Citanche Deserticola のフェニルエタノール配糖体と多糖類の定性分析
Apr 14, 2023
QIN Wenting1,2,SU Meifeng1,2,LUO Xiaomei2 ,WANG Xiaoming2 , XU Rong2 ,CHANG Xiaoyan2 ,CHEN Jun2 ,SHI Yue2 （1.北京中医薬大学、北京100029、中国; 2.中国医学科学院薬用植物開発研究所および北京連合医科大学、北京100193、中国）
概要:目的:UPLCにより異なる生息地からの砂漠Cistancheのフェニルエタノイドグリコシドの含有量を定性的に分析する;MALLSにより粗製多糖類の分子量分布を決定する,イオンクロマトグラフィーにより単糖組成を決定する,そして砂漠の本質的な品質の違いを比較するシスタンケ、砂漠のシスタンケdeserticolaの総合評価を提供します。 メソッド:UPLCクロマトグラフィー条件:カラム:Waters Acquity UPLC® BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）、移動相:アセトニトリル（A）-0.1パーセントギ酸水（B）、グラジエント溶出条件: 0-8 min、2% A; {{10}} min、12% A; 16-19 min、16% A; 19-22 min,16 パーセント -22 パーセント A;22-25 min,19 パーセント A;25-30 min,19 パーセント -25 パーセント A;30-32最小、25 パーセント A; 32-35 分,25 パーセント -30 パーセント A;35-38 分,30 パーセント -40 パーセント A;{{30}} 分,40 パーセント -50 パーセント A. イオンクロマトグラフィー分離条件:カラム:分析カラム:Carbo PacTMPA20（3 mm×150 mm）分析; 溶離液:250 mmol・L-1 NaOH および 1 mol・L-1 NaAC、グラジエント溶出条件:A は水、B は 250 mmol・L-1 NaOH、C は 1 mol・L-1 NaAC;0-20 分、94 パーセント A、6 パーセント B、0C;20-20.1 分、89 パーセント A、6 パーセント B、5 パーセント C;20.{{ 54}} 分、74 パーセント A、6 パーセント B、20 パーセント C;35.1-45 分、20 パーセント A、80 パーセント B、0 C; 45.1-55 分、94 パーセント A、6 パーセント B、0C。 MALLS測定条件：カラム：TSK Gel G4000PWxl、 移動相:0.1mol・L-1塩化ナトリウム溶液、流速:0.5mg・min-1、注入量:200μL、サンプル濃度:1mg・mL-1。 結果:カンクサの異なる起源のUPLC指紋ピーク面積を積分することにより,5つのフェニルエタノイドグリコシドのピーク面積を取得し,相互に比較した。MALLSを使用してカンクサからの粗多糖類と7種類の単糖の分子量と分布を検出した。イオンクロマトグラフィーで検出されました。 結論:UPLCの結果は、異なる作物のフェニルエタノールグリコシドの含有量が異なることを示し、秋の収穫時にカンクの人工栽培では含有量が高く、MALLSの結果は、多糖類の分子量、分布および単糖組成が異なることを示した。
キーワード:カンクサ;フェニルエチルグリコシド;多糖類;分子量; 単糖類
Citanche desserticola YC Ma は、Orobaceae 科の多年生寄生植物です。 腎臓を強化して陽を強化し、腸に潤いを与えて便通を促進し、老化を遅らせ、疲労を解消し、免疫力を高め、肝臓を保護する機能があります。 「中国マテリアメディカ」や「中華人民共和国薬局方」などの医学リストに記載されています。 Desert Cistanche desserticola は内モンゴル自治区、新疆ウイグル自治区、寧夏回族自治区などに分布しており [1]、主な有効成分はフェニルエタノール配糖体と多糖類です。
フェニルエタノール配糖体はCistanche desserticolaの主な有効成分です
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既存の文献報告によると、砂漠のデザートティコーラのフェニルエタノールアミン配糖体については、指紋の確立、含有量の決定、モノマーの分離、生物学的活性など、比較的多くの研究が行われています[2-3]。その多糖類の成分。 この記事では、UPLC を使用して、さまざまな起源の砂漠の砂漠に含まれるフェニルエタノールアミン グリコシドを定性分析します。 MALLS [4] は多糖類の分子量と分布を決定するために使用され、イオンクロマトグラフィーは単糖類とウロン酸組成を決定するために使用されます。 砂漠のデセールティコーラの内部品質を包括的に検査し、その差異を比較し、砂漠のデセールティコーラの科学的開発と植栽のための参考基盤を提供します。
