マウスの免疫への影響に関する研究
Jun 09, 2022
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30人の男性のうち2人DBA/2NCrl(D2N)マウスのバックグラウンドデータ解析において対照株として用いたマウスDBA/2N-MDXマウスは、感染の示唆される異常な所見を呈した。症例1:生後4週齢の雄D2Nマウスが左腎臓に白いプラーク病変(臨床症状なし)を示し、腎臓の病理学的検査を行った。左腎臓の尿細管および間質に炎症性細胞浸潤、主に好中球が観察され、左腎セグメントから黄色ブドウ球菌(S.aureus)が検出された。したがって、左腎臓のこの病変は化膿性と診断された尿細管間質黄色ブドウ球菌感染によって引き起こされる腎炎。症例2:体重減少を伴う左トルチコリスが、9週齢の雄D2Nマウスで検出された。組織学的評価により、耳管の咽頭孔周囲の滲出性炎症、およびグラム陽性マイクロコロニーとして膿瘍形成およびクラスターを有する中耳および左内耳の両方の化膿性炎症が明らかになった。黄色ブドウ球菌は、両方の外耳道の綿棒培養物から同定された。その結果、このトルチコリスの症例は、黄色ブドウ球菌 - 化膿性中耳炎メディアおよびインターネットによって引き起こされた。黄色ブドウ球菌は日和見病原体としてよく知られており、免疫能力のある実験動物に化膿性疾患を頻繁に引き起こす可能性がある。しかし、我々の知る限りでは、D2Nマウスにおいてトルチコリスを呈した黄色ブドウ球菌感染のこの症例は報告されていない。
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)分離株は、2018年に防衛医科大学実験動物科学センターの実験用マウスに出現し、ティッカー分離株は、その後他のマウス室においてもマウスから回収した。これらのMRSA分離株では、遺伝子型決定のために、マルチローカス配列タイピング(MLST)、黄色ブドウ球菌プロテインA(スパ)タイピング、SCCmecタイピング、コアグラーゼタイピングなどの分子タイピングを行った。すべての分離株は同一の遺伝子型(ST1、spa t1784、SCCmec型IV、およびコアグラーゼVII型)を明らかにし、分離株が同一のクローンであったことを示唆している。2018年にMRSAが出現する前は、このような遺伝子型の分離株はこの施設で単離されておらず、MRSAクローンはヒトまたは実験動物を介して施設に持ち込まれたと考えられていました。STl1は、米国で小児から回収された最初のコミュニティ取得MRSAであるが、ST1は現在、世界中のヒトおよび動物から回収されている。日本では、ST1株とSCCmecIV型株がヒトやネコから単離されており、ST1がヒトと動物の間で伝播していることが示唆されている。これらの遺伝子型だけでなく、spa tl784も有するMRSA株がヒトから回収された。現在、病院で取得したMRSA、コミュニティが取得したMRSA、家畜関連のMRSAの区別はより曖昧です。これらの結果は、マウスがMRSAのリザーバーとして作用する可能性があることを示唆している。
近年の癌免疫療法では、PD-1などの分子の活性が阻害され、癌に対する免疫細胞の活性が増大する。高い治療効果にもかかわらず、癌免疫療法において自己免疫疾患が発症するケースがある。ここで、本発明者らは、これを用いて培養細胞およびマウスにおいてPD-1を時間特異的に分解できる系を確立した。SMASh degron system.ジャーカット細胞およびCD3+脾細胞におけるPD-1-SMASh融合タンパク質は、NS3/4Aプロテアーゼ阻害剤であるアスナプレビル(ASV)またはグラゾプレビル(GRV)の投与後1日で減少した。PD-1-cherry-SMAShノッキン(KI)マウスにASVを接種したMC-38腺癌細胞の増殖は、野生型(WT)および未処理のKIマウスと比較して抑制された。また、致死的な放射線を照射した後にKI骨髄細胞を移植したWTマウスでは、GRVを有するMC-38細胞を拒絶することができた。KIマウスは健康に見え、自己免疫疾患の徴候を示さなかった。我々は、生体におけるdegron系の利用は、様々な生物学的研究だけでなく、疾患の治療も進歩させることが期待されることを示唆する。
