ヘスペリジンによって媒介される抗ウイルス性酸化亜鉛ナノ粒子と、抗SARS-CoVとしての抗ウイルス性フェノール剤間のインシリコ比較研究-2

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概要コロナウイルス（COVID -19）を引き起こした重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2（SARS-CoV -2）は、世界中で69,613,607百万以上の感染と1,582,966以上の死亡の原因となっているウイルスです。 すべての治療手段とプロトコルは、支持的であり、治癒的ではないと見なされました。 この現在のコロナウイルスのパンデミックの間、予防、治療、および回復を支援するための医薬品または従来の補完統合医療を探すことは有利でした。 これらの植物医薬品および栄養補助食品は、より経済的で、入手可能で、安全であり、副作用が少ない可能性があります。 これは、10個のフェノールのinsilico比較研究です。抗ウィルス薬SARS-CoV -2に対する薬剤、および天然資源からの最も活性な代謝物の分離。 次に、これらの代謝物を還元剤として使用して、酸化亜鉛ナノ粒子（ZnO NP）も調製しました。 テストされたすべての化合物は、予測された抗SARS-CoV-2活性を示しました。ヘスペリジン最高のドッキングスコアを示しました。これにより、オレンジの皮からそれを分離し、従来の分光分析によってその構造を確認しました。 さらに、ヘスペリジン酸化亜鉛ナノ粒子の合成は、UV、IR、XRD、およびTEMによって特徴づけられました。 RNAウイルスの例として、ヘスペリジンおよびZnONPのinvitro抗ウイルス活性をA型肝炎ウイルスに対して評価しました。 ただし、ZnO NPとヘスペリジンはHAVに対して抗ウイルス活性を示しましたが、ZnONPはより高い活性を示しました。ヘスペリジン。 したがって、ヘスペリジンとその媒介ZnOナノ粒子は積極的な抗ウイルス剤であり、SARS-CoV-2に対するさらなる研究を潜在的な治療法として使用する必要があります。

キーワード：SARS-CoV-2栄養補助食品分子ドッキング酸化亜鉛ナノ粒子ヘスペリジン

1.はじめに

現在のCOVID-19のパンデミックは、これまでに世界中で6,900万人以上の感染と150万人以上の死亡、230万人の感染と55人以上のアフリカでの000人の死亡、および119人以上の{{9} }エジプトでの感染と6000人以上の死亡[1]。 SARS-CoV -2に感染したほとんどの人の症状には、医師の診察なしに回復する可能性のある軽度から中等度の呼吸器疾患が含まれます。 ただし、心血管疾患、糖尿病、慢性呼吸器疾患、または癌などの慢性疾患を持つ個人は、急性呼吸器症状を発症するリスクが高くなります。 COVID -19感染は、社会的距離を維持し、手を洗うか、アルコール滅菌を使用し、顔に触れないことによって防止されます。 感染した個人が咳やくしゃみをしたときに、唾液の飛沫を介して人の鼻から伝染する場所[1]。 すべての対策とプロトコルは、支援的であるだけで、治癒的ではないと見なされました。 しかし、潜在的な薬を評価する多くの現在の臨床試験があります[1]。 COVID -19が世界的大流行であると主張して以来、予防、治療、回復を支援するために、医薬品または従来の補完的で統合的な薬を探す必要がありました[2]。

天然物は、さまざまな病気の予防と治療に使用できる化合物の未開発の供給源です。 さらに、天然化合物は、いくつかの病気に対してより安価で安全な薬剤候補として役立つことが多く、多くの栄養補助食品化合物が抗ウイルス活性[3]。 過去10年間で、新しい数抗ウイルス薬自然源から抽出されたものは大幅に増加しています。 天然物は、直接的または間接的に抗ウイルス薬の発見を支援します[4]。