キスタンケ・デザートティコーラ YC Ma
1 材料
1.1 医薬品原料の供給源
中国医学アカデミー薬用植物研究所の徐栄准研究員によって特定された以下の原産地から収集されたカンカは、すべてオロバンカ科カンカ属に属します。 医薬品原料の詳細については、表1を参照してください。
表 1 サンプルの詳細
1.2 機器と試薬
1.2.1 機器
Acquity UPLCTM システム（米国ウォーターズ社）; ダイオネックス ICS-3000 米国; マルチアングルレーザー検出器 (Wyatt Technology DAWN EOS、18 アングル); METTLER-AB135 電子分析天びん (メッター・トレド、スイス); RE-2000ロータリーエバポレーター (上海亜栄生化学機器工場); KQ-250DE CNC 超音波洗浄機 (昆山超音波機器有限公司); Milli-Q Advantage A10 超純水システム (ミリポア、米国)。
1.2.2 試薬
アセトニトリル: 色的に純粋 (Honeywell Burdick&Jackson、米国)。 ギ酸：クロマトグラフィー的に純粋（Dikma Technologies Inc.、北京）。 ワトソンズ飲料水 (広州ワトソンズ食品飲料有限公司); 塩化ナトリウム (中国国家医薬集団化学試薬有限公司、バッチ番号: 20160706); 水酸化ナトリウム (Sigma Aldrich、バッチ番号 STBD9065V); 無水酢酸ナトリウム（Sigma Aldrich、バッチ番号 H1608071）。 トリフルオロ酢酸 (天津光復精密化学研究所); 超純水、その他の試薬はすべて分析用に純粋な従来の試薬です。
カンクサの実験
1.2.3 漢方薬参考資料
エキノシド (純度: 98.88 パーセント、バッチ番号: MUST-17030701); 2 '- アセチルピロシド (純度: 99.28 パーセント、バッチ番号: MUST-17031504); Guanhua 配糖体 A (純度: 98.57 パーセント、バッチ番号: MUST-16080111); マオルイ花配糖体 (純度: 99.57 パーセント、バッチ番号: MUST-17020715); イソピロシド (純度: 99.77 パーセント、バッチ番号: MUST-17041816)、すべて Chengdu Mansit Biotechnology Co., Ltd. から購入 2 方法 2.1 試験溶液の調製 2.1.1 フェニルエタノールの調製2 配糖体抽出物と粗多糖類
70% エタノール還流を 3 回 (毎回 1 時間) 使用して、さまざまな生息地から砂漠のデザートコラを抽出します。 熱いうちに濾過し、濾液を合わせて濃縮し、真空乾燥してエタノール抽出物を得て、脇に置きます。 薬剤残留物を水で２回、各回２時間抽出し、熱いうちに濾過し、濾液を合わせ、８０％エタノールで沈殿させて粗多糖類を得る。
2.1.2 フェニルエタノイド配糖体サンプルの調製
上記の各フェニルエタノイド配糖体抽出物 30 mg を秤量し、水アセトニトリル (9:1) 2 mL (0.1% ギ酸) に溶解し、0.22 μM を加えます。フィルター膜を濾過し、試験溶液を得る。
2.1.3 多糖類サンプルの調製
上記の粗多糖類 10 mg をそれぞれ秤量し、分子量分析のために 0.1 mol・L-1 塩化ナトリウム溶液に溶解します。
2.1.4 単糖加水分解物[5-7]の調製
多糖類サンプル 10 mg を加水分解チューブに別々に量り、4 mol・L-1 トリフルオロ酢酸 4 mL を加え、窒素で 1 分間満たしてチューブ内の空気を排気し、スクリューキャップを締めます。 、１２０度で２時間加水分解し、放冷し、加水分解溶液を窒素ガスで乾燥して過剰のトリフルオロ酢酸を除去する。 超純水を加えて10mLに定容します。 対応する倍数に希釈した後、0.2μのメンブレンで濾過して作製した。
2.2 クロマトグラフィー条件
2.2.1 UPLC
クロマトグラフィー条件 クロマトグラフィーカラム: Waters Acquisition UPLC ® BEH C18（2.1 mm × 100 mm、1.7 μm）; 移動相: アセトニトリル (A) -0.1 パーセントのギ酸水 (B); 流量 0.3 mL · 分-1; 注入量：2μL。 カラム温度: 30 度; グラジエント溶出条件: 0-8 分、2 パーセント A; 8~16分、12パーセントA; 16~19分、16パーセントA; 19 ～ 22 分、16 パーセント ～ 22 パーセント A; 22~25分、19パーセントA; 25 ～ 30 分、19 パーセント ～ 25 パーセント A; 30~32分、25パーセントA; 32 ～ 35 分、25 パーセント ～ 30 パーセント A; 35~38分、30パーセント~40パーセントA; 38 ～ 40 分、40 パーセント ～ 50 パーセント A.
