免疫機能に対するCistanche多糖類の利点は何ですか
Mar 10, 2022
Cistanche多糖類の免疫学的活性とメカニズム
Zeng Qunli、Zheng Yifan、Lu Zhiliang
[概要]目的：研究する免疫の活動Cistanche多糖類（CDPS）とそのメカニズム免疫invitroでの調節。 方法：チアゾールブルー比色法（MTT）を使用して、CDPSの調節効果を観察しました（Cistanche多糖類）invitroでのマウス胸腺リンパ球の増殖を阻害するIQSDEXTNFについて。 CDPS（Cistanche多糖類）は、フローサイトメトリーを使用して細胞周期および細胞周期分析を実行するために使用されました。 細胞内Ca2の測定。 結果：CDPS（Cistanche多糖類）高濃度では、リンパ球増殖に対するISQDEXの阻害効果とリンパ球増殖に対する高濃度TNFの阻害効果に抵抗し、リンパ球に対する低濃度TNFの増殖促進効果を相乗作用させることができます;100ug / ml 200 ug / ml CDPS（Cistanche多糖類）分裂期の細胞を大幅に増やすことができます。 高濃度（100ug / ml）CDPS（Cistanche多糖類）マウス胸腺細胞のCaイオン濃度を大幅に高めることができます。 結論：CDPS（Cistanche多糖類）細胞が分裂期に入るのを促進することができ、マウス胸腺リンパ球の増殖に対するその促進効果は、マウス胸腺リンパ球におけるカルシウム放出の促進に関連していると推測されます。
Cistanche(CistancheニクジュヨウYC Ma）は、私の国では珍しく貴重な中国の医薬品です。 「神農のマテリアメディカ」のトップグレードに掲載されています。Cistanche血液に栄養を与え、腎臓に栄養を与え、陽を助け、腸に潤いを与え、老化を遅らせる機能があります。 現代の薬理学的研究はそれを示していますCistanche多糖類体を改善することができます免疫関数、DNA合成を促進し、体力を強化し、知性を向上させ、明らかなアンチエイジング効果をもたらします[1]。 著者はCDPSの規制を研究しました（Cistanche多糖類）、の多糖類成分Cistanche、免疫関数マウスリンパ球の。
1材料と方法
1.1試薬と薬。
RPM、I 1640培地：GIB-CO; HEPES：FARCO; L-グルタミン：上海東風試薬工場; ペニシリンとストレプトマイシン：中国北部の製薬工場。 コンカナバリン（ConA）、MTT：SIGM A Company; フィトヘマグルチニン（PHA）：上海医療研究所; イソプロテレノール（ISO）：上海天豊製薬工場; メルカプトエタノール：Fluka Company; 新生子牛血清：Sijiqing Bioengineering Company; デキサメタゾン（DEX）は、浙江大学医学部の最初の付属病院である馬良博士によって発表されました。 腫瘍抑制因子（TNF）は、浙江大学生命科学部細胞学科教授のYuYuehanによって提供されました。 残りの試薬はすべて国産の分析グレードです。
1.2実験動物。
ICRマウス、オス、68週齢、体重18-20 g、22匹は、浙江実験動物センターから購入しました。
1.3Cistanche多糖類の抽出[2]:
Cistanche多糖類私たちの研究室によって抽出されます！ 生薬を粉砕した後Cistanche、それを熱エタノールに浸し、沸騰水で抽出し、エタノールで沈殿させる。 中性酵素とSewag法を組み合わせた除タンパク、陰イオンDEAE-SephadexA- 50交換クロマトグラフィーおよびSephacryS-200ゲルろ過クロマトグラフィーにより、CDPSの単一成分を取得します（Cistanche多糖類））。 乾燥状態を保ち、不完全なRPMI1640を使用して使用前に一定の濃度にし、限外濾過で滅菌します
1.4脾臓および胸腺リンパ球の調製[3]：
The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93、脾臓細胞の濃度をX 10 / mlに調整し、胸腺細胞の濃度を×10度/mlに調整します。
