カンカの水抽出物中のエキナコシドのHPLCによる測定
Mar 17, 2023
徐山山1 ,ウー・カンギュ2 ,TU興明2 （1. 広州中国医学大学第三臨床医科大学, 広州 510405 広東省, 中国; 2. 広州中医科大学附属第三病院,広州 510378 広東,中国）
概要: 目的 を測定するための HPLC メソッドが確立されました。エキナコシドCの水抽出物中イスタンチェ・デスティコラ. メソッドエキナコシドは、ＨＰＬＣによって決定された。 分離は、Inertsil ODSSP C で実行されました。18 アセトニトリルからなる移動相を含むカラム（A）0.4% リン酸溶液（B）,勾配溶出による。 検出波長は 333 nm に設定,カラム温度は 30 度でした。 流速は1.0mL・min-1 注入量は10μLでした。結果44.939 7-539.276 4 ug ·mL の濃度範囲におけるエキナコシドの直線関係- 1 よかった（r = 0.999 8）. 回収率は 94.59% -105.31% でした（RSD= 2.93%,n = 9）. カンカの水抽出物中のエキナコシドの含有量は15.527でした,7.347,12.267mg・g-1 .
結論: 再現性の良い確立された HPLC メソッドは正確です,シンプルで実現可能。 の水抽出物中のエキナコシドの測定に適しています。Cistanche Deserticola ma.
キーワード:HPLC;の水抽出物カンザス・デスティコラ;エキナコシド;内容の決定
カンザス・デスティコラ伝統的な中国医学の臨床現場で一般的に使用されている強壮剤であり、「砂漠人参". 中国薬局方の 2015 年版に含まれるカンカは、オロバ科植物のカンキク (Cistanche Deserticola YC Ma) またはカンキク (Cistanchetubulosa) (Schenk) Wright の乾燥した、うろこ状の肉質の茎です。 温かみがあり、甘辛い味があり、腎臓と大腸の経絡に属します。 腎臓の陽を強壮し、精と血を補い、腸を潤し、便秘を解消する効果があります。 [2].
砂漠人参
『神農本草経』には、「中を養い、五臓を養い、陰を強くし、本質を養う」とあります。Cistanche Deserticola には、主にフェニルエタノイド配糖体、イリドイドと配糖体、リグナンと配糖体、多糖類、エステル、およびアルカロイドが含まれています [3]。フェニルエタノール配糖体の主な有効成分ですカンザス・デスティコラ、その中でエキナセアとプールサイドは、中国薬局方におけるカンキョウの識別と含有量決定のための指標成分です.
フェニルエタノール配糖体はカンカの主な有効成分です。
薬理学的研究 [4] は、 カンザス・デスティコラ腸を潤して便秘を解消する、肝臓を保護する、骨粗鬆症を予防する、抗酸化作用、老化防止、疲労回復など、さまざまな薬理効果があります。. の水性抽出物カンザス・デスティコラ卵巣摘出マウスの血清中の酒石酸耐性酸性ホスファターゼおよびオステオカルシンと同様に、ラットの骨芽細胞の骨形成タンパク質 2 遺伝子を促進することができます、骨髄中の Smad1 および Smad5 遺伝子およびトランスフォーミング増殖因子 - などの発現には、抗骨粗鬆症効果 [5-6]. エキノシド 骨芽細胞の増殖を促進し、in vitro で骨髄間葉系幹細胞の骨芽細胞への分化を促進することができます[7-9].
