脳虚血ラットの線条体細胞外液中のモノアミン神経伝達物質に対するエキノシドの影響
Mar 14, 2023
魏立力1、陳宏1、江永2、火鵬飛2、中明1、杜娟1、劉飛1、劉春陽1、王磊1
(1. 832002 新疆石河子市教育省石河子大学薬学部新疆特別植物医学重点実験室 2. 漢方現代研究センター、北京大学、北京 100083)
中国図書分類番号: R-332; R284．1; R322．81; R338．14; R743.310.531
ドキュメント ID: 記事番号: 1001-1978 (2011) 02-0174-04
概要: 目的 の効果を研究することエキノシド(ECH) 局所脳虚血ラットの線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質に関する研究、および脳に対する ECH の神経保護効果の考えられるメカニズムの調査。 方法:SDラットを無作為に対照群,モデル群,ECH高用量群および低用量群,リグストラジン(CXQ)群に分けた。 各群のラットには、対応する薬物または生理食塩水を 1 日 1 回、7 日間腹腔内投与しました。 投与３日目に、プローブスリーブが脳の線条体に埋め込まれた。 最後の投与の１時間後に、限局性脳虚血（ＭＣＡＯ）のラットモデルを作製した。 モデルが作成された後、すぐにマイクロダイアリシスが実行されました。 透析液を高速液体クロマトグラフィー電気化学検出器 (HPLC-ECD) に注入して、ノルエピネフリン (NE)、ドーパミン (DA)、5- ヒドロキシトリプタミン (5-HT)、3 の含有量を測定しました。 、4- ジヒドロキシフェニル酢酸 (DOPAC)、ホモバニリン酸 (HVA)、5- ヒドロキシ インドール酢酸 (HIAA) は、各グループの線条体の細胞外液に含まれています。 結果 コントロール グループと比較して、モデル グループの NE、DA、および 5-HT のレベルが増加し、酸性代謝物 DOPAC、HVA、および HIAA も増加しました。 モデル グループと比較して、ECH の高および低用量グループ (30、15 mg · kg - 1 · d - 1) と CXQ グループの 6 つの物質の含有量が減少しました。 結論 ECH の神経保護効果は、脳虚血後のモノアミン神経伝達物質の増加に関連している可能性があります。
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キーワード: エキノシド; 脳虚血; 線条体; HPLC-ECD; モノアミン神経伝達物質および代謝物
エキナセオシド(ECH) は、から分離精製されたフェニルエタノイド配糖体の有効成分です。カンザス・デスティコラ, 新疆の特別な植物。 研究によると、ECH には抗酸化 [1-2]、神経保護 [3-4]、アンチエイジング [5]、学習と記憶の改善 [6-8] などの神経保護効果があることが示されています。 Chen Hongらの結果。 ECH がパーキンソン病の DA ニューロンを保護する効果があることを確認した [9]. モノアミン神経伝達物質は、身体の生理活動を調節する重要な物質の一種です。組織内の含有量は、神経伝達物質の生合成、放出、取り込み、および不活性化のプロセスを反映している可能性があります [10-11]。 現在、脳虚血ラットの脳内のモノアミン伝達物質に対する ECH の影響に関する関連報告はありません。 この研究では、脳虚血ラットの線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質の含有量に対する ECH の影響を、脳マイクロダイアリシス技術を使用して調査し、脳神経保護に対する ECH の可能なメカニズムを予備的に調査しました。
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1.材料
1.1 実験動物
SDラット、♂、体重250～300g（新疆実験動物センターより購入、許可番号：2009-0053）。
1.2 医薬品および試薬
ECH は、北京大学薬学部の Tu Pengfei 教授から寄贈されました (純度 95% 以上)。 ノルエピネフリン（NE）、ドーパミン（DA）、5-ヒドロキシトリプタミン（5-HT）、3,4-ジヒドロキシフェニル酢酸（DOPAC）、ホモバニリン酸（HVA）