したがって、分子ドッキングなどの計算スクリーニング法による天然化合物ライブラリーのスクリーニングは、医薬品開発の時間と費用の両方を節約できます[3]。

一方、Znic（Zn）含有化合物は抗ウイルス特性ウイルスの付着、ウイルス感染、脱皮などの物理的プロセスに応じて、多くのウイルスに向けて。 ウイルスプロテアーゼおよびポリメラーゼの阻害に加えて[5]。 一般的に、亜鉛は、筋肉、脳、皮膚、骨などの私たちの体の組織に見られる必須元素です。 また、代謝や核酸およびタンパク質の生合成に関与するさまざまな酵素システムの必須コンポーネントでもあります[5]。

ZnO NPは、亜鉛自体よりも体に吸収されやすいことに注意してください。 ZnO NPは現在、食品業界で添加物や包装に利用されています。 さらに、ZnOは米国食品医薬品局によって安全な物質として分類されました。 したがって、ZnO NPは、生物医学的用途での使用に魅力的です。 ZnO NPは、経済的コストが低く、毒性が低いという特徴があります。したがって、ZnO NPは、抗菌、抗癌、抗糖尿病、抗炎症、薬物送達、および創傷治癒などの生物医学的用途に広く使用できます[6]。

亜鉛含有化合物は、抗SARS-CoV -2活性を示すことが最近報告されました[7]したがって、亜鉛含有薬は、COVID-19保護プロトコルで一般的に処方されています。 したがって、ZnONPのグリーン合成には特別な注意が必要です。

この研究では、一般的に使用される薬用植物および食品（栄養補助食品）からの多くの植物医薬品フェノール化合物が、SARS CoV -2メインプロテアーゼ（Mpro）、および実験的に最高のドッキングスコア化合物に対する抗ウイルス活性を調査するためにインシリコ分子研究を受けます媒介されたZnOナノ粒子の横で、SARS- COV - 2に類似したRNAウイルスであるA型肝炎ウイルス（HAV）に対してテストされます。

2。材料と方法

2.1。 分子ドッキング

主なプロテアーゼ（Mpro）は、コロナウイルスゲノムによってコードされる重要な酵素であり、ウイルスの複製と転写プロセスに不可欠な役割を果たしており、SARS-CoV-2の適切な創薬ターゲットとなっています。 ルチン、コリラギン、ジオスミン、ミリセチン-3- O-キシロシル-（1→2）-ラムノシド、エピガロカテキン-3- O-ガレートなどの選択されたポリフェノール化合物の阻害メカニズムを明らかにするには、ヘスペリジン、リオニレシノール、ミリセチン、ナリンゲニン、ケルセチン3-O-グルクロニドとSARS-CoV-2 Mpro（6lu7）[8]の結晶構造（2.1Aᵒの分解能で使用）。 これは、インシリコ分子ドッキングに使用されました。 このタンパク質は、プロトマーAおよびBとして知られる2つのポリペプチドで構成されています。この二量体は、2つの軸に沿って結晶学的対称性を持っています。 3つのドメインが含まれています。 ドメインI（残基8〜101）、逆平行シート構造のドメインII（残基102〜184）、およびドメインIII（残基201〜303）には、逆平行球状クラスターとして配置された5つのヘリックスがあります。 ドメインIIIが長いループ領域（残基185〜200）によってドメインIIに接続されている場合。 SARS-CoV -2、Mproは、Cys-His結合触媒活性を持ち、基質結合部位は、図1のようにドメインIとドメインIIの間の裂け目に位置しています[8]。 、分子ドッキング手順はスイスドックサービスによって実行されました[9]。 ブラインドドッキングを実行するEADockDSSを使用して、そのCHARMMエネルギーをグリッド上で評価し、最も好ましいエネルギーをFACTSで推定してクラスター化しました。 これらのクラスターは、文献[10]で報告されているように、キメラを使用して視覚化および解釈できます。

2.2。 植物材料、抽出、および分離

オレンジの皮（500 g）は、地元のジュース工場から購入しました。 オレンジの皮（200 g）を2Lの熱蒸留水で使い尽くすまで抽出しました。 抽出物を濾過し、蒸発させて、真空下でより濃縮した。 水抽出物をCH2Cl2、続いてブタノールで分配した。 ブタノールサブフラクションを、BAWを溶離液として使用して3 MMのワットマン濾紙シートに適用し[12、11]、紫外線（UV）光の下で主要な濃い紫色のバンドを生成しました。 暗紫色のバンドを分離し、メタノールで浸軟させた後、回転式エバポレーターを使用して真空下で蒸発させた。 乾燥した材料を、溶離液としてEtOH / H2O（1：1）を使用してSephadex LH -20カラムにアプライし、120mgのヘスペリジン.

