ワクチンはSARS-CoV-2オミクロン変異体に対して高度に交差反応性の細胞性免疫を誘発します
Mar 24, 2022
連絡先：Audrey Hu Whatsapp / hp：0086 13880143964メール：audrey.hu@wecistanche.com
Jinyan Liu1 *、Abishek Chandrashekar1 *、Daniel Sellers1 *、Julia Barrett1、Michelle Lifton1、Katherine McMahan1、Michaela Sciacca1
Haley VanWyk1、Cindy Wu1、Jingyou Yu1、Ai-ris Y. Collier1、Dan H. Barouch1,2 *
1 Beth Israel Deaconess Medical Center、ボストン、マサチューセッツ、米国。
2 Ragon Institute of MGH、MIT、およびハーバード、ケンブリッジ、マサチューセッツ、米国
高度に変異したSARS-CoV-2オミクロン（B.1.1.529）変異体は、WA1 / 2020スパイク免疫原1をコードする現在のワクチンによって誘発される中和抗体応答のかなりの部分を回避し、ブレイクスルー感染を増加させることが示されています。ワクチンの有効性が低下します。 細胞性免疫応答、特にCD8とT細胞の応答は、重症のSARS-CoV-2疾患2-6に対する防御に重要である可能性があります。 ここでは、現在のSARS-CoV -2ワクチンによって誘発される細胞性免疫が、SARS-CoV-2オミクロン変異体に対して高度に交差反応性であることを示しています。 Ad26.COV2.SまたはBNT162b2ワクチンを接種した個人は、中枢およびエフェクター記憶細胞亜集団を含む、デルタおよびオミクロン変異体の両方に対して広範な交差反応性を示す、耐久性のあるCD8plusおよびCD4plusT細胞応答を示しました。 オミクロン特異的CD8プラスT細胞応答の中央値は、WA1/2020-特異的CD8プラスT細胞応答の82-84パーセントでした。 これらのデータは、現在のワクチンが、中和抗体反応の大幅な減少にもかかわらず、SARS-CoV-2オミクロン変異体による重症疾患に対するかなりの防御を提供する可能性があることを示唆しています。
最近の研究によると、ワクチン誘発中和抗体（NAb）は、高度に変異したSARS-CoV -2オミクロン変異体に大幅に減少し、完全にワクチン接種された個人のブレイクスルー感染を含む急速な世界的広がりをもたらします1。 SARS-CoV -2オミクロン変異体に対するワクチン誘発細胞性免疫応答の交差反応性を評価するために、アデノウイルスベクターベースのAd26をワクチン接種した51人の個人でCD8plusおよびCD4plusT細胞応答を評価しました。 COV2.Sワクチン7（Johnson＆Johnson; N =20）またはmRNAベースのBNT162b2ワクチン8（Pfizer; N =31）。
BNT162b2ワクチン接種後、1か月目に高いWA1 / 2020-特異的NAb応答が観察され、予想どおり8か月目までに急激に減少しました9,1 0（図1a）。 Ad26.COV2.Sワクチン接種後、1か月目でWA1 / 2020-特異的NAb応答が実質的に低くなりましたが、これらの応答はより耐久性があり、89、11か月目でも持続しました（図1a）。 しかし、両方のワクチンで最小限の交差反応性オミクロン特異的NAbが観察され（図1a）、追加の追加免疫がない場合の最近のデータと一致しています1。 受容体結合ドメイン（RBD）特異的結合抗体応答はELISAによって評価され、最小の交差反応性オミクロン特異的結合抗体で同様の傾向を示しました（図1b）。抗体応答とは対照的に、スパイク特異的細胞性免疫応答はプールされたペプチドIFN-gELISPOTアッセイは、オミクロンに対して実質的な交差反応性を示しました（拡張データ図1）。 次に、細胞内サイトカイン染色アッセイにより、スパイク特異的CD8plusおよびCD4plusT細胞応答を評価しました。 Ad26.COV2.Sは、スパイク特異的IFN-gCD8とT細胞応答の中央値を0。061パーセント、0。0 62パーセント、および{{ 72}}。0ワクチン接種後8か月目で、WA1 / 2 0 2 0、デルタ、オミクロンに対してそれぞれ51％。（図2a）。 BNT162b2は、ワクチン接種後8か月目に、WA1 /2020およびオミクロンに対してそれぞれ0。028パーセントおよび0.023パーセントのスパイク特異的IFN-gCD8プラスT細胞応答の中央値を誘導しました（図2a）。 これらのデータは、オミクロン特異的CD8プラスT細胞応答がWA1/2020-特異的CD8プラスT細胞応答と82-84パーセント交差反応性であることを示唆しています。 Ad26.COV2.Sによって誘発されたスパイク特異的IFN-gCD4+ T細胞応答は、WA1 / 2020、デルタ、およびオミクロンに対してそれぞれ0.026パーセント、0.030パーセント、および0.029パーセントの中央値であり、BNT162b2によって中央値はWA1 / 2020およびオミクロンに対してそれぞれ0.033パーセントおよび0.027パーセントであり、CD4とT細胞の応答の実質的な交差反応性も示しています（図2b）。 CD8プラスおよびCD4プラスT細胞応答を分泌するスパイク特異的TNF-αおよびIL-2についても、実質的なオミクロン交差反応性が観察されました（拡張データ図2）。
