腫瘍学患者とその家族介護者における朝と夕方の倦怠感の自己報告評価とのサイトカイン遺伝子の関連

概要

目的：野生の栽培cistanche（cWG）、と呼ばれるRoucongrong、患者に臨床的に使用されています慢性疲労韓国で。 の影響についてはほとんど知られていませんthecistanche製造された蒸留（揮発性）成分蒸発中。 最近、私たちは最初に1つを特定しましたcWG蒸留抽出物、パナキシーからの主成分ドル、質量分析を使用して。 ただし、機能cWG蒸留抽出物とパナキシドールの特性は残っていますとらえどころのない。 したがって、本研究は評価した運動に対するcWG蒸留抽出物またはパナキシドールの効果誘発倦怠感ラットで。

方法： 倦怠感強制水泳によって誘発された不動時間は男性で分析されましたSprague-Dawleyラット。 動物は腹腔内投与されたビヒクル、cWG蒸留抽出物、またはパナックスのいずれか強制水泳開始の10分前のydolテスト（FST）を1日1回5日間。 5日目のFST後。また、以下を含む疲労関連の生化学的レベルを分析しました血中尿素窒素（BUN）、乳酸（LAC）、血清中およびレベル中の乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）肝臓とヒラメ筋のグリコーゲンの。

結果：蒸留されたcWGでの強制水泳時間抽出物（0 .6 mL / kg）治療群は有意に4日目および対照群よりも長い5.パナキシドール（0.1および0.25 mg / kg）治療群で大幅に​​向上したパフォーマンスを示したコントロールと比較して、強制水泳。 さらに、血清LDHレベルの有意な減少がパナキシドール治療群、交代はなかった血清BUNおよびLACとグリコーゲンのレベルで肝臓またはヒラメ筋。

結論：本研究はcWGを実証した蒸留抽出物とその有効成分パナキシドールはの機能抗倦怠感.  

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1.はじめに

倦怠感極度の肉体的または精神的倦怠感です一般的な生理学の1つとしての倦怠感重度のストレス、ハードな物理的またはメンタルワーク。 倦怠感は多くの障害に関連している可能性がありますそして主にエネルギー源の枯渇によって引き起こされますこれには、の最終製品の蓄積が含まれます倦怠感、肝臓のグリコーゲン消費量の減少[1]。特に、身体的倦怠感は、最適な身体的パフォーマンスを維持するための筋肉であり、激しい運動によって誘発されることは、しばしばパフォーマンスの低下、筋肉の低下を引き起こす力と持久力と精神機能[2]。cistancheよく知られている薬草であり、抗腫瘍剤[3]、抗酸化剤として伝統的に使用されています[4]、抗炎症[5]および低血糖プロパティ[6]。 cistancheはまた強化するために使用されています特に苦しんでいる患者の体力重度の倦怠感[7、8]および癌関連の倦怠感[9]から。ホンオニク多糖類などのホンオニクの成分またはPanaxから単離された小分子オリゴペプチドcistanche抗疲労活性と効果を示しています倦怠感の生理学的バイオマーカーについて[10]強制水泳を増やすことによる抗疲労効果時間と乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）の強化マウスの肝臓におけるグリコーゲンレベル[11]。ホンオニクの一種として、韓国の野生のホンオニク（SanSam、マウンテンシスタンチェ）は深い山で自然に育ちますそして韓国では非常にまれで高価です。 模倣します自然に育てられたシスタンチ、シスタンチはしばしば栽培されます深い山で、SanYangSam（シスタンチェ）に分類されます山で栽培されている）とSanYangSanSam（野生cistanche山で栽培されているか、野生のホンオニクで栽培されている、cWG）、シスタンシュ種子の種類によって異なります。 原油またはcWGからの蒸留抽出物（SanYangSanSamと呼ばれる）抗腫瘍または癌効果があると報告された[12、13]。 特に、cWGからの蒸留抽出物はの鍼治療ポイントへの注射のために臨床的に使用されます韓国[13]そしてまた炎症を減らすことを示しましたリポ多糖（LPS）誘発ラットモデル[14]および酸化的肥満ラットのストレス[15]。 前の実験中研究はcWGの有効性を支持しています蒸留抽出物、cWG蒸留の有効成分抽出物とその生物学的効果はほとんど知られていません。最近、液体クロマトグラフィーを使用して-タンデム質量分光分析と四重極直交加速飛行時間型質量分析では、cWGが蒸留されていることがわかりました抽出物は主成分としてパナキシドールを含んでいたパナキシドールのレベルは約30倍高かった山で栽培されているホンオニクのもの（SanYangSam）[16]。 cWG蒸留抽出物は長い間臨床的に使用されてきたためがん患者の身体的エネルギーを高めるために倦怠感に苦しんでいる、cWG蒸留抽出物とその主要成分パナキシドールは、倦怠感を軽減する役割を果たす可能性があります。したがって、本研究は、抗倦怠感を評価するために設計されましたcWG蒸留抽出物とその活性物質の特性強制的に実行することによるラットの成分パナキシドール水泳テストと倦怠感関連のバイオマーカーの測定[17]血中尿素窒素（BUN）、乳酸（LAC）など。LDH、およびラットの肝臓と筋肉のグリコーゲン。