2.3。 核磁気共鳴（NMR）

1H-核磁気共鳴（NMR）スペクトルは、Bruker Avance III、400 MHz NMR分光計、および13CNMRでは100MHzで記録されました。 1H化学シフト（δ）はTMSと比較してppmで測定され、13C-NMR化学シフトはジメチルスルホキシド-d6になり、39.5を加えることでTMSスケールに変換されました。

2.4。 酸化亜鉛ナノ粒子（ZnO NP）の合成

500mgの酢酸亜鉛を50mLの再蒸留水に溶解し、沸騰水浴で20分間加熱します。 次に、5滴の水酸化アンモニウムを反応に加えてpHを12に上げ、そこでZnONPの沈殿物が形成された。 酢酸亜鉛をＺｎＯ ＮＰに完全に還元するために、混合物を３０分間放置した。 形成された沈殿物を8000rpmで遠心分離し、続いて再蒸留水で2回洗浄し、エタノールで2回洗浄して、凍結乾燥時にZnONPの白色ペレットを得た。

2.5。 金属ナノ粒子の特性評価

2.5.1。 UV-visスペクトル分析

ＺｎＯ ＮＰ調製物は、ＵＶ分光光度計、島津、ＵＶ -1601（島津製作所、日本）を使用して調べられた。 UVスペクトルは200〜400nmで記録されました。

2.5.2。 FT-IR分析

合成された酸化亜鉛ナノ粒子とヘスペリジン化合物の官能基は、FTIR 6100分光計（日本分光）を使用して4000〜400cm-1の範囲で特性評価されました。

2.5.3。 透過型電子顕微鏡（TEM）

ヘスペリジンによって媒介されるZnONPの形態と粒子サイズは、TEM（JEOL-JEM -1011、日本）によって決定されました。 ナノ粒子懸濁液の液滴をカーボンコーティングされた銅グリッド上に置き、TEM画像を記録する前に溶媒を室温で蒸発させた。

2.5.4。 X線回折（XRD）

波長1d706のCuK放射線を使用してPANLYTICALX線回折計で記録されたZnONPのX線回折パターン。 =0。スキャン範囲21d703で1541nm;=20 −70∘。

2.6。 抗ウイルス活性の評価

抗ウイルススクリーニングは、真菌学およびバイオテクノロジー地域センター（RCMB、アルアズハル大学、カイロ、エジプト）でプラーク阻害アッセイを使用して実施されました。

2.6.1。 哺乳類細胞株

アフリカングリーンモンキー腎臓に由来するベロ細胞は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC、マナッサス、バージニア州、米国）から入手した。

Vero細胞は、10％の熱不活化ウシ胎児血清（FBS）、HEPESバッファー、1％のL-グルタミン、および50 ug / mLのゲンタマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）で増殖させました。 すべての細胞は、5％CO2の加湿雰囲気で37°Cで培養され、7日間2回継代培養されました[14]。

2.6.2。 細胞毒性評価

ヘスペリジンとZnONPの24時間の移植後に追加されました。 テストしたサンプルの連続2倍希釈液（3000 ug/mLから2ug/ mLで開始）を、96-ウェルの平底マイクロタイタープレート（Falcon、Jersey、NJ、USA）に分注したコンフルエントな細胞単層に添加しました。 ）マルチチャンネルピペットを使用します。 マイクロタイタープレートは、5％CO2の加湿インキュベーター内で37°Cで2日間インキュベートされました。 調査したサンプルの各濃度に3つのウェルを使用しました。 対照細胞は、試験サンプルなしで、DMSOありまたはなしでインキュベートされた。