2.2.2 イオンクロマトグラフィーの分析条件
クロマトグラフィー用カラム： 分析カラム：Carbon PacTMPA20（3 mm × 150 mm）、洗浄液：250 mmol・L-1水酸化ナトリウム溶液および1 mol・L-1酢酸ナトリウム溶液; 流量: 0.5 mL・min-1; 注入量: 10 μ L; カラム温度: 35 度; 検出器: パルスアンペア検出器、金電極 グラジエント溶出条件: A は水、B は 250 mmol/L 水酸化ナトリウム溶液、C は 1 mol・L-1 酢酸ナトリウム溶液、0 ～ 20 分、94 パーセント A 、6パーセントB、0℃; 20～20.1分、89パーセントA、6パーセントB、5パーセントC; 20.1～35分、74パーセントA、6パーセントB、20パーセントC; 35.1～45分、20パーセントA 、80パーセントB、0℃; 45.1~55分、94パーセントA、6パーセントB、0℃。
2.2.3 マルチアングルレーザー光散乱装置の条件
クロマトグラフカラム: TSK Gel G4000PWxl; 移動相: 0.1 mol・L-1 塩化ナトリウム溶液; 流量: 0.5 mL · 分-1; 注入量：200μL。 サンプル濃度: 1 mg · mL-1。
2.3 フェニルエタノール配糖体の定性的検出方法の研究
カンクサの主な化学成分
2.3.1 精度試験
内モンゴルのサンプルを採取し、「2.2.1」のクロマトグラフィー条件下で6回連続注入します。 5 つの特徴的なピーク (R1 ～ R5) を指標として使用し、R1 を参照ピークとして使用して、それらの相対保持時間と相対ピーク面積を計算します。
2.3.2 安定性試験
0、14、および 28 時間後の 16 サンプルの 5 つの特徴的なピーク (R1 ～ R5) の相対保持時間と相対ピーク面積を測定します。
2.3.3 再現性試験
同じ起源から 5 つのサンプルを準備し、「2.2.1」クロマトグラフィー条件下で分析します。 5 つの特徴的なピーク (R1 ～ R5) を指標として使用し、R1 を参照ピークとして使用して、それらの相対保持時間と相対ピーク面積を計算します。
3 件の結果
3.1 フェニルエタノール配糖体の定性的検出方法の結果
3.1.1 精度試験結果
計算結果は、各特徴的なピークの相対保持時間と相対ピーク面積の RSD 値が 3 パーセント未満であり、精度が良いことを示しています。
3.1.2 安定性試験結果
「2.2.1」のクロマトグラフィー条件下では、0、14、および 28 時間後の 16 個のサンプルの特性ピークの相対保持時間と相対ピーク面積の RSD 値はすべて 3 パーセント未満でした。 16 個のサンプルの安定性が良好であることを示しています。
3.1.3 再現性試験結果
各特徴的なピーク (R1 ～ R5) の相対保持時間とピーク面積を取得して、RSD を計算しました。 結果は、RSD 値がすべて 3% 未満であることを示し、サンプルの再現性が良好であることを示しています。
3.2 異なる地域の砂漠のカンクンの指紋の類似性の評価
The test solution prepared in item "2.1.2" was analyzed under UPLC chromatography conditions, and the obtained results were imported into the "Pharmacopoeia of the People's Republic of China>図 1 に示すように、「指紋類似性評価システム バージョン A」を使用してコントロール スペクトルを確立しました。Xie Jiena らによる研究 [8] に基づいて、約 5 分の保持時間で表示された 4 つの小さなピークが存在すると推測されます。国産の砂漠のカンクンの特徴的な峰です。
指紋スペクトル [{{0}] の類似性の結果を表 2 に示します。分析の結果、Qiemo 1、Qiemo 2、Yutian 2、および異なるバッチ間で砂漠の砂漠の類似性に大きな違いがあることがわかりました。そして西部のアルクサは類似度が高く、すべて 0 よりも高い。 2 番目に類似度が高いのは Mulai で、0.89 ですが、他の起源の類似度は 0.5 未満です。
注: R1: エキナセチン。 R2: マオルイの花配糖体。 R3: アントシアニン A; R4: イソピロシド; R5.2「アセチルピロシド」
図1 砂漠のキスタンシュの比較地図
表 2 砂漠キスタンケ指紋の類似性結果
3.3 異なる生息地からの砂漠のカンザスにおけるフェニルエタノイド配糖体の相対含有量の分析
