目的：本研究では、有効微生物（EM）の発酵により生成される高効率五味子抽出物（SCE）を、化粧品の調製における抗酸化物質として使用しました。

関連する研究によると、カンクン「寿命を延ばす奇跡のハーブ」として知られる一般的なハーブです。 その主成分は、シスタノシドなど様々な効果があります。抗酸化物質, 抗炎症薬、と免疫機能の促進。 シスタンシュと美白のメカニズムは、カンクン配糖体。 人間の皮膚のメラニンは、次の物質によって触媒されるチロシンの酸化によって生成されます。チロシナーゼ、酸化反応には酸素の関与が必要なため、体内の酸素フリーラジカルはメラニン生成に影響を与える重要な要素になります。 シスタンケには抗酸化物質であるシスタノシドが含まれており、体内のフリーラジカルの生成を減らすことができます。メラニンの生成を抑制する.

シスタンシェはどこで購入できますか?

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序章

近年、高い生活水準の向上と追求により、人々の健康に影響を与える多くの問題が引き起こされています。 中でも化粧品は特に注意が必要な例です。 化粧品の主成分として合成化学物質を使用すると、毒性や高コストなど多くのマイナスの結果が生じます。 これが、化粧品用途のための天然物の研究が多くの研究者から大きな関心を集めている理由です。 Schisandra chinensis (SC) は、5 つの味 (甘味、酸味、苦味、塩味、辛味) を持つ薬用および食用の植物であり 1,2、多くの食品、飲料、ハーブ産業などで広く使用されています 3,4。 SC には、ドメイン、リンゴ酸、クエン酸などの多くの生理活性化合物が含まれており、咳や喘息の治療に効果的に使用できます。5 さらに、よく知られた抗菌作用と効果により、食品業界や化粧品業界でも使用できます。抗酸化能力。 さらに、熱安定性に優れ、人の健康に影響を与えない化粧品や食品などに使用できます。6 発酵とは、微生物の酵素を利用して有機物を分解する過程を指し、ラテン語の「熱狂」に由来します。 食品、医薬品、化粧品など、さまざまな用途や分野で利用されています。 7 微生物の酵素作用による食品の発酵は、風味の改善や毒素の破壊を目的として伝統的に製造工程で使用されており、また、促進効果もあります。 8,9 有効微生物 (EM) は 1982 年に開発された有用な微生物です。10 EM はもともと自然農法および有機農法で使用するために開発されました。 その後、その適用範囲は徐々に拡大され、アジア諸国、ロシア、米国で一般的に使用されています11。当初、EMのソリューションは5科10属80種から開発されました。 ただし、それは非常に複雑なプロセスでした。 したがって、EM は、光合成細菌、乳酸菌、真菌、酵母、放線菌などのいくつかの主要な生物によって単純に開発されました 12。 発酵用途に関しては、通性嫌気条件で発酵するため、ビタミンなどの合成生成物が生成されません。生成されたアミノ酸と有機酸はそれぞれのタンパク質と糖に変換され、すぐに植物に吸収されます。 これにより、植物性食品の合成と使用の両方の効率が大幅に向上します。 EM はもともと自然有機農業で使用するために開発されましたが、現在では建設、医療、化粧品業界などのさまざまな分野で使用されています。14-16

材料および方法

材料

SC抽出

さまざまな濃度の抽出物の調製

微量元素分析

食品規格法により、{{0}}.0 g のサンプルを 100 度の脱イオン水で硝酸 100 mL に溶解しました。 次に、サンプル中の微量元素の量を測定し、元素分析装置 (Vario EL、ドイツ) で分析しました。

ポリフェノール含有量の測定

サンプル 1 グラムあたりのポリフェノール含有量は、Folin-Denis 法によって測定されました 18。したがって、100 μL の抽出物と 2 重量パーセントの Na2CO3 が EP チューブ内で混合されました。 EP チューブを室温で 2 分間反応させました。 その後、50% の Folin-Ciocalteu フェノール試薬をチューブに加えました。 サンプルを室温で 30 分間ボルテックスミキサーに入れ、UV-Vis 分光光度計を使用して 750 nm で分析しました。

