微分成分に基づいた中国の薬局方におけるCistanche DestericicolaとC. Tubuloflorisのマーカー成分のさまざまな含有量制限の重要性ⅱ

抽象的な

客観的：微分成分を研究し、Cistanche TubulosaとC. Deserticolaの間の内容を比較し、中国の薬コペイアの2つの植物間のマーカーコンポーネントの異なる含有量制限の重要性を分析します（2020年版）。方法：微分成分は、多変量統計分析と組み合わせた液体クロマトグラフィーマス分光測定によって特定され、微分成分の含有量は高性能液体クロマトグラフィーによって決定されました。結果：微分化合物は、シスタノシドA、イソアクチェシド、エキナコシド、およびアクセオシドでした。エキナコシドは両方の植物で最高の含有量を持ち、続いてアクセオシドが続きました。 C. tubulosaのエキナコシド、アクチオシド、およびイソアクチェシドの含有量は、C。deatryicolaのそれよりも高かった（P<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

キーワード：Cistanche Deserticola;Cistanche Tubulosa; シスタノシドa;イソアクチェシド;エキナコシド;アクセオシド

 

 

 

 

Cistanche DeserticolaキスタンチのデザイトコラYC MaまたはCistanche Tubulosa（Schenk）Wight、Orobanchaceaeファミリーの植物のうろこ状の葉が付いた乾燥した肉質の茎です[1]。 「砂漠の高麗人参」として知られる強壮剤で薬用の食品です。主に内部モンゴル、ニングクシア、ガンス、新jiangおよびその他の地域に分布しています[2]。 Cistanche Deserticolaは自然が暖かく、味が甘くて塩辛いもので、腎臓と大腸の子午線に入ります。肝臓と腎臓に栄養を与え、本質と血液に利益をもたらし、腸を湿らせ、排便を促進する効果があります。腎臓の陽欠乏症、インポテンスと不妊症、腰と膝の痛み、腱と骨の脱力、および乾燥腸によって引き起こされる便秘を治療するために使用できます[1]。現代の研究は、サイスチャンデザイトコラのスケール葉を備えた肉質の茎には、主にフェニルエタノイドグリコシド、イリドイドエーテルテルペン、そのグリコシド、リグナン、糖などのさまざまな化学成分が含まれていることを示しています[3]。その中で、フェニルエタノイドグリコシドは最も重要な活性成分であり、抗老化[4]、抗酸化、抗疲労、および下剤[5]などの薬理学的効果をもたらします。
私の国には約20種のサイスンチェがあり、私の国には5種があります：シスチャン脱デトルシコラ、シスチャンティバロサ、C。サルサ（カメディ）G.Beck、C。SinensisG. Beck、およびC. Salsa Var。 albiflora pf tu et zclou。中華人民共和国の薬局方の2020年版（以下、「中国の薬局物」と呼ばれる）は、最初の2つの種がCistanche Destericolaの元の種であると規定しています[6]。

Cistanche Deserticola

2005年版の中国の薬コペイアの前に、唯一のシスチャンチ砂漠地帯が由来する唯一の起源はサイスンチェデザイトコラでした。国内および国際市場の需要が高いため、リソースの不足により、Cistanche Tubulosaが法的起源として追加されました。しかし、市場におけるCistanche Destericolaの2つの起源の価格は非常に異なっており、Cistanche Tubulosaの価格はCistanche Destericolaの1/4から1/6に過ぎません[7]。これら2つの起源の組成と薬理学的影響の違いは、長期的な詳細な研究と利用の価値があります。成分の種類の違いに関しては、Huang Xiongmei et al。[8] Cistancheside Aが、2つの起源の特徴的なスペクトル研究を通じて主要な差別化成分であることがわかりました。コンポーネント含有量の違いに関しては、Gao Yan et al。 [9]シスタンチ砂漠産物とシスタンチェの尿細管のエキナコシドとベルバスコシドとヴァバスコシドとイソヴァラスコシドとのベルバスコシドの含有量は、超高性能性液体クロマトグラフィーによってまったく異なることを発見しました。 Zhu Nailiang et al。 [10]フィンガープリント分析を通じて、Cistanche Destrawicolaのフェニルエタノイドグリコシドの含有量は、Cistanche Tubulosaのそれよりも有意に低く、Cistanche尿細管におけるフェニルエタノイドグリコシドの含有量はイリドイドグリコシドの含有量よりも有意に高かったことがわかりました。
私たちの研究グループは、多変量統計分析と組み合わせた液体クロマトグラフィマス分光測定を使用して、Cistanche DestercicolaとCistanche Tubulosaの間の化学成分のタイプの違いを比較し、微分マーカーを特定し、その内容を決定するために、Cistanche Destuncholaの起源を特定するための参照を提供します。さらに、2つの元のサイスンチェスの薬コペウアインデックスコンポーネント（エキナコシドとベルバスコシド）の内容の違いを比較することにより、サイスンチとサイスチャンの2つのコンポーネントの統合制限をそれぞれ設定する必要性が説明されました。

 

1つの材料

1.1楽器

Ultimate 3 000超高性能液液相電界電界タンデムイオントラップ高解像度質量分析計（UPLC-LTQ Orbitrap XL、Thermo Fisher Scientific、USA）; 2695高性能液体クロマトグラフ、2489紫外線検出器（米国水域）; BT125D 1/100,000電子バランス（ドイツ、Sartorius Instrument Systems）; KQ -500 de CNC超音波クリーナー（Kunshan Ultrasonic Instrument Co.、Ltd。）; PL2002電子バランス[Mettler-Toledo Instrument（Shanghai）Co.、Ltd。]。

 