2。材料と方法

2.1。 動物

オスのSprague-DawleyラットはDaeから購入しましたhan animal Co.（ソウル、韓国）重量270-320 gケージごとに2-3匹の動物のグループに収容されました。室温22±2度、12時間の明暗サイクル自由に食べ物と水を受け取りました。 すべて実験的手順は、ナショナルに従って実施されました検査室のケアと使用に関するInstitutesofHealthのガイドライン動物および施設内動物によって承認された大邱韓医大学のケアと使用委員会と大田大学。

2.2。 実験計画

をテストするために2つの別々の実験が行われましたcWGの抗疲労特性が蒸留されたという仮説ラットにおける抽出物とその有効成分パナキシドール強制水泳試験の実施と倦怠感の測定BUN、LAC、LDH、およびラットの肝臓と筋肉のグリコーゲン。 最初の実験cWG蒸留抽出物かどうかを判断するために実施されました強制水泳時間と肝臓のグリコーゲンレベルに影響を与えるとヒラメ筋。 したがって、ラットは2つの実験に分けられましたグループ：生理食塩水処理グループ（n=6）およびcWG dis耕作抽出物処理グループ（n=6）。 2番目の実験有効成分であるパナキシドールかどうかを確認するために実施されましたcWGの、強制水泳時間を変更し、生化学的血清中のBUN、LAC、LDHなどのレベルと肝臓とヒラメ筋のグリコーゲン。 この実験では、ラットは3つの実験グループに分けられました：ビヒクル（n {{0}}）、パナキシドール（0.1 mg / kg）-処理済み（n=5）、およびパナックスydol（0 .25 mg / kg）-治療（n=5）グループ。

2.3。 薬物および化学薬品

栽培された野生のホンオニク（cWG、ChonBangNongSan Inc.、約8〜10歳の韓国の忠南）が使用されました。 The無傷のcWGを洗浄、乾燥、粉砕して超微細化ターボミルを使用した粉末（平均粒子サイズ、7.5μm）。 蒸留cWCから抽出（SanYangSanSam、20ml /バイアル）韓国製薬研究所で作られました（KPRI）前述のとおり[16]16]。 バウチャー標本（#CWG -2015-03- DE）はKPRI。 簡単に言えば、野生のホンオニクは蒸留で洗浄されました破片や汚染物質を除去するための水。 4グラムの乾燥した野生のホンオニクを250mLの蒸留水と混合した丸いフラスコに入れ、閉ループを介して80ºCで加熱抽出システム（KyungSeomachinery Com。、仁川、韓国）（図1A）。 24時間の加熱中に、蒸気は凝縮しました閉ループシステムで冷却し、cWGを蒸留する約200mLの抽出物が得られた。 パナドールはChengdu BiopurifyPhytochemicalsLtdから購入（成都、中国）。 BUN、LDH、LAC、およびグリコーゲンのレベルIDEXX VetTestChemistryanaで決定されましたライザー（IDEXX Laboratories、ウェストブルック、メイン州、米国）。 他の化学物質はSigmaAldrich（セントルイス、米国ミズーリ州）。 パナキシドールを100％エタノールに溶解し、その後、使用前に生理食塩水で希釈します。 ビヒクル、cWG蒸留抽出物（{{0}}。6 mL / kg）またはパナキシドール（0。1および0.25 mg / kg、1回日）10分前に腹腔内（ip）投与された5日間の強制水泳試験（FST）の開始まで。

2.4。 強制水泳試験

強制水泳試験（FST）は記載されているように実施されました以前[1]。 簡単に言えば、ラットを個別に配置した水で満たされたプラスチック容器（30 x 30 x 80 cm）に（25±5度）深さ60cmまで。 ガラス棒（ラットの体の10パーセント体重）をラットの尾の近位部に付けた。総水泳時間は、物理的なときに記録されましたネズミの力が尽きて、上がれませんでした10秒以上表面。

2.5。 血液生化学の測定パラメーター

5日目の最後のFSTの後、血液（500μL）サンプルが収集されましたイソフルラン麻酔下の腹部大動脈から（2パーセント）そしてヘパリン処理されたチューブに移されます。 血清3000rpm、4度で10分間の遠心分離により得られた。最小で、さらに分析するまで-80度で保存します。 のレベル血清BUN、LAC、およびLDHは562nmで測定されましたドライスライドケミストリーアナライザー（VetTest8008血清）を使用化学分析装置およびVetTest試薬スライド、IDEXXラボラトリーズInc、ウェストブルック、。 メイン州、米国）によるとメーカーの指示。