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近年、カンカのアルコール抽出物およびその化合物製剤［10-12］中のエキナコシドおよびプールサイドの含有量の定量に関する報告は多くありますが、カンカの水抽出物中の指標成分。 この研究では、高速液体クロマトグラフィー (HPLC) を使用して、カンカの水抽出物中のエキナコシドの含有量を測定しました。
1. 材料
1.1 装置
LC-20AT 高速液体クロマトグラフィー、SPD-20A 検出器、SIL-20A オートサンプラー、CTO-10ASvp カラム温度ボックス、LCsolution 液体クロマトグラフィー ワークステーション、島津製作所日本の; MES125P-OCE-DU 電子分析天秤、ザルトリウス、ドイツ。 SHZ-D (III) 循環水多目的真空ポンプ、Henan Yuhua Instrument Co., Ltd;
1.2RC2BSO25 ロータリーエバポレーター冷却循環システム、RV10DS96 ロータリーエバポレーター、IKA、ドイツ; DK-S26 電気サーモスタット水浴、上海京虹実験設備有限公司; UPRシリーズ超純水製造機、四川友浦超純技術有限公司
1.2 医薬品および試薬
肉栄の薬用材料、Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Slices Co., Ltd. から購入、バッチ番号: 18010011806001、181001広州中医科大学病院は、広州中医科大学附属第三病院の医薬品検査室に保管されています。 エキノシド参照物質、含有量 89.7 パーセント、中国食品医薬品管理管理研究所、バッチ番号: 111670-201706; アセトニトリルはクロマトグラフィー的に純粋です (Merck、ドイツ)。 メタノールとリン酸は分析的に純粋です (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.)。 水は超純水です。
2. 方法と結果
2.1 カンカからの水抽出物の調製
取るシスタンシュパウダー、10 倍量の蒸留水を加え、加熱還流して 2 回、各回 1 時間抽出します。 濾過し、濾液を合わせ、ロータリーエバポレーターを用いて濾液を生薬含量0.100g・mL-1まで濃縮する。 スタンバイのために4度で保管してください。 2.2 クロマト条件とシステム適合性 クロマトカラム：InertsilODS SPC18 column (150mm × 4.6mm, 5 μ m）; 移動相：アセトニトリル (A) - 0.4%リン酸溶液 (B), グラジエント溶出：0~ 5min, 17% A; 5~25min, 20% A; 25~30min, 17% A; 検出波長: 333nm; カラム温度: 30度; 流速: 1.0mL·min-1; 注入量: 10 μ L. このクロマトグラフィー条件下では、エキナセアのピークと隣接する成分との間の分解能は 1.5 を超えており、列の理論的な数は、エキナセアのピークに対して 4000 未満であってはなりません. クロマトグラムを図 1 に示します.
図1 エキナコシド（A）とカンカの水抽出物（B）のHPLCクロマトグラム
2.3 溶液の調製
2.3.1 基準溶液
適量を量るエキナセチン標準物質を正確に量り、10mLのメスフラスコに入れ、メタノールを加えて溶かし、標準溶液1ミリリットルμGあたりエキナセチン898.794を含むようにし、4℃で保存する。
カンクンカのエキノシド
2.3.2 試験溶液
2.0 mL のカンカの水抽出物を正確に測定し、水浴中で蒸発させ、メタノールに溶解し、10 mL のメスフラスコに定容し、よく振って、0.22 μ M 微孔質つまり、膜ろ過。
2.4 線形関係の調査
{{0}}.25、0.50、1.00、2.00、2.50、および 3.00 mL の参照溶液 2.3.1 を 5 mL のメスフラスコに入れ、メタノールを加えて一定量にし、よく振って 44.9397、89.8794、179.7588、359.5176、449.3970 の勾配濃度を得ます。 、および 539.2764 μ G · mL-1 の参照溶液、0.22 μ M 微孔性膜ろ過。 2.2 のクロマトグラフィー条件に従って測定を行い、ピーク面積を記録します。 標準物質の質量濃度を横軸（X、μG・mL-1）、縦軸をピーク面積（Y）とすると、線形回帰式Y=13185が得られます。 0X-32273.0、r=0.9998. その結果、エキナセアの範囲は 44.9397 ～ 539.2764 μ であることがわかりました。g · mL-1 の濃度範囲内で直線関係は良好です。
