グルココルチコイド誘発ラットモデルにおけるCistancheDeserticolaとそのライスワイン蒸し製品の神経内分泌免疫機能に関する研究
Mar 03, 2022
連絡先：Audrey Hu Whatsapp / hp：0086 13880143964メール：audrey.hu@wecistanche.com
Bonan Liu、Ji Shi、Zhe Li、Chao Zhang、Pengpeng Liu、Wei Yao、Tianzhu Jia
1遼寧伝統中国医学大学薬学部、大連116600、中国
2大連医科大学第二病院、大連116600、中国
概要
砂漠の住居Cistancheハーブ「ShenNongHerbalClassic」に最初に記録され、この出版物で最高級の漢方薬としてリストされています。 / e中国薬局方は、 ニクジュヨウ（CD）とライスワイン蒸しニクジュヨウ（WCD）は、煎じ薬の主な種類としてクリニックで使用できます。 ライスワインで蒸した後、老化防止と強壮効果の腎臓陽効果が強化されます。 この研究では、Cistanche DeserticolaとWCDの化学的含有量、およびモデルラットにおける腎臓陽欠乏を活性化する薬理学的メカニズムを検出しました。 標的。 / eこの研究の目的は、CistancheDeseticolaとWCDが神経内分泌に及ぼす影響を調べることでした-免疫機能糖質コルチコイド過剰摂取モデルラットにおける腎臓陽欠乏の評価。 材料および方法。 Sprague Dawley（SD）ラットを選択した。 / eラットは、糖質コルチコイドを過剰摂取したモデルラットのために、コルチコステロン水懸濁液を皮下注射しました。 / e陽性対照ラットは、Jinkuishenqiピルと高用量、中用量、および低用量で強制飼養されました。ニクジュヨウ/ WCD懸濁液（それぞれ1.646g /（kg日）、5.48g /（kg日）、2.74g /（kg日）、1.37g /（kg日））; ブランクコントロール（BC）グループとモデルコントロール（MC）グループには、1 mL / 100 gの用量で40日間連続して、薬物グループと同じ量の蒸留水を与えました。 最後の投与後、腹部大動脈から血液を採取し、T、CRH、ACTH、CORT、コルチゾール、IL -10、IL -6、IL -2、TNFの血清レベルを測定しました。 -およびIFN-cが測定されました。 胸腺と脾臓の臓器指数を計算した。 副腎におけるBax、Bcl -2、カスパーゼ-3、Fas、およびFasLの/ e発現は、免疫組織化学によって測定されました。 / e胸腺および副腎の病理学的変化は、HE染色（×200）によって観察された。 末梢血中のTリンパ球サブセットは、仲間のサイトメトリーによって検出され、視床下部および下垂体組織におけるCaMmRNAの発現もRT-PCRによって測定されました。 結果。 MCグループと比較して、Cistanche DeserticolaおよびWCDグループは、活動、胸腺および脾臓の臓器指数、T、CRH、ACTH、CORT、コルチゾール、IL -2、およびILの血清レベルの増加を示しました。 -10、CD4と/ CD8の比率、および下垂体組織におけるBcl -2、カスパーゼ-3、Fas、FasL、およびCaMの発現。 / eニクジュヨウまた、WCDグループは、血清中のIL -6、TNF-、およびIFN-cレベルの低下と、視床下部におけるCaMmRNAの発現を示しました。 結論。 Cistanche DeseticolaとWCDの各用量は、糖質コルチコイド過剰投与モデルラットの調節不全の性ホルモンと免疫因子を打ち消し、視床下部神経細胞の有効性を高めて回復させ、改善する可能性があります免疫機能.