2.6。 組織グリコーゲン含有量の測定

ラットを4〜5パーセントのイソフルラン麻酔下で安楽死させた採血後（2％イソフルラン）肝臓とヒラメ筋の組織。 肝臓のグリコーゲンレベルヒラメ筋は、この方法を使用して測定しました以前に説明された[18]簡単に言えば、採血、肝臓、ヒラメ筋はすぐに解剖されました取り出し、液体窒素で凍結し、-80度で保存使用するまで。 各サンプル（組織あたり2 0 mg）を2.0で煮沸しましたM HClを100度で1時間、ホモジナイズします。 遠心分離後、サンプルを2で中和しました。0MNaOHおよび3000rpmで10分間再度遠心分離しました。 グリコーゲンのレベルケミストリーアナライザーを使用して562nmで測定VetTest8008。

2.7。 統計分析

データはSigmaStat3ソフトウェア（Systat Software、Inc、San Jose、CA、USA）および平均±SEM（平均の標準誤差）。 統計分析t検定、一方向または双方向の反復分析によって分析されました分散分析（ANOVA）、続いてを使用した事後テストテューキー法。 統計的有意性はで考慮されました(*) P<0 .05および（**）P<0.01。 

3.結果

3.1。 cWG蒸留抽出物のラットの強制水泳試験

強制水泳に対するcWG蒸留抽出物の効果ラットの時間を図1に示します。 強制水泳4日目のcWG蒸留抽出物処理群の時間5は生理食塩水コントロールよりも有意に長かったグループ（図1B、反復t検定;治療F(1,20) = 10.384, P  = 0 .023; 時間F(4,20) = 20.165, P<0 .001;=""> F(4,20) =  2.609, P = 0.066).  3.2。 グリコーゲンに対するcWG蒸留抽出物の効果ラットの肝臓またはヒラメ筋。cWG蒸留抽出物の効果を評価するには強制水泳では、グリコーゲンレベルに関連付けられています、グリコーゲンレベルは肝臓とヒラメ筋で推定されました5日目のFST後のラットの割合。図2Aおよび2Bに示すように、cWG蒸留抽出物はグリコーゲンのレベルに影響を与えませんでした肝臓（図2A： t-テスト、F(1,10) = 0.056, P= 0。82）またはヒラメ筋

3.3。 強制に対するパナキシドールの効果ラットの水泳試験

 ポリアセチレンコムであるパナキシドールの効果をテストしましたポンドが見つかりましたPanax cistanche、ラットのFSTについて。 示されているように図3Bでは、パナキシドール治療群（0.1または0。25mg / kg）比較して大幅に増加した強制水泳時間4日目と5日目に車両制御グループに（双方向、治療メントF(2,32){{0}}。997、P <0.001;>(4,32)= 120。756、P <0 .001; 相互作用F(8,32) = 1.531, P = 0.186). 3.4。 パナキシドールの血清バイオへの影響ラットの化学的パラメータ倦怠感に関連する血清バイオマーカーのレベル、BUN、LAC、およびLDHは最後のFSTの後に測定されました。 パナキシドルは持っていた血清BUNのレベルに影響はありません（図4A;一方向、F(2,12) =  0 .5842、P=0 .0573）またはLAC（図4B;一方向、F(2,12) = 0.6488,  P=0 .5401）。 しかし、LDHレベルは強制的に増加しました御馳走によって大幅に減衰した水泳0 .1 mg / kgの用量で5日間パナキシドールを投与します（図。4C; 片道、F(2,10) {{0}}。65、P=0 .003、P <0.01 vs.車両）。

3.5。 グリコーゲンコンに対するパナキシドールの効果後の肝臓とヒラメ筋組織のテント強制水泳肝臓と足裏のグリコーゲンレベルも測定しました5日目のFST後のラットの骨格筋。図に示すように。5Aおよび5B、パナキシドールはレベルに有意な影響を与えなかった肝臓のグリコーゲン（図5A：一方向、F(2,12) = 0.256, P = 0.78)  またはヒラメ筋（図5B：一方向、F(2,12) = 0.715, P = 0.51) 車両対照群と比較。