2.5 精度試験
539.2764 μ G · mL-1 参照溶液を取り、2.2 のクロマトグラフィー条件に従ってサンプルを 6 回連続して注入し、ピーク面積を記録します。 結果 エキナセアのピーク面積の RSD は 1.81% で、機器の精度が良好であることを示しています。
2.6 安定性試験
2.0 mLを正確に測定するカンザス・デスティコラ水性抽出物、水浴中で蒸発乾固し、メタノールに溶解し、10 mL メスフラスコで一定量にし、よく振って、0.22 μ 微孔性膜でろ過し、注入する2.2 のクロマトグラフィー条件に従って、0、2、4、8、12、および 24 時間で測定用のサンプルを採取し、ピーク面積を記録します。 結果 エキナセアのピーク面積の RSD は 1.16% で、試験溶液が 24 時間以内に良好な安定性を示しました。
2.7 再現性試験
2.0 mLの水溶液を6回分正確に量るカンカデサルティコラの抽出物、2.3.2 に記載された方法に従って並行して試験溶液の 6 つの部分を準備し、2.2 に記載されたクロマトグラフィー条件に従って測定用のサンプルを注入し、ピーク面積を記録します。 結果 エキナセアの質量濃度の RSD は 1.28% で、この方法の再現性が良好であることを示しています。
カンクンデデザートコラ実験
2.8 試料添加回収試験
1.0 mLを9回分正確に量るカンザス・デスティコラ水性抽出物、{{0}}.8、1.0、および参照溶液 1.2 mL (101.552 mg · mL - 1) を加え、ウォーターバスで蒸発させ、メタノール、および mL のメスフラスコにボリュームをもたらします。 よく振って、0.22 μ m の微孔性フィルター膜を使用したフィルターを使用して、高、中、および低濃度の試験溶液を調製します。 各濃度の 3 つの部分を並行して準備し、2.2 のクロマトグラフィー条件に従って測定し、ピーク面積を記録し、サンプル中毒の回復を計算します。 結果を表 1 に示します。
2.9 サンプル含有量の決定
2.0mLを3回分正確に量るカンカの水抽出物、水浴で蒸発乾固し、メタノールに溶解し、10mL メスフラスコで一定量にし、よく振り、0.22 μ の微孔性膜でろ過し、2.2 のクロマトグラフィー条件に従って測定し、ピーク面積を記録し、エキナセアの含有量を計算します。 結果を表 2 に示します。
表1 エキナコシドの回収試験結果
表2 カンカの水抽出物中のエキナコシド含有量測定結果
3.議論
3.1 試験品の調製方法
の水性抽出物カンザス・デスティコラフェニルエタノールグリコシドや多糖類などのさまざまな化学成分が含まれており、テスト対象の成分に特定の干渉を引き起こします. この研究では、2 つの異なる濃度の溶媒、50% メタノール、およびメタノールを調査しました。 結果は、溶媒として 50% メタノールを使用した試験製品のクロマトグラムのピークの分離効果が、エキナセアと隣接する成分の間で不十分であることを示しました。 溶媒としてメタノールを使用すると、エキナセア配糖体のピークの分離が良好で、他の不純物ピークからの干渉はありません。 したがって、試験溶液の溶媒としてメタノールを選択した。 溶媒としてメタノールを使用して、カンカの水抽出物を水浴中で蒸発乾固させた。 2 つの処理方法が使用されました: メタノール溶解、定容振盪、およびメタノール超音波 (10 分) 溶解。 結果は、2 つの方法の間に有意差がないことを示しました。 この方法は、メタノール溶解と一定容量の振盪という簡単な操作により、試験溶液の調製に選択されました。
漢方香草
3.2 移動相の選択
この研究では、中国薬局方 (第 1 巻) (2015) のカンカの含有量測定に使用される移動相 (メタノール-0.1% ギ酸) を参照しました。 結果は、エキナセア グリコシドのピークが広がり、前縁現象があったことを示しました。これは、移動相の弱い溶出能力に関連している可能性があります。 関連文献 [12-13] を参照すると、アセトニトリル-0.5% 酢酸を移動相として使用しましたが、エキナセアのピーク形状が悪く、テーリング現象がありました。 移動相の pH 値を考慮して、最終的にアセトニトリル-0.4% リン酸を移動相として使用しました。 その結果、エキナセアピークの理論段数は 4000 を超え、エキナセアと隣接する成分ピーク間の分離度は 1.5 を超えました。 ピーク形状は対称で、不純物ピークによる干渉はなく、ベースラインは安定していました。 したがって、この研究では、アセトニトリル - 0.4% リン酸を、エキナセア含有量を測定するためのクロマトグラフィー移動相として使用しました。 この研究では、HPLC メソッドを使用して、カンカの水抽出物中のエキナセアを測定しました。