フラボノイドの測定

抽出物 1 グラムあたりのフラボノイドの総含有量は、ジエチレングリコール比色分析によって測定されました。19 したがって、100 μL の抽出物と 100 μL の 1.0 N NaOH を EP チューブに加え、混合器を使用して混合しました。ボルテックスミキサー。 混合後、溶液を３０℃で１．０時間反応させた。 反応の収率は、UV-Vis分光光度計を用いて420nmで分析した。

フリーラジカル消去の測定

1,1-ジフェニル-2-ピクリルヒドラジル (DPPH) によるフリーラジカル消去は、改良ブロワ法によって測定されました。20 この文脈では、0.1 M Trizma 塩基 - HCl 緩衝液 (Tris)バッファー、pH 7.4) および 500 mM DPPH は、最初にメタノールを使用して調製されました。 ブチル化ヒドロキシトルエン (BHT) およびブチル化ヒドロキシアニソール (BHA) を対照実験の標準として選択しました。 次に、抽出サンプル100μLとトリス緩衝液400μLをEPチューブ内で混合し、DPPH溶液500μLを加えた。 混合物を暗室に20分間保持し、その後UV-Vis分光光度計により517nmで分析した。 対照実験では、抽出サンプルの代わりに 100 μL の BHT および BHA を添加しました。 無添加群では、抽出サンプルの代わりにトリス緩衝液100μLをEPチューブに添加した。 電子供与能力の測定は次のように示されます21。

亜硝酸塩消去活性の測定

亜硝酸塩消去活性は、Kim らによって開発された修正方法を使用して測定されました 22,23。具体的には、抽出サンプルの 0.3 mL と 1.0 の 0.1 mL です。 mM NaNO2 溶液、0.2 M クエン酸緩衝液 - HCl (pH 2.5) を混合して、最終体積 1.0 mL を得ました。 次いで、混合物を３７度で１．｛１７｝時間反応させた。 続いて、これを、0.4 mL グリース試薬 (スルファニル酸 (1.0 重量パーセント) を含む 30 パーセント CH3COOH 溶液: ナフチルアミン (1 重量パーセント)) および 3 と混合しました。 .0 mLのCH3COOH溶液（2.0重量パーセント）。 次いで、反応を室温で１５分間行った。

スーパーオキシドジスムターゼ様活性 (SODA) の測定

チロシナーゼ阻害活性の測定

チロシナーゼ阻害活性は、Masamoto らによって提示された方法の修正版によって測定されました。25 インビトロ条件でキノコのチロシナーゼ不活性化特性を測定するには、0.3 mL の 2.5 mM 3.4 ジヒドロキシフェニルアラニン (L-DOPA) )、{{10}}.{{20}}抽出サンプル 5 mL と 0.1 M リン酸緩衝液 (pH 6.8、総量 1.5 mL) をボルテックスを使用して混合しました。ミキサーに移し、25 度でプレインキュベートします。 次いで、１３８０単位・ｍＬ−１のマッシュルームチロシナーゼ（Ｓｉｇｍａ社、米国）０．０５ｍＬを加え、ボルテックスミキサーを使用して混合した。 その後、２５℃で２．０分間反応させた。

ここで、A は、UV-Vis 分光光度計により 475 nm で測定された、サンプルを含まない反応溶液の {{0}}.5 ～ 1 分の吸光度値です。 B は、紫外可視分光光度計により 475 nm で測定された、サンプルと反応溶液の 0.5 ～ 1.0 分の吸光度値です。

クリーム材料の調製

蒸留水、抽出油、および添加剤をベースにしたクリーム配合は、表 1 に記載されているように調製されました。水、添加剤、および油の重量を量り、その後水浴中で 80 度に加熱しました。 水をゆっくりと加え、ミニミキサー（DS-1800; 韓国）内で油と激しく混合した。 クリームAは抽出油を含まずに調製されました。 クリーム B、C、D、E、および F には、それぞれ 1、5、10、20、および 40 mg・mL-1 の SC 抽出物 (SCE) が含まれていました。 クリーム G、H、I、J、および K には、1、5、10、20、および 40 mg・mL-1 の SCE 発酵 (SCEF) が含まれていました。

