パート3:クローン犬を生産するための細胞保護剤としてのアクテオシドの効果

Mar 05, 2022

クローン犬を生産するための細胞保護剤としてのアクテオシドの効果

Ji HyeLee1☯、Ju LanChun1☯、Keun Jung Kim1、Eun Young Kim1、Dong-hee Kim1、Bo Myeong Lee1、Kil Woo Han1、Kang-Sun Park1、Kyung-Bon Lee2、Min Kyu Kim1 *

コンタクト:joanna.jia@wecistanche.com

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アクテオシドcistanche多くを持っています効果


表5.クローン犬のマイクロサテライト分析。

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表6.クローン犬のmtDNA配列。

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ドナー細胞が報告されているが、G2 / M期のドナー細胞の使用と比較して、G {{0}}/G1期のドナー細胞の使用により改善される細胞周期のG2/M期に停止すると、生存可能なクローン子豚が生まれる可能性があります[44]。 核ドナー細胞の細胞周期段階は、SCNTに続く再プログラミングイベントで重要な役割を果たします。 G 0 / G1期に停止した核ドナー細胞は、SCNT後の最初のDNA合成を効率的に開始します[28、29、45]。 細胞周期の同期を誘導するために、アクテオシドを含むさまざまな化学阻害剤が細胞周期の同期を達成するために使用されてきました[46、47]。 CDK阻害剤として、アクテオシドはG0/G1期の細胞周期同期をもたらすためによく使用されます。 Leeetal。 アクテオシドがG1期を超えた細胞周期の進行を妨げ、白血病細胞の増殖を防ぐことを報告しました。 さらに、CDKのレベルは低下しましたが、CDK阻害剤のレベルは大幅に上昇しました[38]。

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本研究では、アクテオシドの効果を他の2つの一般的な細胞同期法と比較して、SCNTの効率に対する細胞同期の効果を調査しました。 イヌの胎児線維芽細胞は、さまざまな濃度のアクテオシド、血清飢餓、および接触阻害で治療されました。 3つの治療群のG{{0}}/G1期の細胞の割合を比較しました。 血清飢餓は、G 0 / G1期の細胞周期同期に最も効果的な方法であることがわかり、アクテオシドと接触阻害の間に有意差はありませんでした。 しかし、血清飢餓は有意に高いレベルのROSを誘発しました。 以前の研究では、ROSの増加は細胞膜を損傷し、アポトーシスを誘発し、それによって胚発生の効率を低下させることが報告されています。 さらに、ROSはDNA断片化を増加させ、細胞ブロックを誘発し、ヒトとブタの胚発生を遅らせます[48–51]。 アクテオシド治療は、接触阻害と比較して、G0/G1期の細胞周期の同期に違いを示さなかった。 ただし、アクテオシドは、他の2つの細胞周期同期方法と比較して大幅に少ないROS活動を誘発しました。 さらに、アクテオシド治療は、接触阻害および血清飢餓よりも有意に少ないアポトーシスおよび壊死を誘発した。 この結果は、接触阻害よりも血清飢餓との細胞周期同期後に、より多くのアポトーシスイベントの発生を示した以前の研究とも一致しています[32、52]。 アポトーシス率の低下と同時に、アクテオシド治療群は接触阻害群よりも高い細胞生存率を示しました。 血清飢餓は、アクテオシド治療と接触阻害の両方と比較して、大量の細胞死をもたらしました。

G {{0}} / G1期での核ドナー細胞周期の同期は、SCNT胚の成功、そして最終的にはクローン動物の生産における重要なステップです。 ROSは、胚発生時の細胞死とアポトーシスの主な原因の1つと見なされてきました。 この研究では、アクテオシドを調査して、核ドナー細胞としてのイヌ胎児線維芽細胞でG0/G1期の細胞周期同期を誘導するための有用な代替方法であるかどうかを判断しました。 核ドナー細胞のアクテオシド処理による細胞周期同期の誘導は、ROSとアポトーシスを減少させ、SCNT胚のinvitro発生の改善に貢献しました。 アクトシド処理ドナー細胞を使用してクローン化された胚は代理母犬に移され、1匹の健康なクローン犬が首尾よく生産されました。これは接触阻害グループの胚では起こりませんでした。

結論として、この研究は、CDK阻害剤であるアクテオシドが核ドナー細胞として使用するためにG 0 / G1期でイヌ線維芽細胞の細胞周期同期を成功させ、また減少させることによってアポトーシスからそれらを保護することを示しました酸化ストレス。 細胞周期同期の能力と組み合わされたアクテオシドの細胞保護効果は、SCNT胚のinvitro発生能力の改善に貢献しました。 したがって、アクテオシドは、クローン動物を生産するためのクローン効率を高めるための効果的な試薬となるでしょう。

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謝辞

著者は、USDA-ARSのジョンハモンド博士の科学的提案と原稿の執筆支援に感謝します。

著者の貢献

実験の構想と設計:JHL JLC MKK 実験を行った:JHL KJK EYK DHK BMLKWHKSP。 データを分析しました:JLCKBL。 寄贈された試薬/材料/分析ツール:KJK EYK DHK BMLKWHKSP。 論文を書いた:JHLJLC。 資金調達と監督:MKK。

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