カンカエキス末
この方法は簡単で、正確で、再現性があります。 これは、カンカ油抽出物中のエキナセアの測定に適しており、カンカ油水抽出物の品質管理方法として使用できます。この研究では、カンカの水抽出物中のエキナセアの含有量のみを決定しました.将来、エキナセアの含有量に対するさまざまな要因の影響を調査するために、カンカデの配合煎じ薬中のエキナセアの含有量を決定し、カンカジュウを含む煎じ薬の品質管理の基準を提供する予定です。
参照：
[1] Zhong Ping Desert ginseng and cistanche [J] Forest and Human Beings, 2004, 24 (11): 25
[2] 中華人民共和国国家薬局方委員会薬局方 (パート I) [M] 北京: 中国医療科学技術プレス、2015:135-136
[3] Chen Fei, Chen Zhuo, Xing Xuefei, et al. カンカンクにおける研究の進展 [J] Drug Evaluation Study, 2013, 36 (6): 469-475
[4] Fang Jian によるカンカの薬理学的研究の進歩 [J] 光明伝統中国医学、2017 年、32 (14): 2140 - 2142
[5] Xing Xiaoxu、Liu Zhongjie、Han Bo ラットの骨芽細胞における骨形成タンパク質 2 遺伝子発現に対するカンカの水抽出物の効果 [J] China Animal畜産と獣医学、2013、40 (1): 17-21
[6] LIANG H、YU F、TONG Z、他。 骨粗鬆症疾患における血清 BGP および TRAP ならびに骨髄 Smad1 mRNA、Smad5 mRNA、TGF- 1 mRNA、および TIEG1 mRNA 発現レベルに影響を与えるカンカン草水抽出物[J]。 Molecular Biology Reports, 2013, 40 (2):757-763.
[7] Fang Hailin, Li Junkao, Yao Senming, et al Echinoside Promoting Rat Osteoblast Proliferation by Activating ERK/BMP-2 Signal Pathway [J] Grassroots Medical Forum, 2015, 19 (4): {{5 }}
[8] Tian Yuan エキナシドによって誘導される骨髄間葉系幹細胞の骨芽細胞への分化とそのメカニズムに関する研究 [D] 瀋陽: 遼寧中医薬大学、2015
[9] Wei Dawei、Ge Ziyu、Liu Yihan など、骨芽細胞への骨髄間葉系幹細胞のエキノシド誘導分化に関する研究 [J] 漢方薬理学、2017、33 (2): 48-52
[10] Tian Yubiao, Yang Guang'an, Huang Weijie, et al Determination of Echinoside and Piloside in Cistanche Deserticola Micropowder by HPLC [J] Anhui Agricultural University, 2015, 43 (3): 171-173
[11] Yang Sude、Hu Junhua、Li Jiachun、他 HPLC による総カンカ糖グリコシド カプセル中のエキノシド、ピロシド、およびイソピロシドの同時測定 [J] World Science and Technology - Modernization of Traditional Chinese Medicine、2015、17 (3) : 609-613
[12] Xu Xiaoxue カンカとその有効成分の抗骨粗鬆症効果に関する薬力学的およびメタボノミクス研究 [D] Yinchuan: 寧夏医科大学、2017
[13] Yan Yao, Meng Xinyuan, Xu Huanhuan, et al Determination of Echinoside and Piloside in Qirong Runchang Oral Liquid by High Performance Liquid Chromatography [J] Journal of Xinjiang Medical University, 2018, 41 (7): 886-888892
