/mg タンパク質が 43 pmol 14C-PBT434/mg になることを参照） 3Bのt=0のタンパク質）。 残りの 14C-PBT434 はさらにゆっくりと消失しました (図 3B)。 データは、hBMVEC による PBT434 の蓄積と排出の 2 つの側面を示唆しています。 細胞膜を通過する流束は、取り込み中または排出中に急速に平衡と思われる状態に達します。 ただし、どちらのプロセスにも、さらに遅いプロセスが存在します。 これは、細胞内で、細胞 PBT434 の一部が、細胞外環境と平衡にある部分と速度論的定常状態の関係にある場所/状態にあることを示唆しています。 図３Ｂに示される速度論的分析は、細胞が２０μＭ試薬で処理された場合、このＰＢＴ４３４プールは細胞溶解物中の２７±４ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質によって表されると推定した。
PBT434 の細胞内流動を調べるために、トランスウェル膜の頂端側で成長したものを使用した、十分に検証された in vitro BBB モデルを採用しました [35、36、40、41]。 これらのトランスウェル培養物のバリア特性は、経内皮電気抵抗 (TEER) と FITC 標識デキストランに対する不透過性の定量化によって検証されました (S1 図)。 我々は、管腔（または先端、血液側）膜での 14C-PBT434 の取り込み（図 4A）と管腔外（または側底側、脳側）膜での取り込み（図 4C）を比較しました。 同じ実験において、対応する流出（経細胞流出）は、流出チャンバー内の 14C-PBT434 の出現によって定量化されました（図 4 パネル B および D）。 これらのプロセスの速度を表 1 に示します。図 4 (パネル B および D) に示す質量データは、このモデルの血液脳関門を通過する PBT434 の正味の流束が 2 つの方向で同じであることを示しています。 基底室には976±185pmolの14C-PBT434が蓄積され(図4B)、基底室には1033±210pmolが定量された(図4D)。 このほぼ同等のことは、2 つの障壁膜での PBT434 流出のほぼ同様の速度にも反映されました (表 1)。 しかし、このバリアモデルでは、基底室からの化合物の損失が約 50 パーセント増加したことで示されるように（図 4C）、このバリア モデルでは側底膜での PBT434 の取り込みが大幅に増加しました。これは、見かけの細胞取り込みの約 40 パーセント増加に相当します。 （表1）。 より強力な取り込みは、より多くの蓄積をもたらすと予測される。 3時間後の細胞の分析では、フラックスの方向に関係なく、細胞が約6μMのPBT434を保持していることが示されました。 値は、8.1±1.3μM(頂端から基底)および4.7±1.2μM(基端から頂端)であった。 上で述べたように、この分析は、総細胞タンパク質および 14C-PBT434 の溶解および定量前の細胞の洗浄に続きます。 さらに、頂端チャンバーの培地には RPMI と 10 パーセントの FBS および 10 パーセントの NuSerum が含まれていたのに対し、基底の「脳」チャンバーには RPMI のみが含まれていました (方法)。 合理的な推論は、基底膜でのより大きな「取り込み」は、血清中のタンパク質成分の存在によって頂端チャンバー内で制限されたPBT434の細胞表面吸着を反映しているということでした。 PBT434 の蓄積について細胞を洗浄すると、この吸着物質 (「取り込み」として記録された物質) が除去されました。 基底チャンバー内に血清を使用してこのフラックス実験を繰り返すと、確かに、血清がこの可能性の高い細胞表面 PBT434 吸着を抑制することが実証されました (S2 図)。
3. PBT434 は、ビピリジルとは異なり、不安定な鉄の細胞内利用可能性を制限しません
PBT434 は、デフェリプロンやビピリジルなどの古典的な鉄キレート剤と比較して鉄に対するより中程度の親和性を有するため、その違いが hBMVEC の細胞不安定鉄プール (LIP) に対する PBT434 の効果にどのように反映されるかを調べました。 これを行うために、浸透性のある Fe を利用しました。2プラス- 慈善的な細胞質鉄と反応する特定の蛍光色素 FerroOrange。 ビピリジルで処理すると、細胞内の蛍光が大幅に消失することがわかりました。これは、この高親和性第一鉄キレート剤による LIP のキレート化と一致し、したがって蛍光鉄指示薬の作用をブロックします (図 5A)。 対照的に、PBT434 は Fe に関して FerroOrange と競合しませんでした。2プラス、より中程度の親和性と一致する動作 [30]。 結果は、PBT434-met 不活性誘導体ではなく、PBT434 が、FerroOrange がアクセス可能な Fe の 34 ± 9 パーセントの増加を誘導したことを示しました。2プラスこれは、このキレート剤が毒性を伴うことなく細胞内の鉄を動員したことを示唆しています。 以下に示すデータは、この鉄がフェリチンに由来することを示唆しています。