インキュベーション期間後、生細胞収量はMTT比色分析によって決定されました[15]。 生存細胞と試験サンプルの濃度との関係をプロットして、特定の化合物で処理した後のベロ細胞株の生存曲線を取得しました。 インタクトな細胞の50％に毒性作用を引き起こすのに必要な濃度である50％細胞毒性濃度（CC50）は、GraphPad Prismソフトウェア（San Diego、CA. USA）を使用して、各濃度の用量反応曲線のグラフィックプロットから推定されました。 各ヘスペリジンおよびZnONPの最大非毒性濃度[MNTC]が決定され、さらなる生物学的研究に使用されました。

2.6.3。 ウイルス増殖

HAVの細胞病原性HAVHM175株（ATCC VR -1402）は、コンフルエントなVero細胞で増殖およびアッセイされました[16]。 感染性ウイルスは、Spearman-Karber法を使用して、希釈ごとに8ウェル、ウェルごとに20μLの接種物で50％の組織培養感染量を決定することによって数えられました[17]。

3。結果と考察

10種類の栄養補助食品フェノール化合物は、天然の栄養食品源に由来する医薬品剤形としての入手可能性と普及度に応じて選択されました。

これらの栄養補助食品は、ジオスミン、ルチン、ナリンゲニン、ケルセチン3-オグルコウロニド、ミリセチン3- O-キシロシル-（1→2）-ラムノシド、ミリセチン、エピガロカテキン-3- O-ガレート、コリラギン、およびリオニレシノール。 ヘスペリジン、ジオスミン、およびルチンは、さまざまな商品名で医薬品店で広く入手可能であり、抗ウイルス特性を有すると報告されているさまざまな天然栄養食品に由来する可能性があります。たとえば、柑橘類の皮からのヘスペリジンは、抗ウイルス活性[18]。 インシリコスクリーニングに基づいて、ヘスペリジンは、SARS-CoV -2スパイクとACE2受容体の間の相互作用部位を標的とし、ウイルスのヒト肺細胞への侵入を阻止すると予測されました。 したがって、ヘスペリジンはCOVID-19[19]に対する有望な予防薬である可能性があります。

さらに、柑橘類の皮からのナリンゲニンはジカウイルスに対する抗ウイルス剤として報告されており[20]、ルチン[21]は抗ウイルス剤として有意な結果を示しました[19]。 緑茶のエピガロカテキン-3-O-ガレートは抗ウイルス効果多くのDNAおよびRNAウイルスに対して[22]。 コリラギンは、HCVの複製を阻害し、酸化ストレスを調節することにより、肝臓の損傷を防ぎます[23]。 ミリセチンとそのグリコシル化誘導体の抗HIV活性が報告されています[24]。 さらに、いくつかのリグナンが持っていると報告されています抗ウィルス薬プロパティ[25]。

3.1。 分子ドッキング

現在の研究では、主要なプロテアーゼCOVID-19の阻害メカニズムに関する実験結果を解釈して裏付ける試みがなされました。 スイスドックサーバーを使用して10種類のポリフェノール化合物をドッキングし、受容体ベースのアプローチをこれらのポリフェノールに適用しました。 ハート型のCovid-19プロテアーゼ6lu7の結晶構造で、同じサブユニットの2つの二量体と2つの活性部位があります。 広域スペクトル阻害剤は、PDBエントリー4yoiのように、始祖コウモリコロナウイルスの活性部位His41およびCys148を標的にする必要があります。 この研究では、分子ドッキングによってフェノール化合物の結晶構造6lu7への結合モードを解明しました（図2）。 ドッキング研究により、ヘスペリジンは、表1に示すように、TYR 118とパイスタッキング相互作用を形成しながら、THR 25、LEU 27、His 41、およびGly143残基と静電相互作用を形成できることが確認されました。