1.5リンパ球増殖反応：Mosmanmn法[4]による改善：96-ウェル細胞培養プレートに、1 0/ml脾臓細胞懸濁液または水10/ml胸腺細胞懸濁液100M1と異なる濃度の薬剤10041を各ウェルに加えます。 CO2.37Cインキュベーターで72時間培養します。 培養終了の4時間前に、各ウェルに8μ1のMTT（5 mg / ml）を加えます。 培養の最後に、各ウェルから150 "1の上清を吸引し、0.5Nイソプロパノール塩酸塩150M1を加えます。マイクロシェーカーで軽く振って青い結晶を完全に溶解します。マイクロプレートリーダーでOD570を測定します。各実験を設定します。 3つの複製ウェルとしてポイントします。
1.6細胞周期への影響の決定[5]：
{{0}}ウェル細胞培養プレート、4 10度/ mlの胸腺細胞懸濁液1mlを各ウェルに加え、さまざまな試薬と多糖類溶液を強CO中の2mlに加え、37インキュベーター72時間培養した後、遠心分離します。 15 0 0r / minで15分間、上清を捨て、7つのエタノールを加えて沈殿した細胞を固定し、スタンバイテストのために4Cで保存し、細胞をPBSで2回洗浄し、1500r / minで15分間遠心分離し、 0.5ml0.1 RNaseAを4℃で30分間消化した後、50ug / mlブロモアセテートを4℃で30分間染色し、細胞サンプルの蛍光強度をFACScanフローサイトメーターで測定しました。 10、000セルテストポイントが各サンプルに対して収集され、データはMul三輪車ソフトウェア分析を使用しました。
1.7細胞内カルシウムイオン濃度の測定[6]
上記と同じ方法でマウス胸腺細胞を採取します。 不完全なRPMIl640培地に懸濁し、細胞濃度を×10'/mlに調整します。 1mlの胸腺細胞懸濁液と1μMを各実験チューブに加えます。Fluo-3AM染色液5μ1、2パーセントF -275μ1、37で30分間インキュベートした後、不完全なRPM1640、1500r/で2回洗浄します。分、10分間遠心分離し、上清を捨て、沈殿した細胞に異なる濃度の多糖類と多糖類を加えます。ConA後、FACScanフローサイトメーターで蛍光強度を測定しました。 10個の000セルテストポイントのデータが各サンプルについて収集され、CELLQUESTソフトウェアによって分析されました。 1.8分散分析には統計的手法を使用し、フローサイトメーターのソフトウェアによって細胞周期とカルシウムイオンの測定を分析しました。
ニクジュヨウからのホンオニク多糖類
2結果
2.1Cistanche多糖類はinvitroでISODEXTNFによりマウス胸腺リンパ球の増殖を阻害します
-アドレナリン受容体アゴニストであるイソプロテレノール（ISO）と副腎皮質ホルモンのデキサメタゾン（DEX）のクラスは、リンパ球増殖CDPSを阻害します（Cistanche多糖類）高濃度（75 125 ug / ml）では、リンパ球増殖（P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche 多糖類）（125ug / ml）は、高濃度でTNFの阻害効果に抵抗し、低濃度のTNFでリンパ球の増殖を相乗的に促進します（図2）。
2.2Cistanche多糖類による胸腺リンパ球サイクルの調節
CDPS（Cistanche多糖類）25ug / ml 1 0 0ug / ml 200＃g / ml 3つの濃度をマウス胸腺リンパ球に72時間作用させ、細胞内のDNA含有量をFACSで測定し、増殖指数（PI）を計算しました。式によると。 結果は、100ug/mlと200ug/mlの両方が分裂期の細胞を有意に増加させることができ、両方の増殖指数（68.0パーセント、56.6）が対照群（44.6）および200ug/mlよりも有意に高いことを示しています200ug / mlの濃度では、細胞増殖への影響が減少傾向になっているため、グループは100ug/mlグループよりもわずかに低くなっています[7]。 25ug / mlグループのPI値（47.5パーセント）は、コントロールグループのそれよりも有意に高くはありませんでした。