PBT434 は、MPTP 治療マウスの枯渇したフェロポーチンタンパク質発現を、損傷のないマウスと同様のレベルまで回復することが以前に示されています [30]。 この結果は、PBT434 に応答した細胞内の第一鉄染色の増加とともに、細胞の鉄応答システムおよび下流の鉄関連タンパク質の機能に対する潜在的な影響を示唆しました。 これを評価するために、我々はまず、いくつかの鉄処理タンパク質の転写物の存在量に対する PBT434 の影響の定量的 PCR (qPCR) 分析を実施しました (図 6)。 鉄排出タンパク質であるフェロポーチン (Fpn) と 2 つの細胞質鉄シャペロンである PCBP1 および 2 の転写物は影響を受けませんでしたが、トランスフェリン受容体 (TfR) とフェロキシダーゼであるセルロプラスミン (Cp) の豊富な mRNA は影響を受けませんでした。変化。 TfR および Cp 転写物は、それぞれ 2.8 倍および 3.6- 倍増加しました。 トランスフェリン受容体 (TfR) の発現は、鉄応答性エレメント (IRE)/鉄制御タンパク質 (IRP) システムに関連しています [42-44]。 TfR mRNAの増加は、PBT434が、制御性IREBPをRNA結合タンパク質からサイトゾルアコニターゼに変換するFe,Sクラスターの集合に関してPCBP1-依存性の鉄の送達と競合していることを示唆している[45]。 したがって、PBT434は、この調節調節をRNA結合およびそれに対応するTfR mRNA分解の阻害にシフトさせる。 細胞鉄欠乏では、Cp発現は部分的にHIF-1によって調節されている[46]。 HIF-1 機能の増加は、鉄依存性反応におけるプロリルヒドロキシラーゼ活性によるヒドロキシル化のノックダウンの結果として起こります [47]。 IREBP の場合と同様、PBT434 は、HIF-1 の水酸化と分解の補因子として機能する鉄のプールを減少させるようです。 このモデルでは、この転写活性化因子の定常状態レベルの増加により、Cp 転写が増加します。
ELISA 分析とウェスタンブロッティングを組み合わせて、PBT434 または PBT434-met 処理 hBMVEC における鉄処理タンパク質の発現を調べました。 WB 解析の例を図 7A に示します。 データは、Cpと同様に、TfRモノマーおよびダイマーの存在量が24時間までに有意に増加したことを示した(図7Bおよび7C)。 両方の増加は、それぞれの転写産物の PBT434- 依存性増加と一致しました (図 6)。対照的に、鉄流出タンパク質 Fpn の発現は PBT434 処理に非感受性でした (図 7D)。
ウェスタンブロットデータによって示された倍率変化を定量化するための追加の方法としてELISAを使用しました。 したがって、ｈＢＭＶＥＣをＰＢＴ４３４で２４時間処理し、細胞溶解物をＥＬＩＳＡによってＴｆＲについてアッセイした（図８Ａ）。 ＥＬＩＳＡによって定量化されたＰＢＴ４３４処理に応答したＴｆＲの増加倍数は、ウエスタンブロットの分析によって得られたものと同等であった（図７Ｂ）。 ELISA は、HepG2 細胞を陽性対照として使用し、分泌 Cp タンパク質および GPI 結合 Cp タンパク質の存在量を評価するためにも使用されました。 増殖培地に分泌される Cp に関して、このアプローチは、HepG2 および hBMVEC 馴化培地の両方における sCp の存在量がこのアッセイの感度下限以下であるという点で制限されました (S3 図)。 ただし、GPI-Cp の存在量を評価することは可能でした。 この方法では、GPI アンカーを切断するホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼ C (PI-PLC) で細胞を処理しました。 このように調整された培地を濃縮し、Cp-ELISAで分析した。 このアプローチは、PBT434がHepG2細胞内のGPI-Cpの量を増加させることを実証したが、やはりPI-PLCによって放出されたCpを検出できなかった(図8B)。 ELISA はフェリチンを定量するための直接的な方法も提供しました。 そうするために、hBMVEC に 1 uM クエン酸 Fe を 24 時間負荷し、続いて PBT434 の非存在下または存在下でさらに 1 時間処理しました。 得られた細胞溶解物をフェリチンのELISA分析に供した(図8C)。 TfR の増加とは対照的に、PBT434 による治療ではフェリチン (Ft) タンパク質が約 18% ノックダウンされました。 実際、この Ft タンパク質の損失は、試薬でわずか 1 時間処理しただけで明らかでした。 この結果の一時的な性質は、PBT434 による 30 分間の処理後の上記の慈善 Fe2 プラスの増加と相関している可能性があります。 後述するように、他の細胞透過性 Fe2 とキレート剤による処理後にフェリチンのノックダウンが実証されています [48]。