序章
ニクジュヨウ「砂漠人参」と呼ばれる漢方薬は、腎臓を活性化し、陽を強めるための陽トニックハーブとして何世紀にもわたって使用されてきました[1]。 中国では8種と1種類のCistanchesHerbaが記録されており、中国の薬局方ではCistanche deserticola YCMaとCistanchetubulosa（Schenk）Wightのみが記録されています[2]。 薬理学的研究は、Cistanches Herbaが神経保護[3]、免疫調節[4]、心臓保護[5]、抗疲労[6]、抗炎症[7]、肝保護[8]、抗酸化[9]、抗菌[10]、下剤を示したことを示しました[11]、および抗腫瘍効果[12]。 この属の報告された生物活性の広いスペクトルは、複雑で多様な植物化学組成に起因しています。 ニクジュヨウには、フェニルエタノイド配糖体、イリドイド、多糖類[13]などが含まれています。フェニルエタノイド配糖体の含有量は、元の医薬品の中で最も高くなっています[14]。伝統的な漢方薬理論に従って治療、調剤、および準備をするため。 これらの加工品は煎じ薬と呼ばれ、診療所で使用されています。 / e処理の目的は、生薬の有効性を高めたり、毒性を減らしたりすることです。 2015年の中国薬局方は、Cistancheの厚いスライス（CD）とライスワインで蒸したCistanche（WCD）をクリニックで煎じ薬として使用できると記録しました。 私たちの研究グループは、Cistancheをライスワインで蒸した後、下剤効果が軽減され、老化防止と腎臓陽の活性化効果が強化されたことを示しました[15]。
視床下部-下垂体-副腎-胸腺（HPAT）軸の機能は、腎臓-陽欠乏症候群で乱れています[16]。 腎臓陽欠乏症の患者はまた、広範な免疫機能障害を持っています。 HPA軸機能障害は、免疫不全と密接に関連しています。 神経内分泌免疫ネットワーク（NEI）理論は、免疫系と神経内分泌系が多くのリガンドと受容体を共有していることを示しており[17]、視床下部は神経内分泌と免疫系を結びつけるための要と考えられています。
この研究では、外因性コルチコステロイド注射を行ったモデルラットの腎臓陽欠乏症を再現し、内分泌の観点から、ニクジュヨウのさまざまな加工製品に反応した腎臓陽欠乏症のメカニズムを調査しました。免疫機能.
材料および方法
材料と試薬。
ニクジュヨウ2019.5にAlashanNeimengguから収集され、Yanjun Zhai教授（遼寧伝統中国医学大学薬学部、中国）によってCistanchedeserticolaYCMaの乾燥した肉質の茎として識別されました。 バウチャーの標本は遼寧加工工学技術センターに保存されました。
ジュゴールの標準化合物は、Chengdu Pure Chem-Standard Co.、Ltd.（Chengdu、China）から購入しました。 シスタノシドF、エキナコシド、シスタノシドA、およびイソアクテオシドは、Must Company（Sichuan China）から購入しました。 アクテオシドは大連MeilunBioから購入しました。 Co.、Ltd.（大連、中国）。 MSグレードのアセトニトリルとメタノールはMerckKGaA（ダルムシュタット、ドイツ）から購入しました。 HPLCグレードのギ酸はMerckKGaA（ダルムシュタット、ドイツ）から購入しました。 ライスワインは、浙江ブランドタワー紹興ワイン株式会社（浙江、中国）から購入しました。
コルチコステロン（CAS：50-22-6、純度> 98％、TCI Shanghai Development Ltd. Co。）、chinkuei shin chewan pills（Beijing Tongrentang Technology Development Co.、Ltd。）、ラットACTH、CRH、T、IL {{ 2}}、IFN-c、TNF-、IL -2、およびIL-10ELISA検出キットはNanjingJiancheng Co.、Ltdから購入しました。/eラットコルチコステロンELISAキットはBOSKCoから提供されました。 。、ラットCD4抗体、CD8a抗体（番号561833および559976）、RBCライセート（Solarbio、R1010）、PBS緩衝液（Solarbio、P 1020-500）、TRIzol（MAN0001271）、CaM、および-アクチン上流およびダウンストリームプライマーはGuangzhouInvitrogenCo.から提供されました。ReverseTranscriptionKit（no。RR037A）およびcDNA Synthesis Kit（no。10000068167）はBole Life Medicine Products（Shanghai）Co.、Ltd.から提供されました。およびウレタン溶液はすべて分析的に純粋であり、Sinopharm Chemical Reagent Co.、Ltdによって生成されました。超純水はMilli-Qシステム（18.2MΩ、Millipore、MA、USA）によって生成されました。