安全性の評価

安定性の評価

結果と考察

微量元素分析

SCE の誘導結合プラズマ質量分析 (ICP) 分析の結果を表 2 に示します。これは、1.0 mg・mL-1 の SCE に 23.71、0.42、および0.03 mg・kg−1 の K、Fe、Se をそれぞれ。 SCE の量が増加すると、これらの微量元素の含有量が増加しました。 この点に関して、K の増加が支配的であり、Mn、Fe、Cu、および Zn の増加は顕著ではありませんでした。 Seの含有量はSCEの濃度に関係なく同じままでした。 これらの微量元素は、人体の内外で多くの生理活性物質の働きを助け、抗酸化作用や免疫作用など重要な役割を果たしています。

抽出物とフラボノイドおよびポリフェノールの含有量の測定

SCE の含有量は、100 g の SC 中に 27.91 重量パーセントでした。 抽出は、この手順を水とエタノール中で行った場合と同じ収率をもたらしました。 しかし、抽出物の収量は以前の論文よりも低かった26,27。これは、SCが生育した場所、培養条件、抽出方法の違いによるものです。26ポリフェノール含有量は表3に示す。1.0 mg・mL−1の通常のSCEの抽出物は、同量のポリフェノール1.53±0.02 mg・g−1のポリフェノールを提供した。 EM SCEF は、非発酵抽出物よりも高いポリフェノール含有量 (20.84±0.04 mg・g-1) を提供しました。 5、10、20、および40 mg・mL-1でのEM SCEFの抽出結果は、それぞれ25.82±0.04、29.13±0.05、42.07±0.05、および59.22±0.09 mg・g-1でした。

フリーラジカル消去の測定

体内のフリーラジカルは、脂質やタンパク質と反応して、生物学的老化を促進する可能性があります。 この現象を除去するために、多くの研究が天然物を調査してきました。31 DPPH ラジカル消去試験方法は、抗酸化物質の電子供与能力を利用した抗酸化測定のために多くの天然物で使用されています。32-34 SCE および SCE における抗酸化効果の結果EM SCEF グループを図 1 に示します。SCE の DPPH ラジカル消去能力の場合、濃度が 1.0、10 から 40 mg/mL-1 まで変化するにつれて、抗酸化能力は 37%、72%、74% に増加しました。 EM SCEF グループは、それぞれ 1.0、10、および 40 mg/mL の濃度で 63 パーセント、67 パーセント、および 79 パーセントの抗酸化能力を示しました。 EM SCEFグループでは、濃度による抗酸化能力のわずかな変化は、EM SCEFと微生物との反応による抗酸化物質の生成によるものと考えられます。 SC の抗酸化能力は、BHT (89 パーセント) や BHA (88 パーセント) などのいくつかのよく知られた抗酸化物質と比較されました。 SC のフリーラジカル消去能力は、SC のフリーラジカル消去能力とそれほど変わらないことが判明しました。 さらに、SCEF は、低濃度でも SCE よりも高いラジカル消去能力を持っています。 これは、SC活性液とEM活性液が反応することにより、微生物が抗酸化能を有する生理活性物質を生成したことを意味します。 したがって、SCE よりも少ない量の EM SCEF で、高レベルの抗酸化物質を含む材料を製造することが可能です。 これにより、化粧品製造における配合量の問題を解決できると同時に、植物由来の天然物質を配合した化粧品の機能面も向上できると考えました。

亜硝酸塩消去活性の測定

亜硝酸塩は第二級アミン（アンモニアの2つの水素原子が炭化水素官能基Rで置換された化合物）と反応し、悪名高い発がん物質であるニトロソアミンを生成します。 言い換えれば、亜硝酸塩はニトロソアミンの前駆体として機能します。 したがって、硝酸塩を除去することでニトロソアミンの生成を効果的に抑制できます35。 分析サンプルと亜硝酸塩の反応性が高い場合、亜硝酸塩はイオン化した状態で反応するため除去され、ニトロソアミンの生成が抑制されます。 これは、イオンや電子の形で存在する他の物質にも同様に当てはまり、サンプルの反応性が高いということは、亜硝酸消去作用や抗酸化作用が高いことと同等、または高いと評価されます。 サンプル中の総フェノール化合物の量が多いほど、より低い pH 範囲で亜硝酸塩消去反応がより強力に起こり、逆に、高い pH 範囲では消去効果が減少します。36 表 5 は、亜硝酸塩消去活性が高いことを示しています。 SCE の割合は 1 mg/mL-1 で 15 パーセント、10 mg/mL-1 で 40 パーセント、40 mg/mL-1 で 89 パーセントでした。 一方、SCEFは、1 mg・mL-1で51パーセント、10 mg・mL-1で69パーセント、40 mg・mL-1で98パーセントの亜硝酸塩消去活性を示しました。 このテストから、両方のグループの濃度が増加するにつれて、除去活性も増加することが観察されました。 さらに、SCEF は亜硝酸塩消去活性において SC よりも優れており、これは他の実験結果と同様です。 濃度 1.0 mg・mL-1 では、消去活性の差は 40 mg・mL-1 であり、異なる濃度の中で最も大きく、濃度が増加するにつれてその差は狭まりました。 今回の比較実験により、非常に良好と評価されたSCの亜硝酸消去効果がEM発酵プロセスによりさらに向上しました。 この現象は、より多くの生物学的活性物質を生成する発酵プロセスに起因すると考えられます。これにより、ニトロソアミン生成の阻害が増加するだけでなく、粗植物成分として多くのフェノールも効果的な亜硝酸塩除去反応に寄与します。 。