プロゲステロン(P4)は胎盤から分泌され、妊娠を維持し、免疫調節因子として機能する。グルココルチコイドは別のものです免疫調節炎症を調節するステロイド。本研究では、ヒト末梢血単核球(PBMC)をNOGマウスに移植して移植片対宿主病(GVHD)を誘導し、P4とコルチゾール(COR)効果の比較に用いた。PBMCを様々な濃度のP4またはCORの存在下で刺激し、細胞をフローサイトメトリー(FCM)によって分析した。のアリコートティッカーNOGマウスに移植し、週に2回P4またはCORをマウスに注射した。28日後、FCMおよび免疫組織化学的分析を行った。その結果、高濃度のP4はインビトロでT細胞活性化を阻害したが、その阻害は除去後も継続しなかった。COR処理ではP4と比較してT細胞活性化の抑制が少なく、T細胞枯渇がより顕著であった。P4注射マウスは、対照マウスと比較して、より多くの脾細胞、特にCD8 T細胞を運んだ。しかし、CD25の発現が低いほど、肺および肝臓へのヒトT細胞の浸潤が少なく、かつ少ないティッカー症状は観察されなかった。一方、COR注入マウスの脾細胞、特にT細胞の数は有意に少なく、活性化/疲弊した細胞が豊富であった。これらの結果は、P4がインビトロでCORと比較してT細胞を維持することを好むことを示唆している。
ヘリコバクター肝炎およびヘリコバクタービルは、マウスにおいて肝炎および大腸炎を引き起こす病原体として知られている。現在でも日本の実験動物施設では、毎年複数の陽性例が確認されています。盲腸内容物または新鮮な糞便を、H. hepaticusおよびH. bilisのPCR検査のためのサンプルとして使用するのが最善である。
近年、DNAおよびRNA輸送および貯蔵試薬が様々な製造業者によって製造されている。これらの試薬は、PCR検査に用いる試料を輸送する際の問題が解消されることが予想されます。そこで、本研究では、核酸保存試薬を用いて保存した盲腸の内容物を用いてヘリコバクターのPCR検査を行うことにより、核酸保存試薬の有用性を検討した。その結果、保存液を用いて7日間保存した試料は、新鮮な試料と同レベルでヘリコバクターを検出することができた。以上のことから、ヘリコバクターのPCR検査では、輸送に数日を要しても、核酸保存試薬に浸漬した試料を冷蔵飛行により輸送することにより、高精度に検査を行うことができることが示唆された。
我々は以前、栄養飢餓に応答する遺伝子を改変することにより、in vitro固体表面への付着性を有意に高めた大腸菌変異株を開発した。これらの接着増強大腸菌株(AEE)と生体内腸内環境との相互作用を評価するために、マウスを接種することにより腸管へのコロニー形成能を評価した。
評価実験の前に、in vivo可視化のためにルシフェラーゼを発現するプラスミドでAEEsを形質転換した。そのまま絶食マウスに経口接種し、数日おきに糞便を採取した。ライブの数AEE採取した糞便からCFUを測定することにより推定した。
その結果、対照株と比較して、AEEsは1週間以上糞便中により豊富であり、これは腸管におけるコロニー形成の増強を示す。IVISを用いた非侵襲的イメージングによりルシフェラーゼ発光の局在を観察することにより、AEEsが盲腸および結腸に定着する傾向があることも分かった。
[目的]現在、[パスツレラ]肺炎球菌げっ歯類菌の新属として再分類されている。これらのうち、R.pneumotropicusおよびR. Heillyは、げっ歯類における微生物学的モニタリングの主な標的である。我々は、げっ歯類から種として同定できなかった多数のげっ歯類を単離した。本研究では、細菌の毒性に着目して、げっ歯類分離株の特徴を探る。[方法]ラット気管から単離したげっ歯類細菌属を研究に使用した。次世代シークエンサーでドラフトゲノムシーケンシングを行い、その後、病原性関連遺伝子を予測しました。動物実験では、Rag2マウスをげっ歯類感染に使用|結果|ドラフトゲノムシーケンシングにより、げっ歯類細菌叢属において固有のRTX毒素コード遺伝子が同定されていた。RTX毒素のタンパク質配列は、パスツレラ科よりも腸内細菌科によって産生されたものとより相同であった。動物実験では、感染したRag2マウスのほぼ全てが致死的な肺炎または敗血症を確認した。単離物はR. pneumotropicusおよびR. heyliiとして同定できなかったが、この近縁種はRTX毒素などの病原性因子の存在下で免疫不全動物にとって致命的であり得る。
