ネットワーク薬理学と動物実験に基づく炎症性腸疾患に対するカンクサ総配糖体の作用機序の解明Ⅱ
Mar 29, 2024
2 試験方法
2.1 ネットワーク薬理解析
2.1.1 カンクの有効成分
既存の研究 [7、22] に基づいて、「エキナコシド」、「ベルバスコシド", "シスタノシドA", "ツブロシドA", "イソアクテオシド", "2-アセチルラクテオシド" そして "ツブロシドB上記 7 成分の三次元化学構造データを Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) で検索し、sdf 形式で保存します。
2.1.2 潜在的なターゲットの予測とスクリーニング
の三次元構造ファイルをインポートします。有効成分を PharmMapper データベースに登録(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html)。 ターゲット種として「ヒトタンパク質ターゲットのみ」を選択し、他のオプションはデフォルトのままにして、さまざまな成分の対応するデータを取得します。 対応するターゲットターゲット。
UniProt データベース (https://www.uniprot.org/) を使用して、各ターゲットに対応するタンパク質名および遺伝子名の情報を取得しました。 7 つのコンポーネントに対応するターゲット ポイントをマージします。
GeneCards データベース (https://www.genecards.org/) で、「炎症性腸疾患」をキーワードに炎症性腸疾患に関連する遺伝子を検索し、検索結果を整理します。
シスタンケ サプリメント 抗炎症サポート サプリメント PhGs75% Ech 30% Act 12%
2.1.3 タンパク質間相互作用 (PPI)
ネットワークの構築 jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) を使用してオンラインでベン図を描き、Cistanche desserticola の有効成分目標と IBD 目標の交差部分を取得します。 取得した交差ターゲットを PPI スクリーニング分析のために文字列データベースにアップロードします。 PPI ネットワークの TSV ファイルをダウンロードし、Cytoscape 3.8.0 にインポートし、タンパク質相互作用ネットワークの次数値を計算し、次数値に基づいて PPI ネットワーク図を美化します。
2.1.4 遺伝子オントロジー (GO)
DAVID データベース (https://david.ncifcrf.gov/) を使用して、機能エンリッチメントおよび京都遺伝子ゲノム百科事典 (KEGG) 経路エンリッチメント分析を実行し、IBD に対するカンクサの有効成分の保護効果のターゲットを特定しました。 GO 分析がポイントに対して実行され、次に DAVID データベースを使用して、カンクサの有効成分が IBD で保護的な役割を果たすターゲットに対して KEGG 経路濃縮分析が実行されました。
2.1.5 キスタンケ・デザートティコーラ「有効成分-標的-経路」ネットワークの構築
カンクサの有効成分、カンクサの有効成分と IBD の交差ターゲット、および KEGG によって強化された経路を使用して、有効成分-ターゲット-経路ネットワークを構築しました。
2.2 動物モデルの検証
2.2.1 動物モデルの確立
北京連合大学応用科学部健康食品試験センターより提供された SPF グレードの雄 BALB/c マウス (5 ～ 8 週、18 ～ 21 g) を使用 [実験動物使用許可番号: SYXK (北京) ) 2017-0038]、温度 (23±2) 度、相対湿度 50% ～ 70%、昼夜交互に 12 時間蛍光灯にさらした SPF グレードの動物室で飼育されました。 。 動物実験プロトコルはすべて、北京連合大学応用芸術科学部健康食品試験センターの動物実験室によって承認されました。 3 日間適応給餌した後、20 匹のマウスを体重に応じてランダムに 4 つのグループに分け、各グループに 5 匹のマウスを割り当てました。 ①対照群（CZ）：滅菌水を自由に飲み、連続7日間滅菌水を強制経口投与する。 ②DSS対照群
(DZ): 7 日間連続して毎日調製された 3% DSS 溶液を自由に飲むことができます。 ③ カンクサの総配糖体低用量群（LZ）（液濃度：0.1 g/mL）：7 日間毎日調製した 3% DSS 溶液を自由に飲む。 、液体を7日間連続で胃管栄養法で投与する。 ④ キスタンケ・デザートティコーラ総配糖体高用量群（HZ）（液濃度｛{9}｝.4 g/
mL): 新しく調製した 3% DSS 溶液を毎日自由に飲み、連続 7 日間胃管栄養法で溶液を与えます。 7 日間の連続モデリングの後、動物は 12 時間絶食され、その後頸椎脱臼によって屠殺されました。 ニワトリの赤血球は処刑の4時間前に腹腔内に注射されました。 処刑直後に眼球が摘出され、採血が行われた。 腹水を採取し、腹腔を開いた。 結腸の長さを測定し、マウスの脾臓、パイエル結節、およびその他の臓器を摘出しました。
カンキサ サプリメント 抗炎症サポート サプリメント
2.2.2 疾患活動性指数 (DAI)
毎日決まった時間に胃内投与前にマウスの体重を測定し、マウスの精神状態および糞便性状を観察した。 便潜血を測定し、それに応じて採点した。 採点基準を表１に示す。 DAI スコア=(体重スコア + 便性状スコア + 便潜血スコア)/3 (1)
表1 DAIの採点基準
2.2.3 リアルタイム蛍光定量 PCR 検出免疫シグナル経路 (qRT-PCR) 検出
マウスの脾臓を収集し、0.5 cm の組織ブロックに切断し、保存のために組織 RNA 安定化溶液に浸しました。 組織を取り出して細かく切り、RNA 抽出液を加えて粉砕し、total RNA を抽出します。 逆転写および PCR 増幅後、マウス脾臓における 2 つの重要な免疫シグナル伝達経路、mTOR および TGF-β の活性化が検出されました。 qRT-PCR で使用したプライマー配列を表 2 に示します。
表 2 プライマー配列表
