カンクサ由来多糖類の成分分析と抗酸化活性
Jun 06, 2023
要約: この論文では、多糖類は以下から抽出されます。カンクイ, カンクイ粗雑な多糖類CLP を DEAE セルロースカラムクロマトグラフィーで精製し、カンクサの中性糖 CLP と酸性糖 CLP2 を取得します。その中の総糖、ウロン酸、タンパク質の含有量を測定します。キスタンケ デスティコーラ粗多糖類CLP、Cistanche desserticola 中性糖 CLPl およびキスタンケ・デザートティコーラ酸性糖CLP2はUVスペクトルスキャンによって測定され、分子量と多糖類の単糖組成が測定されます。 同時に,Cistanche desserticola粗多糖CLP,Cistanche desserticola中性糖CLP1およびCistanche desserticola酸性糖Cl.P2のDPPHラジカル消去能力と総抗酸化能力を分析した。 測定データは、Cistanche desserticola crud多糖体CLP、Cistanche desserticola中性糖CLP1およびCistanche desserticola酸性糖CLP2の成分は類似しているが、含有量に大きな違いがあることを示しています。Cistanche desserticola中性糖CLP1とCistancheの場合、複数の溶出ピークが得られます。 deserticola 酸性糖 CLP2 は DEAE セルロースクロマトグラフィーカラムで分離精製されており、分子量分布は 0~10 000 Da であり、Cistanche desserticola 多糖類の主成分が低分子糖であることが示されています。 キスタンケ デセルティコーラ中性糖 CLP1 の単糖定量結果は、キスタンケ デセルティコーラ 中性糖 CLP1 の単糖が主にマンノース、ガラクツロン酸、グルコース、ガラクトース、アラビノースであることを示しています。 キスタンケ デセルティコーラ 酸性糖 CLP2 の単糖定量結果は、キスタンケ デセルティコーラの中性糖 CLP1 の単糖が主にマンノース、ガラクツロン酸、グルコース、ガラクトース、アラビノースであることを示しています。酸性糖ClP2は主にラムノース、ガラクツロン酸、グルコース、ガラクトースである。DPPHラジカル消去実験とキスタンケ・デスティコーラ多糖類の総抗酸化能力実験の結果、キスタンケ・デスティコーラ中性糖CLP1の抗酸化能力はキスタンケ・デスティコーラ粗製多糖の抗酸化能力よりも高いことが示された。 CLPおよびカンクサ酸性糖CLP2。
キーワード:カンクイ; 多糖類; 成分分析。抗酸化作用; 吸収。
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シスタンケを多数含む草本の寄生植物です。フェノール配糖体s、生合成、フェニルエタノイド配糖体、砂糖、アルコール。 グリカンは主に多糖類の形をしています。 カンカ多糖類には強力な免疫活性調節機能[1-2]があります。
人間の生命活動における中間代謝産物として、フリーラジカルは不安定で安定な状態にあり、強い酸化活性を持っており、生体高分子の原因となる可能性があるため、天然の抗酸化物質の使用が必要です。現在の食品研究の主な方向性となっています。 多糖類の組成は、シスタンケ強力な抗酸化能力があり、人体のフリーラジカルの除去を促進します。 カンサスの多糖類組成には強力な抗酸化能力があり、人体のフリーラジカルの除去を促進します[3]。
この論文では、多糖類高効率ゲル透過法によりカンカ第二スズ属の植物体を抽出・分類しました。 Cistanche の多糖類の分子量は、高速ゲル浸透クロマトグラフィーによって測定されました。 シスタンケの多糖類の分子量は高速ゲル浸透クロマトグラフィーによって測定され、多糖類の組成も判明しました。 シスタンケの多糖類の分子量は高速ゲル浸透クロマトグラフィーによって測定され、多糖類の組成は次のとおりです。分析されました。
