Citanche Deserticola のフェニルエタノール配糖体と多糖類の定性分析

秦行き1,2,蘇美峰1,2,羅小梅2 ,王暁明2 , 徐栄2 ,チャン・シャオヤン2 ,チェン・ジュン2 ,シユエ2 （1.北京中医薬大学、北京100029、中国;2.中国医学院薬用植物開発研究所科学と北京連合医科大学、北京100193、中国）

概要：目的:砂漠中のフェニルエタノイド配糖体の含有量を定性的に分析するシスタンケUPLCによる異なる生息地からの原油の分子量分布の決定MALLSによる多糖類、イオンクロマトグラフィーによる単糖組成の測定、砂漠の本質的な品質の違いを比較しますシスタンケ、補償範囲を提供します砂漠の評価カンクイ. メソッド:UPLC クロマトグラフィー条件:カラム:WatersUPLCの取得®BEH C18（2.1mm×100mm、1.7μm）;移動相:アセトニトリル（A）-0.1%ギ酸水（B）、グラジエント溶出条件: 0-8分、2パーセントA;8-16分、12パーセントA;16-19分、16 パーセント A;19-22 分,16 パーセント -22 パーセント A;22-25 分,19 パーセント A;25-30 分,19 パーセント -25 パーセント A;{ {9}}最小、25 パーセント A;32-35 min,25 パーセント -30 パーセント A;35-38 min,30 パーセント -40 パーセント A;38-40 min,40 パーセント -50 パーセント A . イオンクロマトグラフィー分離条件:カラム:分析カラム:Carbo PacTMPA20（3mm×150mm）分析用;溶離液：250mmol・L-1NaOHと1mol・L-1NaAC、グラジエント溶出条件:A は水、Bは250ですミリモル・L-1NaOH,Cは1mol・Lです-1NaAC;{{0}} 分、94 パーセント A、6 パーセント B、0C;20-20.1 分、89 パーセント A、6 パーセント B、5 パーセント C;20.1-35 分、74 パーセント A、6 パーセント B、20 パーセント C;35.1-45 分、20 パーセント A 、80パーセントB、0C;45.1-55分、94パーセントA、6パーセントB、0C。 MALLS測定条件：カラム：TSK Gel G4000PWxl、移動相:0.1 mol·L-1塩化ナトリウム溶液、流量:0.5 mg・分-1、注入量:200μL、サンプル濃度：1mg・mL-1. 結果：異なる起源を統合することにより、シスタンケデスティコーラUPLC フィンガープリントのピーク面積、5 つのフェニルエタノイド配糖体のピーク面積の取得、および相互比較;MALLS を使用して粗分子量と分布を検出からの多糖類カンクイ、イオンにより7種類の単糖が検出されましたクロマトグラフィー。結論:UPLC の結果は、フェニルエタノール グリコシドの含有量を示しました。作物が異なれば、人工栽培も異なりますシスタンケ秋に収穫すると含有量が多くなり、MALLSの結果は、分子量、分布、単糖組成が異なることを示しました。多糖類の量が違いました。

キーワード:カンクイ;フェニルエチルグリ​​コシド;多糖類;分子量;単糖類

荒漠肉苁蓉（カンクイYCMa）として列当科多年寄生植物,具有补肾壮阳,润肠通便,延缓 衰老,消除疲劳,提高免疫力,保肝护肝等功效,被 下入《中华本草express《中华人民共和国药典express等医药名》录.荒漠肉苁蓉在内蒙古,新疆,宁夏等地均有分 布[1],其主要有效成分为苯乙醇苷类和多糖类成分. 从现有的文献报道看,对荒漠肉苁蓉中苯乙醇苷类 成分的研究相对较多,包括指纹图谱的建立,含量的 测定,单体的分离及其生物活性[2-3],而对其多糖类 成分の研究は比較的少ない。荒漠肉苁蓉的苯乙醇苷类成分进行定性分析,运用 モール[4]测定其多糖分子量与分布,同时运用离子 色谱测定其单糖与糖醛酸组成,3方面综合考察荒 漠肉苁蓉的内在质量并比较其差异,为荒漠肉苁蓉 的科学开发与种植提供参考依据. 1 材料 