2.3マウス胸腺細胞のカルシウムイオン濃度に対するCistanche多糖類の影響
実験結果は、より高濃度（100 ug / ml）のCDPS（Cistanche多糖類e）マウス胸腺細胞のカルシウムイオン濃度の増加を有意に促進できる対照群と比較して、有意差があります（P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">
3ディスカッション
Cistanche、通称「高麗人参"、の乾燥した鱗状の肉質の茎ですホンオニク。Cistanche腎臓陽、栄養エッセンス、血液、腸に栄養を与える機能があります。 それは下垂体-副腎皮質の一種の興奮に属しているか、副腎皮質と同様のホルモンのような効果があります。 を調整することができる貴重な漢方薬免疫関数体の。 私たちの以前の研究結果は、CDPS（Cistanche多糖類）in vitroは、ConAPHAによって活性化または活性化されていない胸腺Tリンパ球の増殖を促進する可能性があります。 ConA PHAと組み合わせると、T細胞刺激因子には2つのタイプがあり、CDPS（Cistanche多糖類）はT細胞の悪玉であり、CDPS（Cistanche多糖類）高濃度でマウス脾臓リンパ球の分泌を有意に増加させることができます[8]
いくつかの研究では、組換えTNFがin vitroで正常なマウスおよびヒトTリンパ球クラスターのアポトーシスを引き起こす可能性があり、この効果はIIL -2 IL-1IFNおよびIIL-4によって潜在的に阻害される可能性があることがわかっています。デキサメタゾン（DEX）を使用すると、リンパ球の発現とIL -2の分泌を阻害し、高親和性IL -2 Rの産生をダウンレギュレートすることにより、リンパ球の増殖を阻害できます。 この実験では、CDPSの濃度が高いことがわかりました（Cistanche多糖類）リンパ球増殖に対する高濃度のTNFの影響を打ち消すことができます。 リンパ球の増殖を促進するための低濃度のTNFと相乗的であり、リンパ球の増殖に対するISQDEXの阻害効果に対抗することができる阻害。 これらの効果は正確にCDPSを介して行われます（Cistanche多糖類）Tリンパ球の増殖を促進し、T細胞IL-2および他のサイトカインによる自己分泌を完了します。
近年、植物多糖類の免疫薬理学的効果に関する多くの研究がありますが、免疫多糖類の調節メカニズム、特にセカンドメッセンジャーとしてCa2を用いてリンパ球に作用する多糖類のシグナル伝達経路。 報告はありません。 この実験では、この分野で予備調査を実施しました。 細胞内シグナル伝達分子には、cAM R Ca "、IP3 DG cGMPなどが含まれ、その中でCa"は細胞に対して非常に重要な生理学的効果を持っています。 細胞内Ca²濃度の増加は、リンパ球の活性化と増殖の初期段階における重要な現象です。 このプロセスは主に、細胞が刺激装置によって活性化される最初の数十秒から数分で発生します。 T細胞活性化の古典的な方法は、ホスファチジル筋を代謝するホスファチジルイノシトール（PIB）です。 アルコール代謝物1,4。5-イノシトール三リン酸（IP3）は、内部メッシュ受容体に結合し、細胞内Ca2のレベルと細胞内Caの濃度を増加させることにより、内部メッシュに保存されたCa"の放出を促進できます。 *増加します。高濃度はNF-AT（活性化T細胞のヌード因子）の産生を促進し、後者はIIL -2遺伝子の発現を促進する効果があります。実験結果は、より高い濃度（100ug / ml）を示しています。 ）のCDPS（Cistanche多糖類）は5 10分間有効です。時間はマウス胸腺細胞のCa *濃度の増加に大きな影響を及ぼし、ConAとの相乗効果があります。 したがって、CDPS（Cistanche多糖類）マウス胸腺リンパ球でのカルシウムの放出を促進し、細胞内カルシウムイオン濃度を増加させます。 この増加はIL-2遺伝子の発現を促進し、T細胞の増殖を引き起こします。これはCistanche多糖類の体への規制効果
Cistanche多糖類
参考文献
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