シスタンケの抗酸化活性は、フリーラジカル消去力と多糖類成分の総抗酸化能力を測定することによって分析されました。 また、Cistanche の多糖類成分のフリーラジカル消去能力と総抗酸化能力を決定し、Cistanche とその付加価値の開発と利用に理論的根拠を提供しました。
1 カンクサからのサンプル調製と多糖類物質の抽出
シスタンケ2.5kgの重さを量ってスライスし、蒸留水12.5Lを加えて3時間煮ます。 ３時間煮沸した後、濾液を濾過により収集し、７５パーセントのエタノールに添加し、２４時間放置した。 沸騰後、濾液を濾過して回収し、７５％エタノールに加えて２４時間放置し、４０００ｒ／ｍｉｎで３０分間遠心分離し、沈殿を回収した。 沈殿物を収集し、凍結し、乾燥させてCistanche粗多糖CLPを得た[4]。 沈殿を凍結乾燥してCistancheの粗多糖CLPを得た[4]。 DEAEセルロースを採取し、浸して膨潤させ、脱気した。これをDEAEセルロース陰イオン交換カラムにロードし、蒸留水およびNaCl溶液で平衡化した。 水とNaCl溶液を平衡化に使用しました。 カンクイの粗多糖ＣＬＰ １００ｍｇを秤量し、蒸留水１０ｍＬに溶解し、蒸留水で溶出させた後、溶出液を採取した。
蒸留水で溶出した後、溶出液を回収し、濃縮して凍結乾燥し、Cistancheの中性糖CLP1を得た。 ＮａＣｌ溶液で溶出した後、溶出液を回収し、透析後、濃縮、凍結乾燥して、シスタンケ酸性糖ＣＬＰ１を得た。 NaCl 溶液で溶出した後、溶出液を収集し、透析により濃縮し、凍結乾燥して Cistanche 酸性糖 CLP2 を得ました [5]。
カンカの中性糖CLP1と酸性糖CLP2をそれぞれ1mg/kgの濃度で調製した。 多糖類溶液は 1 mg/mL の濃度で調製され、分光光度計を使用して 210-600 nm の UV 分光法によって多糖類を分析しました。 分光光度計を使用して 210-600 nm で UV スペクトルをスキャンし、ピークが 260-280 nm に現れたとき。ピークが 260-280 nm に現れたとき、溶液にはタンパク質と核酸が含まれていることが証明されました。 [6]。
2 カンクの多糖体組成の測定
フェノール硫酸法を使用して、Cistanche サンプルの総糖含有量を測定しました。 0.1 mg/mL、0.2、0.4、0.6、0.8 および 1 mL のグルコース溶液を測定しましたをガラス試験管に入れ、蒸留水を加えて１ｍＬに定容した。 次に、0.5 mL のフェノール試薬と 6% 濃度の濃硫酸 2.5 mL を試験管に加え、よく振盪し、室温まで冷却しました。 分光光度計を用いて490nmにおける吸光度を測定し、糖度を横軸、吸光度を縦軸として検量線をプロットし、回帰式[7-8]を計算した。
Cistanche サンプルのタンパク質含有量は、Komas Brilliant Blue 法を使用して測定されました。 サンプルのタンパク質含有量は分光光度計により 495 nm で測定され、タンパク質含有量は標準曲線の方程式 [9] に従って計算されました。
Cistanche サンプル中のグリオキサラートの含有量は、m-ヒドロキシフェニル法を使用して測定されました。 異なる濃度の標準溶液と、0.1 mg/mL の濃度の 0.4 mL のサンプル溶液を、2.5 mL の濃硫酸とともに試験管に加え、振盪しました。
濃度の m-ヒドロキシビフェニルと 0.5 パーセントの水酸化ナトリウム溶液を試験管に加え、よく振盪し、30 分間放置しました。 525 nmでの吸光度を分光光度計で測定し、検量線式[10-11]に従ってサンプル中のグリオキサラートの量を計算しました。 シスタンケの多糖類の相対分子量は高速ゲルクロマトグラフィーによって決定され、シスタンケの単糖類の組成は高速液体クロマトグラフィーによって決定されました。 シスタンケの単糖組成は高速液体クロマトグラフィーによって決定されました [12]。
3 カンカの多糖類組成の結果と分析
