高地脳浮腫のラットに対するホンオニクサルサフェニルエタノイド配糖体の予防効果

連絡先：Audrey Hu Whatsapp / hp：0086 13880143964メール：audrey.hu@wecistanche.com

概要

目的：高地脳浮腫のラットに対するCistamncheSalsaのフェニルエタノイド配糖体の効果とメカニズムを観察すること。 方法フェニルエタノイド配糖体を予防的に投与し、高度5000mのシミュレートされた環境で高度室を使用して高地脳浮腫のラットモデルを確立しました。 ラット肺組織の病理学的変化、水分含有量、IL -6、TNF-a、MDA、および肺ホモジネート中のSODおよびGSH-Pxの酵素活性を測定しました。 結果対照群と比較して、高地脳浮腫ラットは、脳浮腫の顕著な特徴と肺の水分含有量が高いことを示した。 肺ホモジネート中のIL-6、TNF-a、およびMDAの含有量は増加しましたが、SODおよびGSH-Pxの酵素活性は大幅に減少しました。 フェニルエタノイド配糖体は、肺組織の病理学的変化を改善し、水分、IL -6、TNF-a、およびMDAの含有量を減らし、肺ホモジネートであるConcisionのSODおよびGSH-Pxの酵素活性を高めることができます。フェニルエタノイド配糖体は、高地脳浮腫を予防することができます。 そのメカニズムは、肺組織の抗炎症および抗酸化ストレスに関連している可能性があります。

キーワード：Cistanche Salsa; フェニルエタノイド配糖体; 高地脳浮腫

Cistancheフェニルエタノイド配糖体

高地脳浮腫（HACE）は、一般的に、初めて標高が3000mを超えると発生します。 これは、高度の低圧および低酸素環境への体の不適応によって引き起こされる深刻な生命を脅かす病気です。 高山病に関係しています。 、高地肺水腫は、急性高山病の3つの症状です。 高地肺水腫と比較してHACEに関する研究は少ないですが、関連する研究では、酸化ストレスと炎症がHACEの病因に重要な役割を果たしていることが示されています（P -3）。

Cistancheフェニルエタノイド配糖体（Cistanche Salsa、PhGCsからのフェニルエタノイド配糖体）は新疆Cistanche cistancheから抽出され、関連する研究により、主にエキナコシドとベルバスコシド1を含むさまざまなフェニルエタノイド配糖体の単離に成功しました。抗高度病の有効成分であるサリドロシドへの薬理学的効果。 それは、抗低酸素症、抗放射線、スカベンジングフリーラジカルなどを持っています。P-7]。 この実験では、ラットHACEモデルネットワーク91を北西部の特別な環境の人工実験室に設置し、PhGCを予防的に投与して、HACEに対する予防効果と考えられる作用機序を観察しました。

Cistancheハーブ：Cistancheフェニルエタノイド配糖体

1素材

1.1動物

実験動物ウィスターラット、SPFグレード、半雄および半雄、体重180-220 g [新江医科大学実験動物センター、動物生産ライセンス番号SCXK（新規）2011-0004、動物使用ライセンス番号SYXK（ new）2011- 0004]。

1.2装置

北西部特殊環境人工実験室（貴州鳳凰航空兵器有限公司、DY {{0}}）; 光学顕微鏡（日本ニコン社、E 200）; ティッシュスライサー（ドイツのMecang社、HM340E）; 電子天びん（メトラー・トレド計器株式会社、AL204、精度; 0.1 mg）; マイクロプレートリーダー（Bio-RAD、XMark 7M、米国）：UV分光光度計（Shanghai Lens Optical Technology Co.、Ltd.、SpectrumLab 22）; 電気加熱定温乾燥オーブン（黄石、湖北）City Medical Equipment Co.、Ltd.、SKHG -01）。