4. 55鉄2プラスPBT434との複合体形成により取り込みが阻害される
Fe2+ の 24 時間にわたるゆっくりとした二相性の取り込みと平衡 [49] と比較して、hBMVEC における PBT434 の急速な平衡化が 30 分以内であることを考えると、PBT434 と Fe2+ は同じ取り込み機構を共有していないという仮説を立てました。 これをテストするために、PBT434 または PBT434-met の非存在下または存在下で単層を放射性標識 55Fe2plus とインキュベートし、3 時間にわたる 55Fe2plus の取り込みをモニタリングしました (図 9A)。 ＰＢＴ４３４は、５５Ｆｅ２プラスの取り込み速度を有意に減少させるとともに、細胞溶解物中の５５Ｆｅ２プラスの全体的な蓄積を減少させた（図９Ｃ）。 この効果は PBT では見られませんでした434-。 PBT434 と 55Fe の取り込み速度の比較は、PBT434 と Fe2+ が別々の輸送経路によって取り込まれることを示しています。 さらに、PBT434-の存在下ではなく PBT434 の存在下で 55Fe 取り込みが阻害されることは、細胞外 PBT434- 鉄錯体が hBMVEC の第一鉄トランスポーター、つまり ZIP8 のリガンドではないことを示唆しています。 ZIP14。
カンクサのサプリメント
鉄蓄積における PBT434 の役割をさらに調べるために、事前曝露が 55Fe2 と取り込みに及ぼす影響をテストしました。 ＰＢＴ４３４で前処理し、洗浄後に５５Ｆｅ２プラスに曝露した細胞は、３時間後に５５Ｆｅ２プラスの取り込みおよび蓄積速度の増加を示した（図９、パネルＢおよびＤ）。 この蓄積の増加は少なくとも 24 時間維持されました。 これらのデータは、細胞を PBT434 に事前に曝露すると鉄の取り込みが一時的に増強されることを示唆しています。 予想外なことに、治療前の PBT434- も取り込みと蓄積の両方の増加を示しましたが (図 9B)、この効果は PBT434 で示された効果ほど顕著でも持続的でもありませんでした。
我々は、 59Fe-トランスフェリンからの鉄の取り込みが、細胞膜でのフェリ還元と鉄透過によってサポートされていることを示しました[50、51]。 この外傷性脳損傷鉄取り込みモデルを裏付ける実験結果の 1 つは、細胞質外フェリレダクターゼ活性の阻害によるこの取り込みのノックダウンでした。 別の結果は、強力な第一鉄キレート剤であるフェロジンによる外傷性脳損傷の鉄取り込みの60パーセント阻害でした[50]。 この後者の戦略は、PBT{10}met ではなく PBT434 も外傷性脳損傷の鉄取り込みを阻害することを実証するために利用されました (図 10)。
5. PBT434 は Fpn 依存性の 55Fe2 と流出を刺激します。
PBT434 は、Fe2 と神経細胞からの流出を見かけ上刺激するデフェリプロンの能力の約 20 パーセントを持っています [30]。 我々は、コントロール細胞またはミニヘプシジン PR73 で処理した細胞における PBT434 の非存在下または存在下での hBMVEC からの 55Fe2plus の流出を評価しました。 ヘプシジンは、全身と脳間質の両方で見られるペプチドホルモンで、Fpn に結合し、トランスポーターを標的にして分解します。 Fpn の鉄輸出機能に対するヘプシジンの影響は広く研究されています [52-54]。 我々は以前に、hBMVEC からの Fe2+ の流出が Fpn 依存性であることを示しました [35、49]。 PR73 は、GFP レポーター アッセイにおける Fpn 分解の EC50 が約 4 nM です [55]。 単層の hBMVEC に、PR73 の非存在下または存在下で 55 Fe2 plus を 24 時間負荷しました。 次いで、ＰＲ７３の継続的な不在または存在と、ＰＢＴ４３４の不在および存在との組み合わせにおいて、５５Ｆｅ流出を５時間にわたって定量した（図１１）。 PR73 は対照培養物と PBT{31}} 処理培養物の両方からの 55Fe 流出をノックダウンしましたが、PBT434 はミニヘプシジンによる阻害を部分的に抑制しました。 PBT434 が存在しない場合、PR73- 処理培養物からの鉄流出は約 75% ノックダウンされましたが、PBT434- 処理培養物でのノックダウンはわずか約 50% でした (図 11 および表 2)。 これらの結果から 2 つの推論が導き出されます。 第一に、PR73 による Fpn のノックダウンは、PBT434 の存在下および非存在下で 55Fe の流出を下方制御します。 第二に、どちらの条件下でも、PBT434 は、小さいながらも鉄の流出を大幅に刺激します。
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ダニエル・K・ベイリーID、ホイットニー・クラーク、ダニエル・J・コスマン
ニューヨーク州立大学バッファロー校、ジェイコブズ医科生物医科学部生化学教室、バッファロー、ニューヨーク州、アメリカ合衆国