図1から、カンカの中性糖CLP1は280nmで明らかな吸収ピークを示しましたが、カンカの酸性糖CLP2は260-280nmで明らかな吸収ピークを示さなかったことがわかります。 ＵＶ吸収スペクトルはより高かった。 タンパク質に含まれるトリプトファンとチロシンは、280nmの紫外線吸収値が大きいことから、カンク中性糖 CLP1 には糖タンパク質が含まれていると判断できましたが、カンク酸性糖 CLP2 に核酸やタンパク質が含まれているかどうかは判断できませんでした。
Cistanche の酸性糖 CLP2 に核酸とタンパク質が含まれているかどうかを判断することはできません。
DEAEセルロース陰イオン交換クロマトグラフィーカラム分析は、イオン性物質や不純物をカラムに吸着させて多糖類物質を分離することができ、蒸留水溶出液を濃縮・乾燥させた後、合計34.68mgのCistanche中性糖CLP1が得られました。 NaCl溶液を使用して溶出、濃縮、乾燥し、合計16.52 mgのCistanche酸性糖CLP2を得た。 総糖含量、タンパク質含量、およびグリオキシル酸塩の標準曲線式。 カンクサの総糖、タンパク質、およびグリオキシル酸の測定値が得られました。 シスタンケの総糖分、タンパク質、グルクロン酸含有量を測定し、表1に示しました。
210 ～ 600 nm の光度計の UV スペクトルの走査曲線を図 1 に示します。
図１より、カンカ好中性糖 CLP1 は 280 nm に明確な吸収ピークを示し、カンカ酸性糖 CLP2 は 260-280 nm に吸収ピークを示したことがわかります。 また、カンカの酸性糖 CLP2 は 260-280 nm で明確な吸収ピークを示しました。 260-280 nm には明らかな吸収ピークはありませんでしたが、UV 吸収スペクトルはより高かったです。 UV吸収値は、タンパク質に含まれるトリプトファンとチロシンの280nmにおける吸収値が大きいことから、Cistanche好中球性糖CLP1には糖タンパク質が含まれていると判断できるが、Cistanche酸性糖CLP2に核酸やタンパク質が含まれているかどうかは判断できなかった。 。 Cistanche CLP2 における核酸とタンパク質の存在は確認できませんでした。
DEAE セルロース陰イオン交換クロマトグラフィーカラム分析では、イオン性物質や不純物がカラムに吸着される可能性があります。 イオン性物質や不純物をカラムに吸着させることで多糖類物質を分離します。 蒸留水溶出液を濃縮乾燥させてシスタンシュの中性糖を得た。蒸留水溶出液を濃縮乾燥させた後、合計３４．６８ｍｇのＣＬＰ１が得られ、ＮａＣｌ溶液で濃縮乾燥させた後、酸性糖ＣＬＰ１が得られた。 シスタンシュの酸性糖CLP2を16.52mg得た。 シスタンシュの総糖含量,タンパク質含量およびグリオキシル酸塩含量の標準曲線式を得た。 およびグリオキシル酸の標準曲線の方程式。 カンクサの総糖、タンパク質、およびグリオキシル酸の測定値が得られました。 シスタンケの総糖分、タンパク質、グルクロン酸含有量を測定し、表1に示しました。
表 1 カンクサの総糖質、タンパク質、ウロン酸の含有量
標準試料の分子量とピーク面積を求めることができ、この回帰式に被測定試料の発光信号を代入することで回帰式を求めることができます。 検査対象のサンプルの分子量を求めることができます。 測定対象サンプルの発光シグナル値を回帰式に代入することにより、測定対象サンプルの分子量を求めることができる。 カンカンク CLP1 とカンカンク CLP2 の平均分子量、平均重分子量、分散係数を求めました。 カンク中性糖 CLP1 およびカンク酸性 CLP2 は、高速ゲル浸透クロマトグラフィーによって測定されました。 保持時間および分子量計算の結果を表２に示す。分子分布の幅を示すために、重平均分子量と数平均分子量の比を使用した。 重平均分子量と数平均分子量の比は、分子分布の幅を示すために使用されます。
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