1.3試験薬

PhGC（北京大学のTu Pengfei教授、含有量：90.70％、対応する濃度の溶液を作るために蒸留水で調製）; Rhodiola Rosea Oral Liquid（Tibet Tibetan Medicine Group Co.、Ltd.、バッチ番号：120503、仕様：10 mL）; 腫瘍壊死因子-（腫瘍壊死因子-、TNF-）キット（バッチ番号：ZJAGBZAB01）、インターロイキン-6（インターロイキン-6、IL -6）キット（バッチ番号：ZIBIBZAB 02） （上海Yikesai Biological Products Co.、Ltd. Company）; ペントバルビタールナトリウム（American Amresco Company、ロット番号：20110612）; パラホルムアルデヒド（成都ケロン化学試薬工場、ロット番号：20110901）; スーパーオキシドジスムターゼ（SOD）キット（ロット番号：20130812）、マロンジアルデヒド（MDA）キット（バッチ番号：20130812）、グルタチオンペルオキシダーゼ（GSH-Px）キット（バッチ番号：20130814）（南京江城生物工学研究所）; PBSリン酸緩衝液粉末（Fuzhou Maixin Biotechnology Development Co.、Ltd.、バッチ番号：13061716）。

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2メソッド

2.1グループ化と投薬

Wistarラットはランダムに6つのグループに分けられました：通常のコントロールグループ、モデルグループ、イワベンケイ経口液剤グループ（1.78mL・kg-'）、PhGCs低用量グループ（75mg・kg-）、PhGCs中用量グループ（15 0 mg・Kg-'）、PhGCs高用量群（3 0 0mg・kg-）、各群に12匹のラット。 各グループはSPF環境で飼育されました。 正常対照群とモデル群には、蒸留水（1.0 mL / 100g）を胃内投与しました。 他のグループは、10日間連続して対応する用量に従って胃内に与えられました。 8日目に、通常の対照群を除く残りの群は、高度5 000mの高原環境をシミュレートした人工実験室に72時間保管されました。 キャビン内の高さは10m・s-'の一定速度で高度5000m（大気圧54.1kPa、酸素分圧11.52kPa）まで上昇し、その間に動物は自由に水に入って食べ、キャビンは24時間ごとに0.5時間開いています。 薬、飼料と飲料水を追加します。

2.2動物の取り扱い

各グループのラットは、キャビンを出た直後にペントバルビタールナトリウム（2％、0 .2 mL / 100g）の腹腔内注射によって麻酔され、腹部大動脈から採血され、頭蓋腔が開かれ、脳組織が開かれた。を採取し、左脳の上半分を取り出して秤量した。 パッケージは水分含有量を決定するために使用され、左脳の下半分はHE染色のために4パーセントのパラホルムアルデヒドで固定されています。 右脳の重さを量り、PBS溶液を加えて10％ホモジネートを調製し、3 000 r・min-'で10分間遠心分離し、上清を分注し、TNF-の測定の​​ために80度の冷蔵庫に保管します。 a、IIL -6、SOD、MDA、GSH-Px。

2.3脳組織病理観察

脳組織を4％パラホルムアルデヒドで完全に固定し、脱水し、包埋し、スライスし、HE染色した後、光学顕微鏡でさまざまな倍率で病理学的変化を観察し、写真を撮ります。

2.4脳の水分含有量の決定、および脳組織ホモジネートの炎症と酸化ストレスの関連する指標の決定

ブリキのホイルで包んだ脳組織をオーブン（80度、72時間）で一定の重量になるまで焼き、乾燥重量を量り、水分含有量を計算します：水分含有量=（組織重量-組織乾燥重量）/組織重量×100パーセント。 酵素結合免疫測定キットを使用してTNF-、IL -6含有量を測定し、UV分光光度計を使用してMDA、SOD、GSH-Pxを測定します。特定の手順は、指示に従います。

2.5統計分析

SPSS 16. 0ソフトウェアを分析に使用し、測定データはすべて下のプラスsで表され、データは最初に正常性についてテストされ、独立したサンプル1テストが適合グループ間の比較に使用されました。対数変換は、不適合グループに対して実行されました。 検査レベルは=0。05です。

