3.3. 体外研究

3.3.1. ヒト角化細胞における細胞毒性の評価

関連する研究によると、カンクン「寿命を延ばす奇跡のハーブ」として知られる一般的なハーブです。 その主成分は、シスタノシドなど様々な効果があります。抗酸化物質, 抗炎症薬、と免疫機能の促進。 シスタンシュとのメカニズム美白抗酸化作用にありますシスタンケ配糖体。 人間の皮膚のメラニンは、次の物質によって触媒されるチロシンの酸化によって生成されます。チロシナーゼ、酸化反応には酸素の関与が必要なため、体内の酸素フリーラジカルはメラニン生成に影響を与える重要な要素になります。 シスタンケには抗酸化物質であるシスタノシドが含まれており、体内のフリーラジカルの生成を減らすことができます。メラニンの生成を抑制する.

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MTT アッセイは、PPEE、PPEE-SLN、および KDPAG がヒトケラチノサイトを使用して細胞生存率に影響を与えるかどうかをテストするために使用されました。 0.{{10}}625–1mg/mL の異なる濃度の PPEE、PPEE-SLN、無抽出 SLN、および KDPAG をヒト角化細胞細胞株とともに 24 時間インキュベートしました(図2)。 24 時間にわたって、0.0625 ～ 0.5 mg/mL の濃度範囲ではヒトケラチノサイトの細胞生存率の有意な低下は観察されませんでした (p < 0.05)。 しかし、1 mg/mL の PPEE、PPEE-SLNS、Extract-free-SLN、および KDPAG で 24 時間処理した後、ヒト角化細胞の細胞生存率の大幅な低下が観察され、93 パーセント、90 パーセント、95 パーセント、およびそれぞれ、細胞の 89 パーセントが生存しました。 したがって、0.5 mg/mL 以下の PPEE、PPEE-SLN、および KDPAG の濃度がその後の研究に使用されました。

抗酸化活性は、DPPH、ABTS システム、およびβ-カロテン漂白テストを使用して評価されました。 テストしたすべてのサンプルで、濃度に依存する傾向が見つかりました。 DPPH アッセイでは、KDPAG が最も高い除去活性を示し、次に PPEE-SLN、次に PPEE でした。 IC50 値は、ビタミン C と比較して、それぞれ 6.35 ± 3.4{{30}} μg/mL、8.79 ± 2.70 μg/mL、10.5 ± 1.81 μg/mL でした。 IC50 が 2 ± 0.01 µg/mL の標準として使用されます。 この傾向は ABTS ラジカルに対しても観察され、標準 Vit と比較した値はそれぞれ 3.91 ± 1.43 μg/mL、4.29 ± 1.12 μg/mL、および 6.10 ± 0.62 μg/mL でした。 C、IC50 は 0.96 ± 0.02 μg/mL で、DPPH アッセイの結果が確認されました。 PP 葉抽出物およびその画分に対するこのような除去活性は、両方のアッセイですでに指摘されていますが、得られた値よりも高い値が示されています [14,49]。 これらの発見は、抗酸化物質の活性が環境条件、植物の部位、成熟段階、収穫方法、抽出に使用される溶媒の影響を受けることを示唆しています。 両方のアッセイにおいて、PP 葉抽出物が種子、皮、果肉、果実抽出物よりも優れた抗酸化能力を有することが判明したため、これらの結果は文献と一致しています [14、20、50]。 また、PP 葉に多くのフラボノイド含有量が報告されており、特にフラボノールが抗酸化活性に関与していると考えられています [20]。

PPEE、PPEE-SLN、および KDPAG は、抗エラスターゼ、抗コラゲナーゼ、および抗チロシナーゼ活性を示し、300 μg/mL で高い阻害率と、それぞれの陽性対照と比較して比較的低い IC50 値を示しました (表 3)。