Cistanche Tubulosa

1.2テスト薬

参照物質エキナコシド、シスチャンシドA、ベルバスコシド、およびイソオーバーボササイド（98％を超える純度、バッチ番号PS000867、PS010950、PS000683、およびPS001059）は、Chengdu Pusi Biotechnology Co.、Ltd.から購入しました。質量分析グレードのメタノール（フィッシャー）;質量分析グレードの形成酸（純度：99％、シグマアルドリッチ）;水はワトソンズ蒸留水でした。

 

1.3サンプル

サイスンチェデザイトコラスライスの10枚のバッチと、漢方薬大学のスケールの葉を持つ乾燥した肉質の茎が、漢方薬の葉の葉を持つ乾燥した肉質の茎（シュタンクーティウ科）のワイト、ワイト、ワイト、漢方薬の10バッチと、サイスンチェデザイトコラスライスと10バッチのサイスンチェチューブロサスライスが特定されました。詳細情報を表1に示します。

 

2つの方法

2.1さまざまな起源からのCistanche Destericolaのさまざまなコンポーネントに関する研究

2.1.1試験溶液の準備

約0。2gの乾燥サンプル粉末（4番のふるいを通過）し、50 mlの茶色の体積フラスコに正確に計量して置き、50％メタノールの重量を25 ml、重量、30分間コールド浸し、40分間超音波的に治療します（電力250 w、頻度35khz）。取得するためにろ過します。

 

2.1.2クロマトグラフィー条件

Waters Acquity UPLCTM Beh C18 Chromatographic Column（1 {0} 0 mm×2.1 mm、1.7 µm）、35度のカラム温度、1 {29}}程度のサンプルチャンバー温度、3 µLのサンプル注入量3 µl、{A）解（b）移動相として（0分、10％A; 0〜4分、10％〜26％A; 4〜18分、26％〜40％a; 18〜24分、40％〜100％a; 24〜28分、100％a）、検出波長330 nm、流量0.3 ml・min – 1。

 

2.1.3質量分析条件

エレクトロスプレーイオン源（ESI）が使用され、負のイオンモードスキャン、毛細血管温度は350度、シースガス体積流量は30 ARB、補助ガス量の流量は10 ARB、スプレー電圧は3 kV、毛細管電圧は–35 V、スキャン範囲はM/Z100〜1000で、データはXCALIBUR 2.1でした。

Cistanche Tubulosa

2.1.4主成分分析（PCA）

正確な質量保持時間データペアの2次元マトリックスを取得した後、インストルメントパネルはすべて自動的にインポートされた正確な保持時間情報をすべて表示し、拡張統計モジュールのPCAメソッドを分析に使用します。

 

2.1.5直交部分最小二乗分類分析（OPLS-DA）

OPLS-DAを使用して2次元データ分析を実行することにより、多数の直交化されたスペクトルが得られ、サンプルの2つのグループ間の違いを明確に示すことができます。 S-Plot形式では、S字型曲線の両端の質量保持時間データペアは、各サンプルグループの最も信頼性の高い特性イオンを表します。

 

2.2微分成分の決定

 

2.2.1混合参照ソリューションの準備

 

適切な量​​のエキナコシド、シスチャンシドA、ベルバスコシド、およびイソバラコシドを1 0 ml茶色の体積フラスコに摂取し、5 0％メタノールで溶解してマークに希釈し、{6}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}の濃度を備えた溶液に希釈し、希釈してください。それぞれ0.384、および0.312 mg・ml – 1。

 

2.2.2試験溶液の準備

 

この方法は2.1.1と同じです。

 

2.2.3クロマトグラフィー条件

アジレントエクリプスXDB-C18カラム（25 0 mm×4.6 mm、5μm）が使用され、メタノール（a）-0。1％形成酸水溶液（b）が移動相として（b）、勾配溶出（{1 {1 {1 {15}}}}}}}}}}}}}}}}}}}} 15〜20分、21％〜25％A;

 

2.2.4方法論的調査

2.2.4.1線形関係調査

正確にピペット{{0}}。1、0。測定のためにサンプルを注入し、クロマトグラフィーピーク領域を縦座標（y）として使用し、濃度をAbscissa（x）として使用し、散乱プロットを描画し、回帰分析を実行して、異なる参照物質の線形回帰方程式を取得します。

 

2.2.4.2精度実験

エキナコシド、シスチャンシドA、ベルバスコシド、およびイソオーバーバッコシドの混合参照溶液を摂取し、6倍連続的に注入し、エキナコシド、シスタンチャシドA、ベルバスコシドAおよびイソバーバッコシド参照のピーク領域を記録し、それぞれ各成分のRSD値を計算します。

 

2.2.4.3安定性実験

同じCistanche Deserticola（バッチ番号：16 0 901）テスト溶液を摂取し、0、2、4、8、12、24時間に注入し、テスト溶液におけるエキナコシド、シスチャンサイドA、ベルバスコシド、イソオーバーバコシドの含有量を決定し、それぞれ各成分のRSD値を計算します。

 

2.2.4.4再現性実験

同じサンプル（バッチ番号：160901）パウダーを撮影し、2.1.1未満の方法に従って6個のテストソリューションを準備し、各試験溶液におけるエキナコシド、シスチャンサイドA、ベルバスコシド、イソオーバーバスコシドの含有量を計算し、各コンポーネントのRSD値を計算します。

 

2.2.4.5サンプル回復実験

Cistanche Deserticola（Batch Number：160901）の6つのサンプルを既知の含有量で正確に測定し、エキナコシド、Cistancheside A、Verbascoside、およびIsoverbascosideの既知の含有量に相当する参照ソリューションを追加し、2.1.1未満の方法に従ってテストソリューションを準備し、平均的なサンプル回復を計算します。