実験楽器
酵素マーカー（Thermo、モデル3530911931）、自動プレートウォッシャー（モデルHBS - 4009）、デジタルディスプレイプッシュプル力計（モデルVICTOR - 50 N）、高速凍結遠心分離機（モデルSigma 3k15） ）、超顕微分光光度計（モデルB -50 Q）、遺伝子増幅器（モデルL96G）、リアルタイム蛍光定量PCR（モデルStepOne）、フローサイトメーター（モデルAC66051710132）、パラフィンミクロトーム（モデルライカ）、顕微鏡（オリンパス、モデルBS -53）、および純水装置（モデルF7JA36507）を使用しました。
UPLC-Q-TOF-MSおよび薬理学的実験用のサンプルの準備。
WCDは、私たちの研究室で同じバッチのCistanchedeserticolaから処理されました。 WCDの調製では、乾燥したCD片（厚さ5 mm）（100 g）にライスワイン（30 mL）を注入し、高圧（1.25 kPa）で4時間蒸した後、55度で乾燥させました。
CDとWCDの粗い粉末を10倍の95％エタノールに0.5時間浸し、毎回1時間3回還流抽出し、ろ過し、3回のろ液を合わせました。 / eエタノールを減圧下で回収し、抽出物を得て投与した。 / e抽出物（1 mL）を50％メタノールに加え、総量を20 mLにし、含有量分析のために4度で保存しました。
CDおよびWCD抽出物の分析のためのUPLC-QqQ-MS条件
MassLynx4.1Analystソフトウェアを備えたUPLC-MS/MSシステムを使用して、データの取得と処理を実行しました。 / e分析カラムは、40℃の温度でAcquityUPLC BEH C18（1 {{1 0}} 0mm×2.1mm、1.7μm）でした。/e移動相は0。1パーセントのギ酸水溶液（A）と0.1パーセントのギ酸を含むアセトニトリル（B）でした。 / e溶出勾配は0でした。00–1。00分で3パーセントのB、1.01–2。00分で3パーセント–11.5パーセントのB、2.01–3。{{ 29}}分で12パーセントのB、3.01–4。00分で15パーセントのB、4.01–5。00分で20パーセントのB、5.01–6。00分で22パーセントB、6.01–8。00分（25パーセントB）、および8.01–9。00分（10パーセントB）。/e流量は0.3 mL /分、注入量は1.0μL。
エレクトロスプレーイオン化（ESI）ソースを備えたWatersトリプル四重極質量分析計（Xevo TQD、Waters Corp.、米国マサチューセッツ州ミルフォード）を負イオンモードで使用しました。 / e脱溶媒ガスは、250度の温度で500 L/hの流量の窒素でした。 検出されたすべての化合物は、マルチプルリアクションモニタリング（MRM）モードで測定されました。 表1にエネルギーパラメータを示し、表2に分析したコンポーネントの検量線を示します。
参照物質の調製
ツブロシドA（3。0 2 mg）、エキナコシド（3。00 mg）、2'-アセチルアクテオシド（2.34 mg）、アクテオシド（2.45 mg）、イソアクテオシド（0.61 mg）、シスタノシドF （2.14 mg）、サリドロシド（3.39 mg）、ゲニポシド酸（2.84 mg）、アジュゴル（1.58 mg）、およびカタルポール（2.39 mg）をメタノールに溶解して、ストック溶液を調製しました。 / e原液をメタノールで希釈して、作業標準溶液に適した濃度にしました。 調製した溶液はすべて、使用前に4度で保存しました。
動物モデルの準備とグループ化
SD雄ラット（180〜220 g）は、Liaoning Chang sheng Biotechnological Co.から購入しました。動物許可番号：SCXK（Liao）2015〜0001。 すべてのラットは、25度、相対湿度30〜50％で餌と水を自由に摂取できる状態で飼育されました。 動物は実験前に7日間飼育された。