ソーダ測定

SOD は、解毒し、O2、H2O2、過酸化物、OH ラジカルなどの毒性を抑制できる酵素的抗酸化物質です 37,38。SODA は、SCE (または SCEF) 濃度 1.0、1 について表 6 に示されています。 0、および 40 mg・mL−1。 濃度が1から40 mg・mL-1に増加した場合、SCEグループのSODAは6パーセント、18パーセント、41パーセントでしたが、EM SCEFグループのSODAは28パーセント、32パーセント、43パーセントでした。 2 つのグループの活性の差を分析するために、SODA 値の差は、SCE および SCEF の低濃度 (1.0 mg/mL-1) で高く、高濃度 (40 mg/mL-1) で小さくなりました。 このテストでは、両グループの SODA レベルが顕著でした 26,39。したがって、SCE と SCEF は両方とも、自然由来の高い抗酸化能力を持っていると判断できます。

チロシナーゼ阻害活性の測定

チロシナーゼ阻害活性のメカニズムは化粧品業界では非常に重要であり、美白効果の尺度として使用できます。40 SCE グループでは、チロシナーゼ阻害活性が 35 パーセントから 36 パーセント、37 パーセント、38 パーセント、そして 30 パーセントに増加しました。抽出物の濃度が増加すると 39 パーセントになりました (表 7)。 EM SCEF グループでは、濃度が増加するとチロシナーゼ阻害活性が 38 パーセントから 39 パーセント、40 パーセント、41 パーセント、および 42 パーセントに増加しました。 EM SCEFは通常の抽出物よりもチロシナーゼ阻害活性が高かったが、大きな差はなかった。 しかし、どちらのエキスも化粧品に使用すると美白効果があると考えられています41。

安全性評価

異なる濃度の SCE と EM SCEF を含む化粧品の配合、すなわち {{0}}.0、1.0、5.0、1{{ 25}}、20、40 mg・mL−1を図2に示します。製造された化粧品は、油相に水相を加えてW/O剤形に形成されました。 人間の皮膚表面の pH 値は一般に 4.5 ～ 6.5 で、弱酸性または中性になります 42。pH がアルカリ性になると皮膚の抵抗力が低下し、細菌の繁殖を招き、最終的には皮膚疾患を引き起こします。 したがって、中性または弱酸性の化粧品を使用することを強くお勧めします。 保管時間による pH 値の変化を図 3 に示します。SCE を含まないクリームを使用すると、pH は初期値の 6.25 と比較して、60 日後には 6.23 にわずかに増加しました。 SCE濃度が1.0、5.0、10、20、および40 mg・mL-1のクリーム製品の初期pH値は、それぞれ5.53、3.87、3.43、3.15、および3.03でした。 これらの pH 値は 60 日後も変化しませんでした。 EM SCEF濃度が1.0、5.0、10、20、および40 mg・mL-1のEM SCEFベースのクリームの初期pH値は、それぞれ4.12、3.46、3.37、3.15、および2.98でした。 60日後も同様のpH値が観察されました。 これらの結果は、どちらのグループでも pH 変化に有意な差はなく、抽出物の濃度が増加すると pH 値が低下することを意味します。 これらの結果は、これらの化粧品を使用しても安全性に問題がないことを意味します。

化粧品の安定性に対する温度の影響

結論

了承

開示

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