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3結果

3.1HACEラットの脳組織の病理学的変化に対するPhGCの効果

各群のラットの脳組織の病理切片を光学顕微鏡で観察すると、脳組織の分子層、外側顆粒細胞層、椎体層細胞層、内側顆粒細胞層、および多列細胞層構造が示された。正常対照群のは明らかであり、病変は見られなかった。 モデル群では、ラットの脳組織は充血と毛細血管の浮腫であり、分子層と椎体層の細胞の浮腫は明らかであった。 PhGCs低用量群のラット脳組織分子層の血管拡張および鬱血浮腫、軽度の細胞浮腫、モデル群より少ない浮腫：PhGCs中用量群のラット脳組織部分の髄膜下血管拡張および鬱血、時には細胞浮腫、モデルグループと比較した浮腫グループは大幅に減少しました。 PhGCs高用量群の分子層には明らかな浮腫はなく、軽度の血管周囲浮腫があり、モデル群と比較して有意に減少しました。 Rhodiola Roseaグループのラットの脳組織分子層には散在性浮腫があり、散在した血管には非常に軽度の浮腫がありました。 浮腫はモデルグループと比較して有意に減少しました。 モデル群のラットの脳組織は明らかに浮腫であり、モデルが確立されていることがわかります。 PhGCとRhodiolaRoseaは、HACEモデルラットの脳浮腫の程度を軽減することができます。 結果を図1に示します。

図1異なるグループのラット脳の組織病理学的観察（HE×400）

3.2HACEラットの脳水分量に対するPhGCの影響

正常対照群と比較して、モデル群の脳組織含水量は増加し、その差は統計的に有意でした（P<0.01), indicating="" that="" the="" model="" was="" established.="" the="" brain="" tissue="" water="" content="" of="" rats="" in="" the="" low,="" medium,="" and="" high="" doses="" of="" phgcs="" and="" the="" rhodiola="" rosea="" group="" was="" lower="" than="" that="" of="" the="" model="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" tissue="" water="">

3.3HACEラットの脳組織におけるTNF-αおよびIL-6に対するPhGCの効果

正常対照群と比較して、モデル群の脳組織ホモジネート中のTNF-αおよびIIL -6の含有量は有意に増加しました（P<0.01). the="" contents="" of="" tnf-α="" and="" iil-6="" in="" the="" brain="" tissue="" homogenate="" of="" phgcs="" low,="" medium,="" and="" high="" dose="" groups="" and="" rhodiola="" rosea="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" model="" group=""><0.05), and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant.="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" brain="" tissue="" tnf-a="" and="" iil-6="" levels="" between="" the="" phgcs="" dose="" groups="" and="" the="" rhodiola="" rosea="">

3.4HACEラットの脳組織の酸化ストレスに対するPhGCの効果

正常対照群と比較して、モデル群の脳組織におけるSODおよびGSH-Px酵素活性は有意に減少し、MDA含有量は有意に増加しました（P<0.01). the="" sod="" and="" gsh-px="" enzyme="" activities="" in="" the="" brain="" tissue="" of="" the="" phgcs="" low,="" medium,="" and="" high="" dose="" groups="" and="" rhodiola="" rosea="" group="" were="" higher="" than="" the="" model="" group,="" and="" the="" mda="" content="" was="" lower="" than="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" difference="" was="" statistically="" significant=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" sod,="" gsh-px,="" and="" mda="" in="" the="" brain="" tissue="" between="" the="" phgcs="" groups="" and="" the="" rhodiola="" rosea="">

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4。議論

近年、高山病の予防と治療に関する国内研究は、革新的な大きな成果を上げており、高山病の予防と治療のための独立した知的財産権を持つ漢方薬の開発に成功しています。 例えば、チベット軍事地域によって開発されたロディオラカプセルは、軍の特別に必要な薬の承認番号を取得しており、高原病の予防と治療のための特別な薬として高原国境防衛軍で使用されています。 清海とチベットの地元製薬会社が発売したイワベンケイ経口液剤は、漢方薬の公式承認番号を取得しており、急性および慢性の高度病の予防と治療に臨床的に適しています10。 PhGCの薬理効果はサリドロシドと類似しているため、陽性対照薬として、市場で販売され使用されており、薬物基準のあるイワベンケイ経口液剤を選択しました。