100匹のラットをランダムに1{{30}}グループに分けました：ブランクコントロール（BC）グループ、モデルコントロール（MC）グループ、ポジティブコントロール（PC）グループ、ライスワインコントロール（WC）グループ、CD高用量（CD-HD）グループ、CD中用量（CD-MD）グループ、CD低用量（CD-LD）グループ、WCD高用量（WCD-HD）グループ、WCD中用量（WCD-MD） ）グループ、およびWCD低用量（WCD-LD）グループ。 / e CD-HD / WCD-HD、CD-MD / WCD-MD、およびCD-LD / WCD-LDの用量は、5.48 g /（kg∙d）、2.74 g /（kg∙d）、および1.37gでした。 /（kg∙d）、それぞれ。 PCグループの/e用量は1.646g/（kg∙d）であり、WCグループの場合は1 mL / 1 00gで40日間でした。 / e投与6日後、ラットにコルチコステロン水懸濁液（コルチコステロンと0。1パーセントのジメチルスルホキシドと0。1パーセントのトゥイーン-80と0.9パーセントのナトリウム）を皮下注射しました。塩化物）BCグループを除く[18]。 コルチコステロンの/e濃度は5g/ Lであり、用量は0.1 mL /100gでした。 BCグループの/eラットには、通常の生理食塩水、0.1％のジメチルスルホキシド、0.1％のTween - 80、0.9％の塩化ナトリウムを同じ用量で注射して投与しました。
HPA軸機能の決定
重量、温度、および保持力のテスト：体重試験は3日ごとに行い、体温は6日ごとに測定しました。 実験中。 ３９日目に、後肢の最大強度をグリップメーターで測定した。 / eラットを滑らかなプラットフォームに置き、後肢がポールをつかむようにしました。 / eラットは、引っ張る力がグリップを超えるまで尾を引っ張ったときに後方に移動するのを防ぐために、本能的に物体をつかみます。 ラットがグリップを失ったとき、プリアンプは自動的に最大グリップ力を記録することができました。
血清中のT、CRH、ACTH、CORT、およびコルチゾールのレベルの測定：最後の投与から1時間後、ウレタン溶液（20 g / 100 mL）の腹腔内注射によってラットに麻酔をかけました。 / en、血液サンプルを収集し、3500 rで15分間遠心分離して血清を得、-20度で保存しました。 T、CRH、ACTH、CORT、およびコルチゾールの濃度は、製造元の指示に従ってラットELISAキットを使用して測定しました。
顕微鏡観察：副腎組織の形態学的構造をHE染色で観察した。 副腎組織を10％パラホルムアルデヒドで固定し、エタノールで脱水し、キシレン溶液で透明にし、従来の方法で包埋し、厚さ4μmのスライスに切断し、キシレン溶液で脱ロウし、エタノール勾配で水和し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色しました。染色液。 キシレンで透明にした後、プレートを中性ガムで密封し、顕微鏡で観察した。
副腎におけるBax、Bcl -2、カスパーゼ-3、Fas、およびFasLタンパク質発現の免疫組織化学的染色
ホルマリン固定、パラフィン包埋ラット副腎切片を、4μmの厚さに切断した後、脱パラフィンし、再水和した。 内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックするために、切片を過酸化水素ブロックで10分間プレインキュベートしました。 切片を0。01Mクエン酸塩（pH 6.0）に浸し、沸騰するまで加熱しました。 / eプロセスは、5〜10分後に繰り返されました。 冷却後、切片をPBS（pH 7.2–7.6）で1–2回洗浄し、室温で約5分間放置し、PBS（pH 7.2–7.6）で2–3回洗浄しました。 / e 5％BSAブロッキング溶液を室温で添加し、セクションの余分な液体を20分後に振り落としました。 Fas / FasL、Bcl -2 / Bax、およびカスパーゼ-3（PBSで1：100に希釈）に特異的な希釈一次抗体を添加し、37度で1時間または4度で一晩インキュベートしました。 / e切片をPBS（pH 7.2–7.6）で2〜3回洗浄しました。 / en、ビオチン化ヤギ抗マウスIgGを添加し、切片を20〜37度で20分間乾燥させ、PBS（pH 7.2〜7.6）で5分間4回洗浄しました。 PBSで十分に洗浄した後、切片を試薬AとBの混合物で30分間インキュベートし、PBSで45分間インキュベートし、最後にDAB基質（DAKO）で30分間現像した後、ヘマトキシリンでわずかに対比染色し、脱水し、マウントされています。