線形回帰分析は、オミクロン特異的CD8 + T細胞応答が、両方の時点でAd26.COV2.SワクチンのWA1/2020-特異的CD8+T細胞応答と相関することを示しました（R =0。78、P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">
私たちのデータは、Ad26.COV2.SとBNT162b2が、オミクロンを含むSARS-CoV-2変異体に対して広く交差反応性の細胞性免疫を誘発することを示しています。 2つの異なるワクチンプラットフォーム技術（ウイルスベクターとmRNA）にわたるこれらの観察結果の一貫性は、これらの発見の一般化可能性を示唆しています。 オミクロン特異的CD8plusおよびCD4plusT細胞応答の広範な交差反応性は、著しく減少したオミクロン特異的中和および結合抗体応答とは著しく対照的です。 これらのデータは、SARS-CoV -2アルファ、ベータ、およびガンマ変異体に対する体液性免疫応答と比較して、ワクチン誘発細胞性免疫応答の交差反応性が高いことを示す以前の研究と一致しています12。 CD8とオミクロンに対するT細胞応答の82-84パーセントの交差反応性は、オミクロン変異に基づく理論的予測と一致しています6。
前臨床試験では、特に抗体反応が最適ではない場合、CD8とT細胞がアカゲザルのSARS-CoV-2に対する防御に寄与することが示されています5。 耐久性のあるCD8plusおよびCD4plusT細胞応答も、感染およびワクチン接種後に報告されています2- 4、6,9,11,13,14。 ウイルス感染の除去におけるCD8プラスT細胞の役割を考えると、細胞性免疫は、重症のSARS-CoV-2疾患に対するワクチン保護に実質的に寄与する可能性があります。 これは、抗体反応のかなりの部分を回避するオミクロンに特に関係があるかもしれません。 私たちのデータは、現在のワクチンが、中和抗体反応の低下とブレイクスルー感染の増加にもかかわらず、SARS-CoV-2オミクロン変異体による重篤な疾患に対する実質的な防御を提供する可能性があることを示唆しています。
シスタンシュパウダー
メソッド
調査対象母集団
BNT162b2ワクチンを受けた個人からのサンプルは、Beth Israel Deaconess Medical Center（BIDMC）標本バイオリポジトリから入手しました。 Ad26.COV2.Sを投与された個人からのサンプルは、COV1001研究（NCT04436276）から取得されました。 両方の研究は、BIDMCの機関審査委員会によって承認されました。 すべての参加者はインフォームドコンセントを提供しました。 SARS-CoV - 2感染の病歴がある、他のCOVID -19ワクチンを受けている、または免疫抑制薬を受けている個人は、この研究から除外されました。偽ウイルス中和抗体アッセイ
ルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現するSARS-CoV-2偽ウイルスを使用して、偽ウイルス中和抗体を測定しました。 簡単に説明すると、パッケージングコンストラクトpsPAX2（AIDS Resource and Reagent Program）、ルシフェラーゼレポータープラスミドpLentiCMV Puro-Luc（Addgene）、およびスパイクタンパク質発現pcDNA3。1-SARS-CoV-2SΔCTは共同でリポフェクタミン2000（ThermoFisher Scientific）を使用してHEK293T細胞（ATCC CRL _3216）にトランスフェクトしました。 SARS-CoV -2バリアントの疑似ウイルスは、WA1 / 2020株（Wuhan / WIV04 / 2019、GISAIDアクセッションID：EPI _ ISL _402124）、B.1.1.7バリアントを使用して生成されました。 （アルファ、GISAIDアクセッションID：EPI _ ISL _601443）、B.1.351バリアント（ベータ、GISAIDアクセッションID：EPI _ ISL _712096）、B.1.617。 2（デルタ、GISAIDアクセッションID：EPI _ ISL _2020950）、またはB.1.1.529（オミクロン、GISAID ID：EPI _ ISL _7358094。2）。 疑似型ウイルスを含む上清をトランスフェクションの48時間後に収集しました。 疑似型ウイルスは、0。45-μmフィルターを使用したろ過によって精製されました。 ヒト血清の中和活性を測定するために、HEK293T-hACE2細胞を96-ウェル組織培養プレートにウェルあたり1.75×104細胞の密度で一晩播種しました。 熱不活化血清サンプルの3倍段階希釈液を調製し、50ulのシュードウイルスと混合しました。 混合物を37度で1時間インキュベートした後、HEK293T-hACE2細胞に添加しました。 48時間後、製造元の指示に従って、細胞をSteady-Gloルシフェラーゼアッセイ（Promega）で溶解しました。 SARS-CoV -2中和力価は、ウイルスコントロールウェルの平均と比較して、相対光単位で50％の減少（NT50）が観察されたサンプル希釈として定義されました。