調製した試験溶液サンプルを「2.2.1」のクロマトグラフィー条件で分析し、16 個の UPLC プロットを取得します。 図 2 ～ 3 に示すように、エキナコシド、プールサイド、アントシアニン A、イソピロシド、および 2'-アセチルピロシドの特徴的なピークを比較してください。
3.3.1 異なる収穫期（春と秋）における新疆のさまざまな地域からの砂漠のキスタンシュ中のフェニルエタノイド配糖体の相対含有量の分析
図2に示すように、Yutian 2、Qiemo 1、Qiemo 2は秋に収穫されますが、他の産地では春に収穫されます。 5 種類のフェニルエタノールアミン配糖体のうち、秋に収穫される含有量は春よりも大幅に多く、これは Pang Jinhu らの研究結論と一致しています。 [12]。 これは春、夏、秋に生育が活発なためです。 秋口からカンクの地下根や茎に栄養が蓄積され始め、有効成分の含有量が増えます。 さらに、秋の気候は低く乾燥しているため、医薬品の前処理に適しています。 そのため、秋の収穫時期は10月下旬から11月上旬となります。 また、春収穫は、抽薹時の養分消費を防ぐため、3月下旬から4月上旬に行います。 さらに、新疆の和天博源基地、キエモ砂漠管理所、およびアクスシャヤから採取されたキスタンケ・デザートティコーラのサンプルは新鮮であり、5種類のフェニルエタノールアミン配糖体の含有量は低レベルであり、乾燥プロセスが乾燥後の有効成分の蓄積に重大な影響を与えることを示しています。薬草が収穫される[13]。
図 2 新疆ウイグル自治区の砂漠キスタンケ デザートティコラにおけるさまざまな収穫期におけるフェニルエタノールグリコシドの分布
3.3.2 新疆ウイグル自治区のさまざまな地域で採取された野生および人工栽培されたデザート デスティコラにおけるフェニルエタノイド配糖体の相対含有量の分析
図 3 に示すように、Qitai と Mulei は野生サンプルですが、残りの生産地域は栽培サンプルです。 人工的に栽培された砂漠のデセールティコラでは、Qiemo 1、Qiemo 2、Yutian 2 から収集された 5 つのフェニルエタノールアミン配糖体の相対含有量が野生のものよりも高くなります。 哈密、景河などから採取された 5 種類のフェニルエタノールアミン配糖体の分布は野生とは異なり、明確なパターンはありません。 エキナセアのアントシアニンおよびアントシアニンの変化は、Huang Jing [14] および Xu Rong らによって発見された変化とはわずかに異なります。 [15]。 これは、採取場所の違いのほか、カンクサの生育環境、宿主ハロキシロン・アンモデンドロン、カンクサの生育年数、種子の品質の違いによるものと考えられる。
図 3 新疆のさまざまな地域の野生および人工栽培された砂漠のキスタンケ デザートティコラにおけるフェニルエタノールグリコシドの分布
3.3.3 内モンゴルおよび寧夏におけるフェニルエタノイド配糖体の相対含有量の分析
図4に示すように、Alxa Left Banner DesertとRight Banner Desertのサンプルは野生のCistanche desserticolaですが、Alxa Right Bannerのフェニルエタノールアミングリコシドの含有量はLeft Bannerのものよりも大幅に高くなります。 追跡調査の結果、アルクサ・ライト・バナーでは砂の汚染が少なく、キスタンケ・デザートティコラの生育期間は約5-10年であり、宿主であるハロキシロン・アモ・デンドロンの生育条件が異なることが判明した。 、これがフェニルエタノールアミングリコシド含有量の大きな違いの理由である可能性があります。 また、16 の異なる地域におけるフェニルエタノールアミン配糖体の分布図を観察したところ、フェニルエタノールアミン配糖体の含有量は醸造後に最も低いことがわかりました。これは、加工プロセス中の高温、高圧、および醸造時間の長さが影響している可能性があります。フェニルエタノールアミングリコシドの含有量の減少を引き起こします[16]。
図 4 内モンゴルと寧夏におけるフェニルエタノイド配糖体の分布
3.3.4 さまざまな生息地の砂漠砂漠からの粗多糖類の分子量と分布
セクション 2.1.3 で調製した試験サンプルの分子量を、セクション 2.2.3 の条件下で多角度レーザー散乱装置を使用して測定します。 結果を表３に示す。表３によれば、地域により砂漠砂漠多糖類の分子量や分布が異なることがわかる。 新疆ウイグル自治区のムレイ、アクスサヤ、内モンゴルアルシャ左旗、右旗、トンレンタンから採取したサンプルの分子量は均一な分布を示した（アクスサヤとトンレンタンのサンプルを除き、他の地域からのサンプルはすべて野生のものであった）。 表 3 をさらに観察すると、新疆の和田博源基地からのサンプルを除いて、春に収集されたサンプルの分子量分布は秋のものよりも集中していることが明らかになったため、サンプルの供給源と収穫時期が関連していると推測されます。多糖類の分子量分布に影響を与えます。