免疫機能の決定
免疫器官指数の計算：最後の投与から1時間後、ラットにウレタン溶液（20 g / 100 mL）を腹腔内注射して麻酔をかけた後、脾臓と胸腺を摘出し、滅菌フード内で直ちに体重を測定しました。 脾臓または胸腺の重量係数（パーセント）脾臓または胸腺の重量（mg）/体重（g）。
実験結果
UPLC-QqQ-MS分析：最良の分離、ピーク形状、および短い分析時間を達成するために、カラム、移動相、およびグラジエントプログラムを含むクロマトグラフィー条件を予備実験で研究しました。 /eMRMモードでの典型的なクロマトグラムを図に示します。表4から、WCDのフェニルエタノール配糖体の含有量はCDの含有量と比較して増加し、特にエキナコシドとアクテオシドの含有量は増加しましたが、イリドイドの含有量はWCDで減少しました。
HPA軸機能の調節：MCグループおよび実験グループのラットは、コルチコステロンを投与された後、徐々に腎陽欠乏症状を示しました。 / e体重減少、低体温症、脱毛、垂れ下がった精神、反応の遅れ、水の消費量と活動の大幅な減少などの症状は、CDおよびWCDグループで大幅に改善されました。 図2（a）に重量の変化を示します。 特にCD-HDおよびWCD-HDグループでは、各薬物グループの/e重量が増加しました。 MCグループの体重増加は最低でした。 図2（b）は、MC群で最も低い温度変化と、WCD-HD、WCD-MD、WCD-LD群で上昇した温度変化を示しています。
T、CRH、ACTH、CORT、およびコルチゾールのレベル：図3は、BCグループのレベルと比較して、ラット血清中のT、CRH、ACTH、およびCORTのレベルが減少したことを示しています（P <0）。><0。05）。><0。01）、wcd-ldのcrhのレベル、 wcd-md、およびwcグループが改善され（p=""><0。01）、acthの含有量がcd-hd、wcd-md、およびwcd-hdグループで増加し（p><0.01）、cortレベルがアップグレードされましたcd-md、wcd-md、およびwcd-hdグループ（p><0.01）であり、cd hdおよびwcd-ldグループ（p=""><>
顕微鏡観察の結果：副腎組織は皮質層と延髄層に分けることができます。 皮質層には、球形、束、および網状層が含まれます。 細胞はより多くの脂質を含み、延髄層は主に褐色細胞腫細胞と少量の線維組織で構成されています。 図4に示すように、BCグループではすべてが正常でしたが、MCグループでは、副腎皮質に明らかな過形成、細胞萎縮、および密度の増加が見られました。 球根状の帯が厚くなり、半透明の束状帯、狭い網状帯、および小さな細胞は、不均一な着色および毛細血管の鬱血を示した。 PCグループでは、皮質と髄質の境界が見えました。 球状および束状の帯の細胞は均一に配置され、形態学的構造が回復していた。 同じ良好な回復がWCDグループで観察され、WCD-MDグループの効果はWCD-HDおよびWCD-LDグループの効果よりも優れていました。 CDグループの副腎の形態はWCDグループのそれほど良くありませんでした。
免疫組織化学：ニューロンのアポトーシスは、多くのアポトーシスおよび抗アポトーシス遺伝子、主にアポトーシス促進遺伝子BaxおよびBcl-2遺伝子ファミリーの抗アポトーシス遺伝子によって制御されます。 Bcl -2は、ミトコンドリア、小胞体、核膜などの活性酸素産生細胞小器官に局在しています。 Bcl -2は、酸素フリーラジカルにほとんど影響を与えませんが、細胞の酸化的損傷を防ぐことができます。 Baxは細胞質からミトコンドリア膜に輸送され、ミトコンドリア膜の構造を変化させ、シトクロムcの放出とアポトーシスの誘導を促進します。