3.4. PPEE-SLN および PPEE-SLN クリームの評価

調製された PPEE-SLN 配合物は、170 nm ～ 176 nm の粒子サイズを示しました。 これは、固体脂質ナノ粒子システムに界面活性剤を添加すると、界面膜が凝縮して安定化することを示しています。 配合物は多分散性指数の低い値 (0.23{{10}} –0.450) を示し、ZP が -21.8 ～ -22.0 の粒径分布の均一性を示し、高い安定性の製品を保証します (図 3a、 b）。 記録された 70 ～ 77 パーセントの PPEE-SLN カプセル化効率は、ビーズの表面細孔を閉じることができる脂質の種類 (モノステアリン酸グリセロール) によるものです。 TEM および SEM 顕微鏡写真により、粒度分布が狭く、滑らかで球形で均質なナノベシクルのナノ粒子の形成が明らかになりました (図 3c、d)。 FTIRでは、PPEEは芳香族第二級アミンNH伸縮に対応する3352cm-1、芳香族CH伸縮に対応する2974.23cm-1、C=O伸縮に対応する1735.93cm-1、および1257.59cm-1に特徴的なピークを示します。 1 (図 4) に示されている CN 脂肪族アミンの伸縮に対応します。 PPEE と脂質の物理的混合物の FTIR スペクトルは、3348.42 cm-1 で伸縮する芳香族第二級アミン NH、1735.93 cm-1 で伸縮する C=O、および 1257.59 cm-1 で伸縮する CN 脂肪族アミンによる同じ特徴的なピークを示します。 −1。 したがって、PPEEのスペクトルに存在するすべての特徴的なピークが、PPEE-SLNの物理的混合物のスペクトルのほぼ同じ領域で複製されたことは明らかであり、薬物と脂質の間に有意な相互作用がないことを示しています。 PPEE-SLN クリーム (2 パーセントおよび 5 パーセント) は黄色がかっており、滑らかな外観、滑らかな表面、および適切な pH 範囲が 5 ～ 5.8 ± 0.15 であり、これにより製剤と皮膚分泌物との適合性が確認され、人間の皮膚に対して刺激性がありません。赤みまたは浮腫の存在、水で容易に洗浄可能、良好な展延性値は 10 ～ 13 g cm/s の範囲、粘度は 10 rpm で 500 ± 6.24 ～ 600 ± 7.52 CPS の範囲、相分離の証拠はなく、良好な粘稠度勉強期間中。 細菌とカビの総量は 100 CFU/mL 未満であり、スキンケア製品の許容範囲内でした。 2 パーセントのクリームは、最初の 1 時間で約 15.21 ± 1.44 パーセントの PPEE-SLN の初期バースト放出を示しました。 その後、クリームに閉じ込められた PPEE-SLN が徐々に放出されました。 それぞれ 12 時間後に 60.32 ± 2.54 パーセント、ほぼ 24 時間後に 62 ± 1.44 パーセントが放出されました。 一方、5 パーセントのクリームは、最初の 1 時間で約 20.21 ± 2.70 パーセントの PPEE-SLN の初期バースト放出を示しました。 その後、クリームに捕捉された PPEE-SLN は徐々に放出され、それぞれ 12 時間後に 77.12 ± 2.88 パーセント、ほぼ 24 時間後に 80 ± 2.91 パーセントが放出されました。 両方のクリーム処方は、24 時間にわたる PPEE の持続放出を示しました (図 5)。 さらに、私たちの調査研究では、クリームの配合 (2 パーセントと 5 パーセント) は 2 か月間安定であることが示されました。

3.5. 生体内研究

クリームによる 20 日間の治療後、抗しわスコアが評価されました。 PPEE-SLNs クリームの抗しわ効果は用量依存性であり、5% PPEE-SLNs クリーム群 (G5) で観察された効果は、市場製品 (図 6) と比べて、標準的な抗しわクリームと比較して、大幅に優れた抗しわスコアを示しました。 写真を図 7 に示します。グループ (G3 ～ G5) は、非常に滑らかで改善された皮膚表面を示しました。 G1 動物には皮膚の変化はありませんでした。 対照的に、G2 では太くて深いシワが見られました。

ＵＶ照射により弾性線維は正常群に比べて有意に減少した。 未治療マウスと治療マウスの皮膚画像を顕微鏡で観察しました (図 8)。 Ｇ１は、真皮および表皮の両方の皮膚の厚さが正常であり、断片化のない正常な弾性繊維の厚さに加えて、線維芽細胞を含んでいた。 G1 と比較して、UV 照射したマウス (G2) の皮膚では、UV 照射により表皮と真皮の両方の肥厚が顕著に増加し、線維芽細胞と弾性線維の形成が減少しました。 5 パーセント (G5) および 2 パーセント (G4) PPEE SLN クリームの局所塗布は、市販製品を受け取った G3 のそれと同等でした。 すべての G4 と G5 は、真皮と表皮の厚さを大幅に減少させ、線維芽細胞の数がコラーゲン線維の含有量を決定するため、線維芽細胞の含有量を増加させます。これにより、損傷した皮膚の修復を助け、皮膚の老化の影響を軽減します（図 9a、b）。 。 また、両グループとも紫外線照射による弾性線維の劣化に対する予防効果を示したので、いずれの用量の PPEE-SLNs クリームによる治療も紫​​外線照射に対する保護効果を示したと結論付けることができます。

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