4。議論

cistancheには、次のようなさまざまな医薬品特性があります。抗腫瘍[3]、抗酸化[4]および抗炎症作用[5]および障害のある記憶の回復[19]。 パナックスアイドル、シスタンシュから分離されたプロイアセチレン化合物、潜在的な抗がん剤[20]、保護剤を示しています皮質ニューロンの神経変性に対する効果[21]、およびPC12細胞における神経成長因子の効果を模倣する[22]。 いくつかの研究はまたの有効性を証明しましたcistancheまたは、などのシスタンチェの主な有効成分ジンセノサイドRb1および小分子オリゴペプチド運動倦怠感またはがん関連倦怠感[11、23、24]。 多くの以前の研究では、ホンオニクの水性抽出物を利用していました抽出/凝縮によって収集された粗抽出物手順：ホンオニクの根を水またはメタノールに浸し、下の余分な水を取り除くことによってろ過され、凝縮されます掃除機。 一方、効果についてはほとんど知られていません中に生成されたシスタンチェ蒸留（揮発性）成分の気化。本研究は、私たちの知る限り、初めて示しています、シスタンシュとその有効成分からの蒸留抽出物パナキシドールはラットFSTで抗疲労活性を示したモデル。 倦怠感は最も一般的な生理学の1つです運動、うつ病、老化、癌から反応が起こった、多発性硬化症、およびパーキンソン病。 FSTは倦怠感を評価するための最も有効なモデル多種多様な食品または植物化合物の[2、25-27] 25-27]。 以前の研究[28]28]と一致して、私たちの結果cWG蒸留抽出物が強制を増加させることを明らかにした生理食塩水対照群と比較した水泳時間。 広告でcWGの主成分であるdition、panaxidolも増加しました強制水泳時間。 この結果はホンオニクの抗疲労効果が関連している可能性があること強制水泳によるパナキシドールの活動倦怠感。強制水泳などの運動による倦怠感はBUNを含む生化学的指標で評価され、血中のLACおよびLDHレベル。 したがって、レベルを測定しました強制的に与えられたラットの血清BUN、LAC、およびLDHの水泳とパナキシドール治療。 血中尿素窒素タンパク質とアミノ酸の代謝産物であり、使用されます運動持久力を評価するための重要な指標および倦怠感[29]。 乳酸は主要なものと考えられています筋肉疲労の指標。 激しい運動は蓄積につながります血のpHを下げる結果となる乳酸のと筋肉とその結果としての倦怠感の発生[30]30]。乳酸デヒドロゲナーゼは筋肉損傷の指標であり、ピルビン酸とNADHプラスの相互変換を触媒します筋細胞のL-乳酸。 私たちの現在の研究では、繰り返し0 .1 mg/kgの用量でのパナキシドールによる治療血清LDHの増加したレベルを弱めた（メジャー強制水泳ラットにおける乳酸生産のための酵素）一方、血清BUNまたはLACのレベルは変化しませんでした。 これ強制水泳でのパフォーマンスの向上を示唆している可能性がありますLDHに関連付けられています。 ただし、パナキシドールがLDHの活性をどのように低下​​させることができるかを探る筋肉の損傷。 の主な貯蔵形態であるグリコーゲン肝臓や筋肉のブドウ糖も倦怠感の指標です[31]31]。 肝臓のグリコーゲンは、生理的血糖値を維持するための血糖値範囲と倦怠感は、肝臓のグリコーゲンがほとんどであるときに発生します消費された[32、33]。 私たちの現在の研究では、グリコーゲンレベルはcWGまたはパナキシドールで治療したラットの肝臓またはヒラメ筋変更されていませんでした。 まとめると、これらの調査結果はパナキシドールは、強制水泳ラットの血清LDHレベル。他の可能なメカニズムとして、抗倦怠感の効果パナキシドールは、酸化ストレスの減衰を介して調節する可能性があります。酸化ストレスはFSTとその後、病理学および臨床症状につながる可能性があります倦怠感[34-36]。 Bao L et al。は、そのシスタンシュを示しましたミトコンドリア機能の改善と抑制FST後のマウスの骨格筋の酸化ストレスそれはその行動経路かもしれません抗倦怠感効果[11]。 したがって、パナキシドールは抗疲労効果があるかもしれませんそのような酸化ストレス指標のレベルを下げることによって強制的にスーパーオキシドジスムターゼまたはマロンジアルデヒドとして水泳モデル。 さらなる研究を実施する必要がありますの根底にあるメカニズムを確認する抗倦怠感効果強制水泳誘発倦怠感に対するパナキシドールの効果。

5。結論

本研究では、cWGdisの強制水泳時間耕作された抽出物で処理されたグループはより有意に長かった4日目と5日目の対照群のそれ。グループは、コントロールと比較して、強制水泳。 さらに、重要なパナドールで血清LDHレベルの低下が見られた治療群、レベルに交代はありませんでした肝臓またはヒラメ筋の血清BUNおよびLACとグリコーゲンのエルス筋。 これらの結果をとって、栽培されたの蒸留抽出物野生のホンオニクとその有効成分であるパナキシドールはラットのLDHの活動を減らすことによる抗疲労活動強制水泳モデル。 いくつかの五環性トリテルペノイド。