BaxおよびBcl{{0}}タンパク質の副腎細胞質に発現がありました。 /e染色はすべて黄色の粒子を示した。 BCグループと比較して、MCグループのBaxタンパク質の平均光学密度は大幅に増加しました（P <0。01）。 mcグループと比較して、cd-ldおよびwcd-ldグループの平均光学密度は大幅に減少しました（p=""><>結果は、CDおよびWCDが、FasLタンパク質の発現を促進し、Fasタンパク質に結合し、カスパーゼ-3タンパク質を活性化し、カスパーゼカスケードをトリガーすることにより、炎症細胞のアポトーシスを誘導し、副腎の損傷を軽減できることを示しました。 WCD-HDグループの効果は最高でした。
免疫機能の決定
免疫器官指数
BC群と比較して、MC群の胸腺係数と脾臓指数は有意に低下した（P<{{0}}。01）。 mcグループと比較して、wcd-mdグループが最大の差を示しました（p=""><0.05）。 胸腺係数はほぼ正常レベルに戻りました。="" 脾臓指数については、wcd="" md、wcd-ld、およびcd-mdグループは、mcグループと比較して有意差を示しました（p=""><0.01）（図6を参照）。>
末梢血中のTリンパ球サブセットの検出
BCおよび各薬剤群の左上象限のCD4プラス細胞および右下象限のCD8プラス細胞の割合は、MC群よりも高かった。 BC群と比較して、MC群ではCD4 + / CD8 +の比率が有意に減少した（P<0。01）。 mc群と比較して、cd4="" +="" cd8="" +の比率は、pc群、wcd群、およびcd-hd群で有意に増加しました（p=""><0.01）（図7）。ilレベルの決定{血清中の{12}}、il -6、il="">
図8は、BCグループと比較して、IL -6、TNF-、およびIFN-cのレベルが大幅に増加したことを示しています（P <0。01）。 レベルのil-10とil-2はmcグループで減少しました。="" mc群と比較して、各薬剤群の血清中のil="" -6、tnf-、ifn-cのレベルは低下し、il-10とil-2は上昇しました。="">
胸腺組織顕微鏡観察実験の結果
図9は、BCグループに多数のリンパ球が存在したことを示しています。 リンパ球と網状赤血球は中央にゆるく配置され、円形または楕円形の胸腺細胞が散在していた。 / ereは壊死、炎症性細胞浸潤、異常な変化はありませんでした。
MC群は、中心にリンパ球と網状赤血球の無秩序な配置を伴う、大量のリンパ性壊死組織を示した。 円形または楕円形の胸腺細胞が消失し、大量の細胞変性または壊死が明らかであり、異常な病理学的変化を伴う炎症性細胞浸潤があった。
CD群では、リンパ球の形態的特徴は正常に戻り、中枢リンパ球と網状赤血球の配置はほぼ正常でした。 円形または楕円形の胸腺細胞は回復したが、少数の変性または壊死性リンパ球および浸潤性炎症細胞が残った。
WCDグループとPCグループでは、リンパ球の形態学的特徴がよりよく修復されました。 / eリンパ球と中央の網状赤血球はよく整列しており、円形または楕円形の胸腺細胞はほぼ正常でしたが、浸潤性および変性性のリンパ球は少数残っていました。
CaMタンパク質遺伝子発現
CaM mRNAの発現を調べるために、RQ値（CaM mRNA /-アクチンmRNA）を考慮した。 BCグループのRQは1でした。MCグループの視床下部でのCaMmRNAの発現は有意に増加しましたが（P<0。01）、wcd-hdでは値が減少しました。 wcd-md、wcd="" ld、およびcd-hdグループ（p=""><{{1 0}}。05）（図10）。="" mc群の下垂体におけるcammrnaの発現は、bc群よりも低かった（p=""><0.01）。 wcd-hd、wcd-md、wcd-ld、cd-hd、およびcd-ldグループでの/="" e発現が増加し（p=""><>
討論
中国薬局方[2]は、CDとWCDが煎じ薬の主な種類として診療所で使用できることを記録しています。 ライスワインで蒸した後、老化防止と強壮効果の腎臓陽効果が強化されました。 UPLC-QqQ-MSを通じて、ライスワインの蒸し過程における化学物質ベースの量的変化を検出しました。 イリドイド配糖体は不安定であり、これらの配糖体の含有量は減少し、検出できなくなった。 フェニルエタノール配糖体の含有量も変化し、薬力学と臨床効果に変化を引き起こす可能性があります。
古典的な腎臓陽欠乏モデルは、コルチコステロンの皮下注射によって再現されました[19]。 コルチコステロンの過剰摂取は、視床下部におけるCRHの秘密を阻害する可能性があります。 その間、ACTHの秘密も抑制されました。 副腎皮質ホルモンの/eレベルが低下したため、HPA軸の機能が低下しました。 HPA軸の機能低下は、腎陽欠乏症の一般的な特徴です[20]。 その後、ラットは「枯渇」現象を示し、症状はクリニックの腎臓陽欠乏症の症状と一致しています。