表1に示すように、ほとんどのポリフェノール化合物は、ドメインII、III（残基185〜200）とドメインIの間の裂け目領域で阻害活性を示しました。表1に示すように、ポリフェノール化合物は結合エネルギーに従ってリストされています。 RMSDとネイティブバインディングモード（完全な適合性（青、左のX軸））およびエネルギー（単純な適合性（赤、右のy軸））との関係を図A（供給ファイル）に示しました。 。 ヘスペリジンのドッキングモードは、（SARS-CoV -2 Mproの場合は図B、HAV 3Cプロテイナーゼ[26]の場合は図C、2HAL結晶構造）、ミリセチン（図D、1,2）、ジオスミンに示されています。 （図E 1,2）、エピガロカテキン-3- O-ガレート（図F1,2）、ルチン（図G1,2）、ケルセチン3- O-グルクロニド（図H 1,2）、補足ファイルのコリラギン（図I1、2）、ミリセチン（図J1、2）、ナリンゲニン（図L1、2）およびリオニレシノール（図M1、2）。

3.2。 ヘスペリジンの単離と同定

ヘスペリジンが最高のドッキングスコアを示したため、ここでは、食品廃棄物（オレンジの皮）からヘスペリジンを分離し、HAV（RNAウイルスの1つ）に対する抗ウイルス活性を評価しました。

オレンジの皮の水性抽出物からのブタノール画分を、溶離液としてBAWを使用してワットマン濾紙シートに適用し、それにより、分取ペーパークロマトグラフィーでフラボノイドの性質の主要な暗紫色のバンドが観察された。 主要な濃い紫色のバンドをメタノールで溶出すると、純粋な化合物が単離され、その同一性が1 H、13Cによってヘスペリジンであることが確認されました[27]。1H NMR（4 00 MHz、DMSO-d6 δ5.50（dd、J=12。2、3.4 Hz、1H、H -2）、2.78（dd、J=3。24Hz＆17.16、1H、H {{22} } ax）、3.26（dd、J=17。16、8.22 Hz、1H、H -3 eq）、6.14（brs、1H、H -6）、6.12（brs、1H 、H -8）、4.97（d、J=7。2Hz、1H、H -1''）、4.53（s、1H、H -1'' ' ）、1.09（d、J=6。2、3H、ラムノースのCH3）。13C NMR（101 MHz、DMSO-d6）δ78.89（C -2）、42.74（C {{64} }）、197.48（C -4）、163.50（C -5）、96.85（C -6）、165.60（C -7）、96.00（C -8 }）、162.96（C -9）、103.79（C -10）、131.35（C -1'）、118.42（C -2'）、146.92（C {{ 94}}'）、148.43（C -4'）、112.50（C -5'）、114.60（C -6'）、56.15（O-Me）、99.91（C { {109}}''）、73.45（C -2''）、76.73（C -3''）、70.06（C -4''）、75.98（C {{121 }}''）、66.50（C -6''）、101.06（C -1'''）、70.73（C -2'''）、71.17（C {{133 }}'''）、 72.53（C -4'''）、68.78（C -5'''）、18.29（ラムノースのCH3; C -6''''）。

3.3。 ZnOナノ粒子の形成

80°Cに加熱された水浴中のヘスペリジン溶液に酢酸亜鉛溶液を添加した後、数滴のアンモニアを添加すると、ZnONPが沈殿しました[13]。

3.3.1。 UV分析

ヘスペリジンを介して合成されたZnONPの最大吸収ピークは、335 nmにピークを示し（図3a）、ZnONPの形成を確認しました[28]。 ナノスケールのZnOは、標準のZnO吸収パターンと比較して波長が短く、材料酸化物は波長が短い傾向があり、ナノスケール材料は波長が短い傾向があるという報告と一致しています[29]。

3.3.2。 ZnONPとヘスペリジンのFT-IR分析

調製したZnONPとヘスペリジンのFT-IRスペクトル（図3b）は、400〜4000 cm-1のスペクトル幅範囲で収集されました。ここで、3546.04、3478.29、および3421.80 cm付近の水のO–Hグループストレッチのピークが示されました。 − 1はヘスペリジンのO–Hグループを表し、ZnONPの場合は約3382.99cm-1を表します。 芳香族部分は、2918.50cm-1で伸びる炭素二重結合によって確認されました。 アルコール性–CO–Hの曲げ振動は、1096.12 cm-1にピークが存在することで確認されました。ZnONPの伸縮モードの特徴的なバンドは、542.9および891.2cm-1に割り当てられています[13,30]。