多数の研究[1H12は、HACE患者のTNF-およびIL -6のレベルが上昇していることを証明しました、Zhou Qiquanetal。 [3研究によると、TNF-は血液脳関門の透過性を変化させる上で重要な役割を果たしています。 バリア透過性を高めるための重要な要素。 TNF-分泌は低酸素血症の間に増加します。 TNF-が血中で異常に増加すると、血管内皮細胞に損傷を与え、血管内皮細胞の形態変化、細胞膜およびオルガネラの損傷などを引き起こす可能性があり、アポトーシスの細胞内シグナルがアポトーシスを誘導するとしても使用できます。血管内皮細胞の増殖、エンドセリン（ET -1）の産生を促進し、血管壁の損傷を悪化させ、IIL-614の分泌を促進する効果があります。

低酸素症は、急性高山病の発生につながる重要な要因であると考えられています。 低酸素症によって誘発される酸化ストレス応答は、脳動脈性高血圧症および血管漏出において重要な役割を果たします。 局所的なフリーラジカルは、血管の損傷を引き起こすことに関与しています。 脳血管障害と体液漏出の増加は、脳浮腫を引き起こす可能性があります13i4。 周冠宇他 [7研究によると、酸素フリーラジカルはHACEの形成に重要な役割を果たし、高地環境での血液脳関門の透過性を高める重要な要因であることが示されています。 低酸素環境では、フリーラジカルとMDAが大幅に増加しますが、抗酸化酵素の機能はダウンレギュレーションされます。 したがって、抗酸化酵素の機能の低下と脂質過酸化損傷の増加は、急性高山病の病因に重要な意味を持っている可能性があります。 MDAは、過酸化脂肪酸の分解によって生成され、生体系で最も一般的に測定される脂質過酸化生成物です。 体内の抗酸化酵素には、SOD、GSH-Pxなどがあり、スーパーオキシドフリーラジカルと過酸化水素を直接除去するか、それらをより活性の低い物質に変換して防御的な役割を果たします。 そのため、脳組織ホモジネートでSOD、MDA、GSH-Pxを検出しました。

この実験では、正常な対照群と比較して、HACEモデル群の脳組織ホモジネート中のTNF-αおよびIIL -6の量が有意に増加し、SOD、GSH-Px酵素の活性が低下し、 MDAの含有量が大幅に増加したこれは、ラットの低酸素誘発性酸化ストレス機能障害と炎症がHACEの形成に関与していることを示しています。 PhGCの予防投与は、脳浮腫のラットの脳組織の水分含有量を減らし、脳組織浮腫の病理学的変化を大幅に改善することができ、HACEの発生を防ぐ効果があることを示しています。 PhGCは、低酸素時にラットの脳組織のSODとGSH-Pxを増加させる可能性があります。 酵素活性は、低酸素症によって引き起こされる脳組織のMDAの含有量を減らします。 PhGCs予防投与群のラットの脳組織におけるTNF-およびIL-6の含有量は、モデル群の含有量よりも有意に低く、抗酸化ストレスおよび抗炎症が予防および治療である可能性があることを示唆しています。 PhGCsの1つ高度の病気のメカニズムの1つ。 この実験の結果に基づくと、中用量群のPhGCの効果は高用量群よりもわずかに優れていますが、その差は統計的に有意ではありません。 関連する文献は、PhGCが肝臓の薬物酵素誘導物質であると報告していません。これは、薬物が肝臓の薬物酵素活性の増加を誘発し、自己代謝を加速する可能性を排除することができます。 考えられる理由は、薬物の濃度が増加するにつれて、体内の薬物の濃度が用量効果関係の範囲を超えることであると推測されます。 中用量では、体内の受容体がすべて占有され、受容体が飽和しているため、高用量の効果が継続的に増加することはなく、薬物は胃の糖を加水分解する可能性のある配糖体であり、濃度が高すぎる場合、粘度の増加は薬物の効果的な吸収を制限します。

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