MC群では、ラット血清中のCRH、ACTH、T、およびCORTのレベルが有意に低下しました（P <0 .01）。="" cdとwcdで治療した後、crh、acth、t、cort、コルチゾールの含有量はすべてある程度増加し、wcd-mdの効果は最高で、pcグループとほぼ同じでした。="">
Bcl {{0}}ファミリーメンバーの比率を調節することは、Fas / FasLが死受容体経路を仲介するコアメカニズムの1つであり、Bcl-2ファミリーはミトコンドリア経路を調節します[21]。 アポトーシス阻害因子Bcl-2およびBaxなどのアポトーシス誘導因子はすべてBcl-2ファミリーに属しています[22]。 細胞アポトーシスは、アポトーシス阻害因子とアポトーシス誘導因子の相対的な比率によって決定される可能性があります[23]。 ミトコンドリアは、多くの形態のアポトーシスの中心的なチェックポイントの機能を持っていました[24]。 本研究は、CD-MDおよびWCDがBaxの発現を推定し、Bcl -2を増加させて、腎臓陽欠乏症を改善できることを示しました。 Fasは、Fasリガンド（FasL）とのライゲーションによってアポトーシスを誘導する主要なデスレセプターです[25]。 MCグループのFasおよびFasLの発現は増加しましたが、この発現はMCグループと比較してWCD-MDグループ（P <0。01）で有意に増加しました。 fas/faslシステムとbax/bcl="" -2システムはどちらも、アポトーシスシグナルをカスパーゼファミリーに伝達します[26]。="" カスパーゼ-3は、細胞アポトーシスを開始する極めて重要なプロテイナーゼの1つです。="" カスパーゼ-3の活性化は、アポトーシスが不可逆的な段階に入ったことを示しています[27]。="" mcグループのカスパーゼ-3の発現は、wcd-hdグループとwcd-mdグループで増加および有意に増加しました（p=""><>
の不足免疫機能腎臓陽欠乏症の重要な症状の1つです[28]。 この研究では、WCD-MDグループの脾臓と胸腺のインデックスが大幅に回復したことを発見しました（P<><0。{{3{ {32}}}}="" 5）。="" 免疫系の/e免疫応答は、主に/サブグループによって調節されます[29]。="" il="" -2はt細胞の成長因子であり、t細胞とマクロファージから分泌され、炎症調節に関与し、免疫を調節し、感染抵抗性を高めます[30]。="" mc群の/eレベルのil-2は減少し（p=""><0.01）、cdおよびwcdによる治療後、il-2のレベルは回復しました。 il-6とtnf-は炎症性サイトカインです。="" il="" -6およびtnf-サイトカインのレベルの上昇は、サイトカインの不均衡を引き起こし、炎症を悪化させます。="" eレベルのil-6とtnf-はmcグループで増加しましたが、治療後、il-6とtnf-のレベルは減少しました。="" t細胞はcd4細胞とcd8細胞に分けられ、cd4プラス/cd8プラス比は免疫調節の重要な指標として使用できます[31]。="" mcグループのcd4plus/="" cd8="" plusは明らかに減少し（p=""><0.01）、wcdおよびcd hdグループでは増加しました（p=""><>
HPA軸は、副腎皮質の分泌機能を維持するために糖質コルチコイド分泌と内分泌系を調節するため、最も重要な調節システムです[32]。 視床下部組織におけるCaMmRNAの過剰発現は、腎臓陽の欠乏に関連していた。 CDとWCDは、カルシウムチャネルを遮断し、視床下部でのCaM mRNA発現を阻害し、カルシウム流入を減少させ、Ca2とCaM複合体の活性を低下させる可能性があります。
腎臓陽欠乏症の形成には、慢性疾患の発症過程があります。 腎臓はもはや純粋な解剖学的概念ではなく、神経内分泌免疫および泌尿生殖器系の総称です。 神経内分泌免疫（NEI）ネットワークは、重要な統合された規制システムです[33]。 CDとWCDは、HPAT軸の機能を調節し、腎臓陽欠乏症の回復を改善することができます。 / isの結果は、腎臓陽欠乏症の臨床的予防と治療の実験的基礎を提供します。
参考文献
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