3.3.3。TEM分析

TEM分析は、低解像度および高解像度の透過型電子顕微鏡で実行され、粒子サイズが20〜30nmの六角形のZnONPの形成を示しました（図4）。

3.3.4。 XRD分析

ZnO NPの発生とその構造的特徴の調査は、X線回折（XRD）によって確認されました（図5）。フラボノイドヘスペリジンによって媒介されるZnO NPは、31.618◦、34.334◦、36.161◦、47.504で識別される2θ値のピークを示しました。 ◦、56.440◦、62.727◦、66.245◦、67。864◦、および68.925◦（1 00）、（002）、（101）、（102）、（110）、 （103）、（200）、（112）および（201）。 これらのピークは、データカードのピークと一致していました（00- 003-0888）。

ＺｎＯ ＮＰの結晶サイズは２７．７３ｎｍであると計算された。 このデータは、TEM測定と非常によく似ています。 結晶サイズを計算するには、Scherrerの式を適用します

結晶サイズ{{0}}（0.9xλ）/（dcosθ）

Θ= 2θ/2、d =ピークの半値全幅（Rad）、λ=0 .154060 nm

3.4。 抗ウイルス活性

3.4.1。 ベロ細胞に対する細胞毒性の評価

ヘスペリジンとZnONPの2つのサンプルは、それぞれ50％の細胞毒性濃度（CC50）= 620.8±34.6および243.7±12.7ug/mLを示しました。 図1と図2に示すように。 K.＆L。、suppl。 ファイルと値はそれぞれ表CとDにリストされています。 次に、これらの化合物をテストしました抗ウイルス効果図M.（補足ファイル）に示されているプラ​​ークアッセイ法を使用した最大非毒性濃度（MNTC）でのHAVに対する。

3.4.2。 抗HAV活性

フラボノイドは、invivoとinvitroの両方で抗ウイルス活性を持っていることが報告されています[31]。 一部のフラボノイドのHIV（RNAウイルスでもある）に対する作用機序は、サイトカインによって媒介されるタンパク質のリン酸化の阻害によるものであることが報告されています。 サイトカインによって媒介されるリン酸化シグナル伝達は、COVID -19感染で増加し、多数の細胞骨格タンパク質のリン酸化につながることにも注意する必要があります。 したがって、ヘスペリジンを含むフラボノイドはタンパク質のリン酸化を阻害する可能性があり、それが次に強力な抗ウイルス活性と他の細胞の感染予防につながります[32]。 ZnONPは抗ウイルス活性を持っていることも報告されています[32,33]。

Zn含有化合物は、ウイルスの不活化、ウイルスの脱コーティングの阻害、ウイルスのゲノム転写、ウイルスのタンパク質翻訳、ポリタンパク質のプロセシングなど、ウイルス複製サイクルのさまざまな段階に影響を与えると報告されています。 ウイルスの種類と亜鉛含有化合物の濃度に依存する活性にも注意する必要があります[34]。

私たちの研究では、ベロ細胞のコンフルエントな単層を、HAVウイルスの固定希釈液に感染させました。 インキュベーション後、接種材料を取り除き、1.5パーセントのカルボキシメチルセルロースを含む無血清MEMと交換しました。 次に、細胞をインキュベートして、ウイルスがプラークを形成できるようにした。 細胞を25°Cで2時間固定し、ホルムアルデヒドを5％の濃度になるまで培地に直接添加しました。 固定した細胞を水で十分に洗浄した後、1パーセントのクリスタルバイオレットと10パーセントのエタノールを含む溶液で30分間染色しました。 水ですすいだ後、プラークの数を数え、ウイルス力価（数）を計算した。 最大非細胞毒性濃度（MNCC）でのHAVに対する2つのテスト済みサンプル、ヘスペリジンおよびZnO NPの抗ウイルス効果を表B（補足ファイル）に示します。 酸化亜鉛ナノ粒子は、表面積が大きく、粒子サイズが小さいため、比較的低濃度でヘスペリジンよりも高い活性を示し、酸化亜鉛ナノ粒子の活性が増加しました。 表B、図T、（補足ファイル）から。 ヘスペリジンとZnONPはどちらも、A型肝炎ウイルス（HAV）に対して抗ウイルス活性を示し、表AとB（補足ファイル）に示すように、最大​​非細胞毒性濃度で44.75パーセントと58.83パーセント、EC50はそれぞれ72.4と176.3 ug/mLに相当します。