5-ヒドロキシインドール酢酸（HIAA）はシグマです。 注射用テトラメチルピラジン塩酸塩（CXQ、Harbin Sanlian Pharmaceutical Co.、Ltd.）; リン酸亜鉛セメント（上海医科器械有限公司の製品で、液体と粉末で構成され、時間をかけて混合されたもの）; 1-アルキル硫酸ナトリウム (DIKMA); クエン酸水和物（天津金科精密化学研究所）; クエン酸三ナトリウム（アクロス）; エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム (JTTakerChemicalco); メタノール (DIKMA); アセトニトリル (DIKMA); 脳微小透析灌流液は、化合物塩化ナトリウム注射液（北京双河製薬株式会社）です。 使用する水はすべて再蒸気水です。
1.3 計器
アメリカのBAS4100ラット脳定位装置。 CMA/12 プローブとプローブ スリーブ。 CMA/120 意識のある動物デバイス; CMA/402 マイクロポンプ; CMA/150 低温サンプル自動コレクター。 Esa 5600A 輸液ポンプ; Esa 5600A 輸液ポンプ; Esa 542 自動サンプル注入装置。 Esa の CoulArray 電気化学検出器。 グラッシーカーボン作用電極と Ag/AgCl 参照電極。 C18 カラム (DIKMA、ODS5 μ m、150mm × 4.6mm); CoulArraywin クロマトグラフィー ワークステーション (Esa 社); ボルテックスミキサー (QL-861 タイプ); デスクトップ酸度テスター (HANNA-211); 卓上高速遠心機（XYJ-2型）。
2.方法
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2.1 動物の分類と投与
30 匹のラットを無作為に 5 つのグループに分けました。 ②モデル群：生理食塩水1ml・kg-1・d-1; ③モデルプラスリグストラジン（CXQ）30mg・kg-1・d-1; ④ - ⑤ モデルと ECH 高用量群および低用量群 (ECHB、ECHS): 30、15 mg · kg-1 · d-1; 各群のすべての動物に7日間腹腔内注射した。
2.2 モデリング法とマイクロダイアリシス
各ラットは、投与の 3 日目にカニューレで埋葬されました。ラットは、BAS4100 に固定された 10% 抱水クロラール (3.5ml · kg-1) で麻酔されました。 GeorgePaxinos の「Stereotactic Map of Rat Brain "。 最後の投与の 1 時間後にラットに麻酔をかけ、Yang Zanzhang [12] の改良された Longa 縫合法を使用して、ラットを局所脳虚血モデル (MCAO モデル) にしました。 対照群は釣り糸を10mmだけ挿入し、その他の手順は操作群と同じです。 モデリング後、意識のある自由な動きの状態でマイクロダイアリシス プローブを挿入し、リンゲル液を使用して μ にします。脳のマイクロダイアリセートを 4 度で収集し、透析液のチューブを 20 分で収集しました。 透析液の各チューブを採取したら、直ちに- 20度の冷蔵庫に保管し、透析後に- 70度の冷蔵庫に移します。 使用前にプローブの回収率を測定し、透析液中のモノアミン神経伝達物質の濃度を換算しました。
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2.3 HPLC-ECD 分析
移動相構成: 移動相には、1 リットルあたり 829 ml の 0.15mol · L-1 クエン酸-クエン酸ナトリウム緩衝液が含まれています。 0.1mol · L-1 EDTA 二ナトリウム 1ml; メタノール 150ml; {{10}}アルキル硫酸ナトリウム0.283g. 移動相の流量を 0.7ml · min-1 に設定し、カラム オーブンの温度を 28 度に設定します。 電気化学検出器の動作電圧は 200mV、400mV、600mV で、それぞれ 2、3、4 チャンネルです。 ゲインは 2nA です。 注入量は25μlです。 検量線は、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5mg・L-1グラジエント混合標準液で描きます。
2.4 統計処理
実験データは x フィールド ± s で表され、繰り返し測定データは SPSS13.0 統計ソフトウェアを使用して分析されます。