1.1 药材来源 

收集以下产地荒漠肉苁蓉,经中国医学科学院 药用植物研究所徐荣副研究员鉴定,均为列当科肉 苁蓉属,药材详细信息见表 1

表 1 样品详细信息

1.2 仪器与试剂 

1.2.1 仪器 

Acquity UPLCTM システム（米国 Waters Corp.）;DIONEX ICS-3000 USA（アメリカ戴安公司）;多角度激光检测器（Wyatt Technology DAWN EOS、18角）度）;METTLER-AB135 十万分之一電子分析日平（スイス、メッター・トレド）;RE-2000A 旋转蒸器（上海亚荣生化仪器厂）;KQ-250DE 型数控超音波清洗器（昆山市超音波仪器有限公司）;Milli-Qアドバンテージ A10 超纯水系统（美国密里博公司）。

1.2.2 试剂 

乙腈:色谱纯（Honeywell Burdick & Jackson,米国）;酢酸:色谱纯（Dikma Technologies Inc.、北京）;屈臣氏饮用水（广州屈臣氏食品饮料有）限公司）;氯化钠（国药集团化学试剂有限公司,批 号:201​​60706）;氢 氧 化钠（Sigma-Aldrich、批号:STBD9065V）;無水酢酸钠（Sigma-Aldrich、批番号:H1608071）;3氟乙酸（日津市光复精细化工研究 所）;超纯水,其他试剂均为分析纯常规试剂. 

1.2.3 中药对照品 

松果菊苷（纯度:98.88パーセント、批番号:MUST-17030701）;2'-乙酰毛蕊花糖苷（纯度:99.28パーセント、批番号:MUST-17031504）;管花苷A（纯度:98.57パーセント、批号:MUST-16080111）;毛蕊花糖苷（纯度:99.57パーセント、批番号:MUST-17020715）;异毛蕊花糖苷（纯度:99.77 パーセント 、批号:MUST-17041816）、均购自成都曼思特生物科技有限公司. 2 方法 2.1 供试品溶液的制备 2.1.1 苯乙醇苷浸膏及粗多糖的制备 

将異产地荒荒肉苁蓉分别用70パーセントエチル醇回流提取3次,每次1 h,趁热过滤,合并滤液浓缩,真空 干燥得到醇提物,备用;药渣用水提取2次,每次 2時間、熱濾過、混合濾液、80パーセントのエチルエチル沈降により粗大生成物が得られる糖. 

2.1.2 苯乙醇苷样品的制备 

別名上記苯エチル醇苷浸膏各30mgを2mLに溶解（{{0}}.1 パーセント メチル 酸）水 - エチル 腈（9∶1）、約 0.22 μm 膜、得供试品溶液. 

2.1.3 多糖样品的制备 

上記粗多糖をそれぞれ10 mgずつ取り出し、0.1 mol・Lに可溶-1 氯化钠溶液,供分子量分析. 

2.1.4 单糖水解液的制备[5-7] 

それぞれ多糖サンプル１０ｍｇを加水分解管に採取し、加える。4 モル・L-13N酢酸 4 mL、加湿 1 分間チューブ内空気を排出气、旋紧螺旋盖、120度の水解で2時間、冷却を待った後氮气吹干水解液,除去过量的3氟乙酸,加超纯水定容至 10 mL。相数倍に希釈後、0.2 μm の膜を濾過して得た。

2.2 色谱条件 

2.2.1 UPLC 色谱条件色谱柱:Waters Acquity UPLC®BEH C18（2.1mm×100 mm、1.7 μm）;流動相:エチル腈（A）-0.1パーセント甲酸水（B）;流速0.3 mL・min-1;进 样 体 积:2μL; 柱 温:30 度;段階度洗脱条件:0~8 分、2 パーセント A;8~16分、12パーセントA;16~19分、16パーセントA;19~22分、16 パーセント ～ 22 パーセント A;22 ～ 25 分、19 パーセント A;25 ～ 30 分、19% ~25% A;30~32分、25 パーセント A;32 ～ 35 分、25 パーセント ～ 30 パーセント A;35 ～ 38 分、30 パーセント ～ 40 パーセント A;38 ～ 40 分、40% ～ 50% A.

