サルメントサミド、海洋由来のストレプトミセス属由来の老化防止化合物 APマリン042

キーワード:カンクン; ストレプトマイセスsp. APマリン042;老化防止; MMP-1; UVB; TNF-

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1. はじめに

皮膚の老化内的要因と外的要因から生じる 2 つの主なプロセスによって引き起こされます。外部老化主に大気汚染などの環境要因への曝露によって引き起こされる [1] および紫外線 (UV) 放射線 [2]。 紫外線は、UVA (315 ～ 400 nm)、UVB (280 ～ 315 nm)、UVC (200 ～ 280 nm) のうち、UVB 光線は表皮を透過し、皮膚に影響を与えることが知られています。光老化 [3]。 UVB による皮膚の光老化は DNA 損傷を引き起こす [4]と活性酸素種(ROS) 世代 [5] 細胞外マトリックスを破壊します [6]。 本質的な老化は自然現象によって引き起こされます。遺伝的要因、ホルモン、代謝プロセスなどの生理学的変化の影響 [7]. さらに、腫瘍壊死因子α（TNF）などの炎症性サイトカイン )、インターロイキン 1 アルファ/ベータ(イル-1 / )、インターロイキン 6 (IL-6) は加齢とともに慢性的に増加します。 特に腫瘍壊死要素- (TNF ) は、以下を介して細胞外マトリックス (ECM) 成分の分解を促進することが知られています。老化した皮膚におけるマトリックスメタロプロテイナーゼ (MMP) の発現と活性のアップレギュレーション [8]。 MMP-1 は主に真皮の線維芽細胞によって放出され、分泌された MMP-1 が分解の原因となります皮膚の構造と機能をサポートする真皮コラーゲン。 したがって、MMP-1の変調真皮線維芽細胞における発現は、アンチエイジング開発の有望な標的となる可能性がある化粧品成分。

以前の研究では、UVB 放射線が ROS (活性酸素種の生成を誘導し、細胞内シグナル伝達経路と転写因子 (例: AP-1、NF-kB) の活性化につながることが報告されています [9. これらの転写因子はマイトジェンによって調節されています) -活性化プロテインキナーゼMAPK)、MMP-1および炎症誘発性サイトカインを誘導します。 UVB/ROS 刺激に関与する 3 つの異なる MAPKamilies が存在します: 細胞外シグナル制御キナーゼ (ERK)、c-Jun N 末端

私たちの研究では、Streptomyces sp. キナーゼ (NK)、および p38 が同定されました。 MMP-1 発現に対して強力な阻害効果を示した APmarine042 抽出物。 その後、MMP-1 阻害化合物がこの Streptomyces sp. で同定されました。 APmarine042 抽出物とその化学構造は、NMR 分析支援 (1)、ヘキサジエンアミド部分 101 を持つ化合物によって同定されました。次に、この化合物が UVB 照射および TNFa 誘発ヒト皮膚における MMP-1 発現を阻害するかどうかをさらに調査します。線維芽細胞とその根底にあるシグナル伝達経路の調節におけるその役割。 さらに、次のことを調べました。カンクサの抗酸化作用(1) 2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル(DPPHI)経由ラジカル消去アッセイ.

2. 結果と考察

2.1. cistanche (1) 隔離と識別

cistanche (1) は、HPLC-UV と生物活性に基づく分離の組み合わせによって分離されました。 本研究で同定された化合物（以下、「化合物 1」という）の NMR データ（補足資料）と、これまでに報告されている化合物の NMR データ（補足資料）との比較に基づいて、化合物 1 はシスタンケであると同定されました。化合物 1 の旋光度値は、これは、化合物 1 の補助をさらに裏付ける以前のレポートとも一致しています (図 1)。

2.2. ヒト皮膚線維芽細胞に対するカンクサの細胞毒性効果 (1)

カンクサの細胞毒性効果を調査するために、正常なヒト皮膚線維芽細胞（NHDの場合、ヒト包皮線維芽細胞（Hs68））をさまざまな濃度（6、12、25、50、100μg/mL）のカンクンで24時間処理し、その後細胞が細胞生存率を定量化するために、計数キット-8 (CCK-8) アッセイを実施しました。CCK-8 溶液中の水溶性テトラゾリウム塩 (WST-8) は、細胞内のデヒドロゲナーゼ活性によって減少しました。図 2 に示すように、カンクサは、{{15} から} μg/ml

図 2. 線維芽細胞におけるキスタンケの細胞生存率試験。 (ab) の細胞生存率カンクサ処理済み正常ヒト皮膚線維芽細胞 (NHDF) (a) およびヒト包皮線維芽細胞 (Hs68) (b) 24 時間の細胞を CCK (細胞計数キット) アッセイによって測定しました。 * p < 0.05、** p < 0.01vs. 未処理グループ）。

2.3. cistanche (1) UVB 照射した NHDF 細胞における MMP-1 の発現と分泌を阻害する

次に、UVB 放射線 (25 mJ/cm2) の非存在下および存在下の NHDF をシスタンシュ (2.5 ug/mL) で短期間処理し、相対的な MMP-1 mRNA 発現レベルを定量的リアルタイムで定量しました。 PCR分析。 cistanche は、UVB の非存在下 (図 3a) と存在下 (図 3b) で、MMP-1 mRNA レベルをそれぞれ最大 16 パーセントと 17 パーセント下方制御することがわかりました。主要な外因性皮膚老化リスク因子である UVB 放射線は、表皮を貫通して真皮上部に到達すると、活性酸素種（ROS）MMP産生が生成され、コラーゲン合成が下方制御されます。したがって、私たちの研究では、UVB照射下でキスタンケがMMP-1分泌を阻害するかどうかを調査しました。 NHDF 細胞。細胞培養培地中の MMP-1 の分泌レベルは ELISA によって測定され、MMP-1 分泌の相対量は、ビシンコニニック法によって測定された全細胞溶解物中の総タンパク質に対して標準化されました。酸（BCA）タンパク質定量アッセイUVB照射（25 mJ/cm2）は、非UVB照射群（図3c）およびカンクンと比較してMMP-1分泌（8.3-倍）を顕著に増加させたは、UVB照射したNHDF細胞におけるMMP-1分泌を用量依存的に阻害した。

図 3. UVB 照射した NHDF におけるメタロプロテイナーゼ-1 (MMP-1) 発現に対するシスタンシュの影響。 (a、b) UVB (25 mJ/cm2) を照射するか、シスタンシュ (2.5 ug/mL) で 16 時間処理した NHDF 細胞における MMP-1 の相対 mRNA レベル。 RPLPO遺伝子を内部対照として使用した。 * p < {{10}}.05.*** p < 0.001 (C) UVB 照射後 (25 mJ/cm2)無血清培地中のカンザスを 48 時間処理し、その後細胞培養培地への MMP-1 の相対分泌レベルを ELISA### によって分析しました。p < 0.001 (対非 UVB 対照群)。 ** p < 0.01; *** p < 0.001 (UVB 照射対照グループ)。

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