図 1-6 は、ラット線条体の細胞外液中の NE、DA、DOPAC、HIAA、HVA、5-HT レベルの変化を示しています。 図から脳虚血後、線条体の細胞外液中のモノアミン系神経伝達物質が代謝異常を起こし、各神経伝達物質の含有量が増加していることが分かります。 一定の範囲内では、虚血時間の延長に伴い増加がより顕著になります。 虚血の 90 分で、線条体の細胞外液中の DA および NE の濃度は、対照群のレベルの 3 倍以上でした。 対照群の NE、DA、DOPAC、HIAA、HVA、および 5-HT のレベルは、高から低に減少しました。これは、左総頸動脈の結紮後の左脳の一時的な虚血に関連している可能性があります。プローブの挿入による損傷。 変化曲線から、ECH と CXQ は脳虚血後の DA、DOPAC、HIAA、HVA、および 5-HT のピーク濃度を低下させることができ、CXQ と高用量 ECH はより明白です。 各神経伝達物質の時間経過曲線の下方シフトは、ECH が脳虚血ラットの脳内の神経伝達物質とその代謝産物の増加を抑制できることを示しています。
図 2 ラット線条体の DA の細胞外レベルに対するエキノシドの効果
Fig3 の効果エキノシドラットの線条体における DOPAC の細胞外レベルに関する Fig4Effect ofエキノシドラットの線条体におけるHIVVの細胞外レベル
Fig5 の効果エキノシドラットの線条体における HVA の細胞外レベルに及ぼす影響エキノシドラットの5-HT線条体の細胞外レベル
4.議論
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脳虚血による脳損傷のメカニズムは複雑です。 脳虚血の場合、脳内のモノアミン神経伝達物質が乱れ、NE、DA、5-HT の含有量が大幅に減少します。 脳虚血が重症であるほど、脳組織の NE、DA、および 5-HT の含有量が低くなります [13]。 脳内マイクロダイアリシス法は、脳虚血中に細胞外液中のモノアミン神経伝達物質の含有量が増加し、虚血期間全体にわたって持続し、虚血時間の延長とともにさらに増加することを証明しました。 実験結果は報告[14]と一致した。エキノシド新疆の特別な植物であるカンカから分離精製されたフェニルエタノイド配糖体の有効成分です。 アンチエイジング、学習と記憶の改善、抗神経アポトーシスなど、多くの神経保護効果があります。. この研究では、HPLC-ECD検出技術と組み合わせた国内の高度な脳マイクロダイアリシスを使用して、エキノシド脳虚血実験ラットの線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質とその代謝物。 結果は、ECHが脳虚血によって引き起こされる線条体の細胞外液中のモノアミン神経伝達物質の増加を減少させることができ、脳虚血組織の損傷を改善するのにより良い効果があることを示しました.
参照：
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［2］ 崔崙、孫庸、鄧 TL、鄭 XX． H2O2 - 損傷 PC12 細胞に対するエキナコシドの保護効果とメカニズム［J］． Chin Pharmacol Bull,2009,25( 4) : 515 － 8．
［3］ 趙 X,Pu XP,Geng XC． 次元電気泳動分析を用いた、パーキンソン病のマウス MPTP モデルにおける黒質および線条体組織からのタンパク質発現に対するエキナコシドの効果［J］． Chin Pharmacol Bull,2008,24( 1) : 28 － 32．
［4］Koo KA、Sung SH、Park JH、他。 カリカルパ・ディコトーマ由来のフェニルエタノイド配糖体の in vitro 神経保護活性［J］． Planta Med,2005,25( 4) : 356．
［5］ Li Y,Song YY,Zhong HQ． エキナコシドが加齢マウスの免疫機能とミトコンドリア DNA 相対含有量に及ぼす影響［J］． Chin Pharmacol Bull,2010,26( 6) : 810 － 3．
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［7］ Gao C,Wang CS,Wu GZ,et al． 血管性認知症ラットの学習および記憶障害に対するカンカ配糖体の効果［J］． Chin Tradit Herb Drugs, 2005, 36( 12) : 1852．
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