酵素免疫測定法（ELISA）
血清中のSARS-CoV-2スパイク受容体結合ドメイン（RBD）特異的結合抗体をELISAで評価しました。 96-ウェルプレートを2ug/mLのSARS-CoV-2WA1 / 2 0 2 0、B.1.617.2（Delta）、B.1.351でコーティングしました（ベータ）、または1×ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（DPBS）中のB.1.1.529（オミクロン）RBDタンパク質で、4度で一晩インキュベートしました。 インキュベーション後、プレートを洗浄バッファー（1×DPBS中の0.05パーセントTween 20）で1回洗浄し、ウェルあたり350μLのカゼインブロック溶液で室温で2〜3時間ブロックしました。 インキュベーション後、ブロック溶液を廃棄し、プレートを吸い取って乾かした。 カセインブロックで希釈した熱不活化血清の段階希釈液をウェルに加え、プレートを室温で1時間インキュベートした後、さらに3回洗浄し、抗1：4000希釈液で1-時間インキュベートしました。暗所での室温でのヒトIgGホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）（Invitrogen、ThermoFisherScientific）。 プレートを3回洗浄し、100μLのSeraCare KPL TMBSureBlueStart溶液を各ウェルに添加しました。 ウェルあたり100μLのSeraCareKPLTMB Stop溶液を添加することにより、プレートの開発を停止しました。 650 nmを基準とした、450 nmでの吸光度を、VersaMaxマイクロプレートリーダー（Molecular Devices）で記録しました。 各サンプルについて、ELISAエンドポイント力価は4-パラメーターロジスティックカーブフィットを使用して計算され、0.2の補正された吸光度値（450 nm -650 nm）をもたらす血清の逆数希釈を計算しました。 補間されたエンドポイント力価が報告されました。
ニクジュヨウ抽出物：免疫力を向上させる
酵素免疫測定法（ELISPOT）アッセイ。
ELISPOTプレートをMabTechのマウス抗ヒトIFN-モノクローナル抗体で1µg /ウェルでコーティングし、4度で一晩インキュベートしました。 プレートをDPBSで洗浄し、R1 0培地（1％の100xペニシリン-ストレプトマイシン、1M HEPES、100mMピルビン酸ナトリウム、200mM L-グルタミン、および0.1％の55mMを含む10％熱不活化FBSを含むRPMI）でブロックしました。 2-メルカプトエタノール）37度で2-4時間。 SARS-CoV-2からプールされたSペプチド-2WA1/ 2020、B.1.617.2（デルタ）、またはB.1.1.529（オミクロン）（21世紀の生化学物質）が調製され、 2 µg /ウェルの濃度でプレーティングし、100、000細胞/ウェルをプレートに加えました。 ペプチドと細胞を37度で15-20時間インキュベートしました。 このインキュベーションに続くすべてのステップは、室温で実行されました。 プレートをELISPOT洗浄バッファーで洗浄し、MabTechのビオチン化マウス抗ヒトIFN-モノクローナル抗体（1 µg / mL）とともに2-4時間インキュベートしました。 プレートを2回洗浄し、Rockland、Inc.の結合ヤギ抗ビオチンAP（1.33 µg / mL）とともに2-3時間インキュベートしました。 最後の洗浄に続いて、ニトロブルーテトラゾリウムクロリド/ 5-ブロモ-4-クロロ3'インドリルホスフェートp-トルイジン塩（NBT / BCIPクロマゲン）基質溶液を7分間添加した。 クロマゲンを廃棄し、プレートを水で洗浄し、薄暗い場所で24時間乾燥させた。 プレートをスキャンし、CellularTechnologiesLimitedイムノスポットアナライザーでカウントしました。
細胞内サイトカイン染色（ICS）アッセイ
CD4plusおよびCD8plusT細胞応答は、プールされたペプチド刺激細胞内サイトカイン染色（ICS）アッセイによって定量化されました。 ペプチドプールには、SARS-CoV -2 WA1 / 2 0 2 0、B.1.617.2（Delta）、またはB.1.1にまたがる11個のアミノ酸が重複する15個のアミノ酸ペプチドが含まれていました。 .529（オミクロン）スパイクタンパク質（21世紀の生化学物質）。 1 0 6個の末梢血単核細胞ウェルを、CD49dモノクローナル抗体（1 µg / mL）およびCD28モノクローナル抗体（1 µg / mL）を添加した1 0 0 µLのR10培地に再懸濁しました。 