さらに、醸造後のカンクサの多糖類サンプルの分子量も比較的小さい。 醸造が多糖類の分子量サイズと分布に影響を与えるかどうかは、より詳細で詳細な実験が必要です。
Gao Yunjia 他 [17] は、Cistanche desserticola オリゴ糖が腸に潤いを与え、便秘を解消する薬理学的物質の 1 つであることを示しました。 しかし、異なる分子量グループの多糖は、抗酸化活性、抗老化活性、血糖降下作用に大きな違いがある[18-22]。これは、Cistanche desserticola オリゴ糖の調製とその後の薬理活性研究の参考資料となる可能性がある。 。
表 3 さまざまな供給源からの砂漠キスタンシュからの粗多糖類の分子量と分布
Note: Mw: Weight average molecular weight; Mass Fraction: Mass fraction. Molecular weight order division: A-segment molecular weight>106105
3.3.5 さまざまな生息地の砂漠の砂漠の多糖類組成
2.1.4 項に記載の方法に従って単糖加水分解物を調製し、2.2.2 項に記載のイオンクロマトグラフィー条件で分析します。 単糖の組成の種類と含有量分布のカラム図を図 5 に示します。まとめると、Cistanche desserticola の 16 種類の粗多糖を加水分解すると、ほとんどの産地でグルコースが 50% 以上を占め、次いでガラクトース、アラビノースが続きます。 Gong Lidong [23] は、キャピラリー電気泳動を使用して、内モンゴルで生産された本物のキスタンケ デスティコーラの単糖がガラクトース、グルコース、ラムノース、アラビノース、フルクトースであることを分析しました。 新疆ウイグル自治区で生産されるカンカの単糖類は、ガラクトース、グルコース、ラムノース、フルクトースです。 新疆ウイグル自治区で栽培されているカンカの単糖類は、ガラクトース、グルコース、ラムノースです。 王新通ら。 [24]新疆ウイグル自治区のキスタンケ・チューブローサの単糖組成はグルコース、ガラクトース、マンノースのみであることがガスクロマトグラフィーで分析された。 異なるソース、異なる分析方法、条件からのサンプルでは異なる結果が得られることがわかります。
4 結論
この記事では、さまざまな地域の砂漠のデザートデスティコラの 2 つの主な有効成分であるフェニルエタノール配糖体と多糖類を包括的に分析します。 両者の定性分析を通じて、砂漠の砂漠の内部品質と地域差を総合的に調査します。
UPLC定性分析と類似性の結果は、異なる地域の砂漠のデザートコラのフェニルエタノールアミンの組成と相対含有量に大きな違いがあるが、主成分はエキナセアとプールサイドであり、他の3つのフェニルエタノールアミンには違いがあることが示されました。.
砂漠高麗人参
この実験は、秋に収集されたサンプルが春のものよりも高いことを示し、これは既存の文献の結論と一致しています。 季節要因に加えて、カンクサの接種と栽培管理、その後の収穫、加工、輸送のプロセスもすべてその内容に影響を与えます。 したがって、カンクイの栽培システムをさらに改善し、市場運営を標準化し、その品質を向上させる必要がある。
多糖類の分子量と単糖類の組成の分布を分析すると、サンプルの出所、収穫時期、加工の有無などによって、多糖類の分子量や分布割合が変化する可能性があります。 しかし、既存のデータでは、Cistanche desserticola 多糖類の分子量に関する研究はほとんどありません。 この実験は、Cistanche desserticola 多糖類の研究のための参照基盤を提供します。 近年の文献研究では、分子量セグメントが異なる多糖類の抗酸化作用やその他の薬理学的活性に大きな違いがあることが示されています。 したがって、分子量の異なるセグメントによるカンクイの多糖類の生物学的活性に違いがあるかどうかを判断するには、さらなる研究が必要です。
要約すると、フェニルエタノイド配糖体と多糖類の包括的な評価は、異なる地域の砂漠の砂漠の砂漠には大きな違いがあることを示しています。 植栽から市場流通に至るまで、それぞれのつながりがデザートティコーラの有効成分に影響を与えます。 デセールティコーラの植栽や加工などのさまざまな工程を正確に管理することで、デセールティコーラの品質は大幅に向上します。
参照
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