2.2.2 离子色谱分析条件 

色谱柱:分析柱:Carbo PacTMPA20（3mm×150mm）；リンパ洗浄液：250mmol・L-1氢氧化钠溶液和 1mol・L-1醋酸钠溶液；流速：0.5 mL・min-1;进样体 积:10 μL;カラム温度:35 度;检器:脉冲安培養检器、金電気勾配洗浄条件:A は水、B は 250 mmol/L酸化钠溶液、C：1mol・L-1醋酸钠溶液;0~20分、94% A、6% B、0 C;20~20.1 分、89% A、6% B、5% C;20.1~35分、74パーセントA、6パーセントB、20パーセントC;35.1~45分、20パーセントA、80 パーセント B、0 C;45.1~55 分、94 パーセント A、6 パーセント B、0 C。

2.2.3 多角度激光光散射仪条件 

色谱柱:TSK Gel G4000PWxl;流相:0.1 mol・L-1 酸化钠溶液；流速：0.5 mL・min-1;进样量:200 μL; 样品濃度:1 mg・mL-1. 

2.3 苯乙醇苷类定性检测方法学考察 

2.3.1 精密度试验 

取内蒙样品在"2.2.1"色谱条件下连续进样 6 次,以 5 个特征峰（R1~R5）为指标,以 R1 为参照峰,计算其相对保留时间和相对峰面积.

2.3.2 稳定性试验 

测 定 16 种 样 品 在 0,14,28 h 后,5 个 特 征 峰 （R1~R5）的相对保留时间和相对峰面积.

2.3.3 重复性试验 

同一产地样品各制备 5 份,在"2.2.1"色谱条件 下分析,以 5 个特征峰（R1~R5）为指标,以 R1 为参 照峰,计算其相对保留时间和相对峰面积. 

3 结果 

3.1 苯乙醇苷类定性检测方法学结果 

3.1.1 精密度试验结果 

计算结果显示各特征峰相对保留时间及相对 峰面の RSD 値はいずれも 3% 未満であり、精度が良好であることを示しています。

3.1.2 稳定性试验结果 

在"2.2.1"色谱条件下,16 种样品在 0,14,28 h その後の各特徴ピークの相対保持時間および相対ピーク面の RSD値はいずれも 3 パーセント未満で、16 個の製品の安定性が良好であることを示しています。

3.1.3 重复性试验结果 

取各特征峰（R1~R5）的相对保留时间及峰面 RSD を計算すると、結果は RSD 値がすべて 3% 未満であることを示し、品目を示しました。重现性良好. 

3.2 不同产地荒漠肉苁蓉指纹图谱相似度评价 

「２．１．２」で得られた供給品溶液をＵＰＬＣ色相にかける条件下进行分析,所得结果导入《< 中华人民共和国 药典 > 指纹图谱類似度评价系统 A版特急、建立对照图谱,见图 1,根据谢洁娜等[8]的研究,我们推测保留时 時間は5分ほどで左右に出ます4つの小峰は国产荒荒肉苁蓉的特征峰.

指纹图谱相似度结果[9-11]见表 2,分析可知,不 同批次间荒漠肉苁蓉相似度差异较大,其中且末 1, 且末 2,于田 2,阿拉善西部指纹图谱相似度较高,均 高于 0.9,其次为木垒,为 0.89,,其余产地相似度均 低于 0.5.

注:R1:松果菊苷;R2:毛蕊花糖苷;R3:管花苷 A;R4: 异毛蕊花糖苷;R5.2' 乙酰毛蕊花糖苷

图 1 荒漠肉苁蓉对照图谱 

表 2 荒漠肉苁蓉指纹图谱相似度结果

3.3 不同产地荒漠肉苁蓉苯乙醇苷类成分相对含量 分析 

将制好的供试液样品在"2.2.1"项色谱条件下 分析により、松菊果苷、毛蕊花糖苷、16 個の UPLC 図が得られました。管花苷 A,异毛蕊花糖苷和 2'- 乙酰毛蕊花糖苷为特 征峰进行比较,见图 2~ 图 3.