NBRP基礎技術開発プログラム(2018-2019)では、マウス日和見病原菌のゲノムを配列決定し、実施しました。RNAseqマウスにおける原生動物の、これらの生物のためのPCRアッセイを開発するため。これらの結果を用いて、京都大学(NBRP Rat)と共同でラットのげっ歯類菌と原生動物を解析しました。ここでは、ラットサンプルにおける試験結果を報告する。[方法]約1.5 kbpの16S rRNA遺伝子配列を、げっ歯類細菌属の6つのラット分離株についてPCRによって読み取り、1つの分離株(#25)のドラフトゲノム配列をIllumina HiSeq 2500を用いて決定した。ラット盲腸内容物のPCRは、マウス原虫のRNAseq結果に基づいて行った。[結果]全ての分離株の16S rRNA遺伝子配列は同一であり、OTU分析によりげっ歯類細菌ラッティと同定された。分離株#25の再配列決定はまた、この株がマウス原生動物に対するR. Ratti.PCRであり、ラットアメーバについて肯定的な結果を与えたことを明らかにした。トリコモナスについて肯定的な結果は得られなかったティッカーラット標本に。[ディスカッション]この報告で調べたげっ歯類細菌属のラット分離株は、すべてR. Rattiであった。ラットでげっ歯類検査を行う際には、R. Latiの存在に注意することが重要です。いくつかのラット糞便サンプルは、マウスアメーバPCRに対して陽性を示した。これは、ラットの原生動物を検出するためのPCRの開発における第一歩である。
げっ歯類生物「パスツレラ・ニューモトロピカ」は、マウスおよびラットの呼吸器疾患を引き起こす日和見病原性細菌である。それらは以前はパスツレラ属に分類され、いくつかの株がバイオタイプとして暫定的に提案されました。2017年に、彼らは集合的にげっ歯類菌属に再編成されました。MaMおよびMaR株は、それぞれ1980年代頃にマウスおよびラットから単離された。本研究では、両株のゲノム配列を決定し、げっ歯類菌属のゲノム配列と比較し、材料と方法IThe MaMおよびMaR株を国立感染症研究所(NIAID)から入手した。
(斉藤学 --> 阿美康 -->池文雄)両方の株を液体培養により増殖させてゲノムDNAを抽出し、Illumina Hiseq 2500およびPacBio Sequelを用いてゲノム配列を決定した。[結果]16S rRNA遺伝子配列に基づいて、MaM株をR.pneumotropicusとして、MaR株をR. Rattiとして同定した。さらに、MaR株の完全なゲノム配列(2,213,961 bp)が決定された(rRNAオペロンの数は6であり、遺伝子の数は2,063と推定された)。[Discussionl MaM株とMaR株は、日本では「パスツレラ・ニューモトロピカ」の同定基準として用いられてきた。この解析から、我々は両方の株の種を以下のように決定した:MaM株はR.pneumotropicusであり、MaR株はR.rattiである。驚くべきことに、これらの結果は、R. Rattiが日本のラットから単離され得ることを示している。
クロストリジウム・ピリ(CP)は、ラットやマウスを含む様々な実験動物で感染しやすく、免疫不全動物を除いて無症候性感染を示します。動物施設を維持するための主要な鑑別診断と考えられており、動物実験からの実験データに影響を与えることはよく知られています。血清診断(ELISA、IFA)およびPCRは、CPにとって人工栄養培地中での単離が困難であるため、CPの診断に一般的に使用される。しかし、血清診断を用いたCPとの交差反応性を示す非特異的抗体の存在が報告されており、当施設においても同様の症例でしばしば認識されている。また、PCR法は抗体価の上昇後にCPが糞便中で検出できないため、定期的なモニタリングを伴う信頼性の高い診断方法としては限界があります。最近、私たちは毎月動物の糞便を保存するという別のアプローチを検討しました。抗体の影響を及ぼさないCPに対するPCR検査を、保存状態を継続して保存した糞便を用いたより信頼性の高い診断法として採用しました。このレポートでは、最近の例を示します。(非特異的抗体)弊社で展開している流れの検査に繋がる。