各サンプルは、モック（100 µLのR10と0.5％DMSO、バックグラウンドコントロール）、ペプチド（2 µg / mL）、および/または10 pg / mLミリステートホルボール（PMA）と1 µg / mlイオノマイシン（Sigma- Aldrich）（100µL;ポジティブコントロール）および37度で1時間インキュベートしました。 インキュベーション後、0.25 µLのGolgiStopと0.25 µLのGolgiPlugを50 µLのR10に入れて各ウェルに添加し、37度で8時間インキュベートした後、4度で一晩保持しました。 翌日、細胞をDPBSで2回洗浄し、アクアライブ/デッド色素で10分間染色した後、CD279（クローンEH12.1、BB700）、CD4（クローンL200、BV711）に対するモノクローナル抗体の所定の力価で染色しました。 CD27（クローンM-T271、BUV563）、CD8（クローンSK1、BUV805）、CD45RA（クローン5H9、APC H7）で30分間。 次に、細胞を2％FBS / DPBSバッファーで2回洗浄し、200 µLのBD CytoFix / CytoPerm Fixation/Permeabilization溶液で15分間インキュベートしました。 細胞を1XPermWashバッファー（CytoFix / CytoPerm Fixation/PermeabilizationキットのBDPerm/ WashTMバッファー10XをMilliQ水で希釈し、0.22µmフィルターに通したもの）で2回洗浄し、IFN-に対するモノクローナル抗体（クローンB27; BUV395）、およびCD3（クローンSP34.2、Alexa 700）、30分間。 細胞を1XPermWashバッファーで2回洗浄し、新たに調製した1.5％ホルムアルデヒド250µLで固定しました。 固定した細胞を96-丸底プレートに移し、BDFACSymphony™システムで分析しました。 FlowJov9.9を使用してデータを分析しました。
cistancheサプリメント：免疫力を向上させる
参考文献
1. Cele S、Jackson L、Khan K、他。 SARS-CoV -2オミクロンは、ファイザーBNT162b2の大規模ではあるが不完全な脱出により中和を誘発し、感染にはACE2を必要とします。 medRxiv2021。
2.ダンJM、マテウスJ、加藤Y他 SARS-CoV -2に対する免疫記憶は、感染後最大8か月間評価されました。 科学2021;371。
3. Sette A、CrottyS.SARS-CoV-2およびCOVID-19に対する適応免疫。 セル2021;184：861-80。
4. Goel RR、Painter MM、ApostolidisSAなど。 mRNAワクチンは、SARS-CoV-2および懸念される変異株に対して永続的な免疫記憶を誘導します。 Science 2021; 374：abm0829。
5. McMahan K、Yu J、Mercado NB、他。 アカゲザルのSARS-CoV-2に対する保護の相関関係。 Nature 2021; 590：630-4。
6. Grifoni A、Weiskopf D、Ramirez SI、他。 COVID-19疾患のヒトおよび曝露されていない個人におけるSARS-CoV-2コロナウイルスに対するT細胞応答の標的。 Cell 2020; 181：1489-501e15。
7. Sadoff J、Gray G、Vandebosch A、他。 Covid-19に対する単回投与Ad26.COV2.Sワクチンの安全性と有効性。 N Engl J Med 2021; 384：2187-201。
8. Polack FP、Thomas SJ、Kitchin N、他。 BNT162b2 mRNACovid-19ワクチンの安全性と有効性。 N Engl JMed2020。
9. Collier AY、Yu J、McMahan K、他。 Covid-19ワクチンによって誘発された免疫応答の異なる動態。 N Engl J Med 2021; 385：2010-2。
10. Falsey AR、Frenck RW、Jr.、Walsh EE、他。 SARS-CoV-2BNT162b2ワクチン投与量による中和3.NEngl JMed2021。
11. Barouch DH、Stephenson KE、Sadoff J、他。 Ad26.COV2.Sワクチン接種から8か月後の耐久性のある体液性および細胞性免疫応答。 N Engl J Med 2021; 385：951-3。
12. Alter G、Yu J、Liu J、他。 ヒトにおけるSARS-CoV-2変異体に対するAd26.COV2.Sワクチンの免疫原性。 Nature 2021; 596：268-72。
13. Poon MML、Rybkina K、Kato Y、他。 SARS-CoV -2感染は、ヒトに組織に局在する免疫記憶を生成します。 科学免疫学2021;6：eabl9105。
14. Vidal SJ、Collier AY、Yu J、他。 初期のパンデミック血清による懸念のSARS-CoV-2変異株に対する中和の相関関係。 J Virol 2021; 95：e0040421。
シスタンチェサプリメントの利点：免疫力を向上させる