3.3.1 新疆不同产地荒漠肉苁蓉不同采收季节（春, 秋）苯乙醇苷类成分相对含量分析 

如图 2 所示,于田 2,且末 1,且末 2 为秋季采收, 其余产地为春季采收,5 种苯乙醇苷含量分布中,秋 季采收含量明显高于春季,这与庞金虎等[12]研究结 论相一致.这是由于经过春夏秋的旺盛生长,初秋 开始,肉苁蓉地下根茎的营养物质开始积累,有效成 分含量增高,且秋季气候低温干燥,有助于药材前处 理,所以秋季采收时间为 10 月下旬至 11 月上旬.另 外,春季采收应在 3 月下旬至 4 月上旬,防止抽薹营 养物质的消耗.此外,来自于新疆和田博远基地,且 末治沙站,阿克苏沙雅的肉苁蓉样品为鲜品,5 种苯 乙醇苷含量很低,说明药材采收后,干燥过程对有效 成分的积累有较大的影响[13].

图 2 新疆荒漠肉苁蓉不同采收季节苯乙醇苷类成分分布

3.3.2 新疆不同产地野生与人工栽培荒漠肉苁蓉苯 乙醇苷类成分相对含量分析 

如图 3 所示,奇台及木垒为野生样品,其余产地 均为栽培样品,人工栽培荒漠肉苁蓉中,采自且末 1,且末 2,于田 2 的 5 种苯乙醇苷相对含量均高于野 生,其余采自哈密,精河等地的与野生相比,5 种苯 乙醇苷分布各有差异,无明显规律.其中松果菊苷 与毛蕊花糖苷的变化与黄晶[14],徐荣等[15]的研究发 现略有差异,这可能由于采样地点的不同,以及肉苁 蓉的生长环境,寄主梭梭生长情况,肉苁蓉生长年 限,种子质量等各方面的差异所造成.

图 3 新疆不同产地野生与人工栽培荒漠 肉苁蓉苯乙醇苷类成分分布

3.3.3 内蒙及宁夏苯乙醇苷类成分相对含量分析 

如图 4,阿拉善左旗沙漠与右旗沙漠样品为野生肉苁蓉,但阿拉善右旗苯乙醇苷含量显著高于左 旗含量,经回访,阿拉善右旗沙质污染少,且肉苁蓉 生长年限约为 5~10 年,以及寄主梭梭的生长状况不 同,都可能是引起苯乙醇苷含量差别较大的原因. 且观察 16 种产地苯乙醇苷分布图发现,酒制后苯乙 醇苷含量呈现最低,这可能因为,在炮制过程中,高 温高压以及酒制时间的长短都会引起苯乙醇苷类含 量的降低[16].

图 4 内蒙及宁夏苯乙醇苷类成分分布

3.3.4 不同产地荒漠肉苁蓉粗多糖分子量及其分布 

将"2.1.3"项下制得供试样品,用多角度激光散 射仪在"2.2.3"条件下进行分子量的测定,结果见表 3.分析表 3,不同产地荒漠肉苁蓉多糖分子量大小 与分布均有差异,采自新疆木垒,阿克苏沙雅,内蒙 阿拉善左旗,右旗及同仁堂的样品分子量出现均一 性分布（除阿克苏沙雅,同仁堂样品外其余产地样品 均为野生）,进一步观察表 3 发现,除新疆和田博远 基地样品外,春季采收的样品分子量分布较秋季更 加集中,所以,我们推测样品的来源,采收季节与多 糖分子量的分布有关.

此外,肉苁蓉酒制后多糖样品分子量也偏小, 酒制是否会影响多糖的分子量大小及分布,需要进 行更加深入细致的试验. 

高云佳等[17]研究表明,肉苁蓉寡糖为润肠通便 的药效物质之一,而不同分子量段的多糖,其抗氧化 活性,抗衰老活性及降血糖作用差异明显[18-22],可为 肉苁蓉寡糖的制备及后续药效活性研究提供参考依 据.