4.結論

現在のパンデミック疾患COVID-19は、世界中で多くの罹患率と死亡率の原因となっています。 私たちの研究対象の栄養補助食品および植物医薬品フェノール化合物は、良好なドッキングスコアを示し、SARS-CoVの治療の理想的な標的となる可能性があります-2。 食品廃棄物のオレンジの皮から分離されたヘスペリジンは、他のテストされた化合物の中で、SARS-CoV -2メインプロテアーゼに対して最高のドッキングスコア（-8 .84 Kcal / mol）を示します。 ヘスペリジンは、亜鉛イオンを還元して、六角形の形状と粒子サイズが約25nmのZnONPを調製することができます。 ヘスペリジンを介したZnONPは、ヘスペリジン自体よりも多くの抗ウイルス活性を示し、最大の非細胞毒性濃度で44.75パーセントと58.83パーセントのパーセンテージを示します。 SARS-CoV -2パンデミック疾患の安全で安価な潜在的な治療法を見つけるために、ヘスペリジン、その他の栄養補助食品、植物医薬品化合物、およびそれらのZnONPについてさらに研究を行う必要があります。

著者の貢献GoudaH.Attia、Yasmin S. Moemen、Mahmoud Youns、Ammar M. Ibrahim、Randa Abdou、Mohamed A. El Raey Gouda H. Attia、Mohamed A.ElRaeyが原稿をデザインします。 Gouda H. Attia、Ammar M. Ibrahim、およびMohamed A. El Raeyは、クロマトグラフィー分離を行い、純粋に単離されたヘスペリジンの構造解明を行いました。 NPとその機能について説明します。 Yasmin S. Moemenはすべての分子ドッキング研究を実施し、MohamedA.El-Raeyはタンパク質を示唆しています。

MahmoudYounsとRandaAbdouは、抗ウイルスおよび細胞毒性アッセイとそれらのデータ分析を実行しました。 すべての著者は、原稿の最終版の草案作成と執筆、および最終原稿の承認を担当しました。

資金調達

この作業のための資金はありませんでした。

研究倫理

さらに、この原稿でカバーされている人間の患者を含む作業のあらゆる側面が、すべての関連機関の倫理的承認を得て行われていること、およびそのような承認が原稿内で認められていることを確認します。

IRBの承認が得られました（3件以上の一連の研究および一連の症例に必要）

症例の詳細や写真など、潜在的に識別可能な情報を公開することについての書面による同意は、患者またはその法定後見人から取得されました。

競合する利益の宣言

著者は、関心のある宣言を報告していません。

謝辞

このプロジェクト（NU / MID / 18/024）を実行するための資金を提供してくれた、サウジアラビアのナジュラーン大学の科学研究部長に感謝します。

付録A.補足データ

この記事に関連する補足資料は、オンライン版のDOI：https：//doi.org/10.1016/j.colsurfb.2021.111724にあります。

Gouda H. Attiaa,b 、ヤスミンS.モーメンc 、Mahmoud Younsd 、アンマーM.イブラヒムe ,  ランダアブドゥf,g 、モハメドA.エルレイh, *  

a サウジアラビア、ナジュラーン、ナジュラーン大学薬学部生薬学科
b エジプト、カフル・アッシャイフ大学、カフル・アッシャイフ大学薬学部生薬学科
c エジプト、メノフィア、メノフィア大学国立肝臓研究所臨床病理学部
d エジプト、カイロ、ヘルワン大学薬学部生化学および分子生物学科
e 応用医科学大学、ナジュラーン大学、ナジュラーン、サウジアラビア
f サウジアラビア、マッカ、ウムアルクラ大学生薬学部生薬学科
g エジプト、カイロ、ヘルワン大学生薬学部生薬学科
h エジプト、カイロ、ドッキ、国立研究センター、製薬部門、植物化学および植物分類学科

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