Cistanche Tubulosaから抽出されたアクチョシドとエキナコシドの尿酸低下効果とメカニズム
Mar 03, 2025
抽象的な：尿酸低下効果とアクセオシド（AS）およびエキナコシド（ECH）のメカニズムを探索することを目指しています。Cistanche Tubulosa.
方法高尿酸血症（HUA）ラットモデルは、アデニン（100 mg・kg -1・D -1）と組み合わせたオックスネートカリウム（1.5 g・-1・d -1）を使用して確立されました。 HUAモデルラットは、モデルコントロールグループ、アロプリノール群（30 mg・kg -1・d -1）にランダムに分割され、低くて高く（50、100 mg・kg -1}・d -1）dose group、およびech low and emch mg・kg -1・d -1）用量群。通常のコントロールグループが以前に確立されていました。 4週間の投与の後、血液生化学分析装置を使用して、尿中のSUA尿素、CREA、アデノシンデアミナーゼ（ADA）および尿酸（UUA）レベルを検出しました。酵素リンクされた免疫吸着アッセイを使用して、血清中のキサンチンオキシダーゼ（XOD）レベルを検出しました。腎臓組織を収集し、腎臓係数を計量して計算しました。ヘマトキシリンエオシン（HE）染色を使用して、腎病理学的変化を観察しました。免疫組織化学（IHC）およびリアルタイムPCRを使用して、尿酸トランスポーター1（URAT1）、グルコーストランスポーター9（GLUT9）、有機アニオン輸送体1（OAT1）、および有機陰イオン輸送体3（OAT3）のタンパク質およびmRNA発現レベルを腎組織に検出しました。結果とECHは、HUAモデルラットの腎機能を改善し、血液尿酸レベルを低下させ、尿酸排泄を促進し、ADAとXODの血清レベルをダウンレギュレートし、腎組織におけるURAT1およびGLUT9のタンパク質とmRNAの発現をアップレギュレートしながら、腎組織におけるOAT1およびOAT3のmRNA発現をアップレギュレートする可能性があります。
結論Cistanche TubulosaのフェニルエタノイドグリコシドASおよびEchは、HUAモデルラットの腎機能を改善し、ADAおよびXODレベルを低下させ、URAT1、GLUT9、OAT1、およびOAT3の発現を調節することにより、尿酸低下効果を発揮する可能性があります。
キーワード：Cistanche Tubulosa; アクセオシド;エキナコシド;高尿症;尿酸の減少;機構
16％のアクチョシドを含むCistanche Tubulosa抽出物
高尿酸血症（HUA）は、人体の障害のプリン代謝によって引き起こされる代謝疾患であり、血液酸レベルの上昇をもたらします[1]。血液尿酸レベルが7を超えると診断されます。高尿酸症の発症は、主に高肥料の食事、慢性アルコール消費、薬物使用、甲状腺機能低下症などの要因に関連しています。心血管疾患、糖尿病、高血圧[{3-4]のリスクを高めるだけでなく、患者の健康にも大きな影響を与えます。
現在、高尿酸血症の臨床治療には、主に尿酸産生を阻害し、尿酸排泄を促進する薬物が含まれています。ただし、これらの治療には、肝臓または腎機能障害のある患者には一定の制限があります[{5-6]。したがって、副作用が低い効果的な薬物を探索することは、高尿酸血症の予防と治療に非常に重要です。
Cistanche Tubulosa（Schenk）R。Wight、伝統的な漢方薬では、腎臓の栄養性のあるハーブとして一般的に使用されており、インポテンス、不妊症、エッセンスや血液の欠乏、腰と膝の脱力、筋肉の脱力、腸の乾燥による便秘などの状態を治療するために採用されています[7]。研究はそれを示していますCistanche Tubulosa癌患者の化学療法における神経保護性[8]、抗炎症性[9]、骨代謝調節[10]、および有効性を促進する効果を有する[11]。そのさまざまな活性成分の中で、フェニルエタノイドグリコシドが最も豊富です。
アクセオシド（AS）およびエキナコシド（ECH）、高い含有量を含む2つのフェニルエタノイドグリコシドCistanche Tubulosa、強力な生物活性を示し、開発と応用の重要な可能性を保持します。その結果、私たちの研究グループは、さらなる研究のためにASとECHを選択しました。ネットワークの薬理学の予測とマウスの実験前の経験を通じて、フェニルエタノイドグリコシド抽出物がCistanche Tubulosa特定の尿酸低下効果がある場合があります。ただし、これらの効果の経路とメカニズムは不明のままです。
したがって、研究の焦点として尿酸産生のメカニズムとその主要な排泄経路を使用して、フェニルエタノイドグリコシド抽出物のASおよびECHの尿酸低下効果を調査しました。この研究は、ASとECHが尿酸低下効果を発揮する経路とメカニズムを解明することを目的としています。
1つの材料
1.1実験動物
重量150〜180 gの70人の男性SPFグレードのSprague-Dawley（SD）ラットは、新jiang医科大学の実験動物センターから購入しました。動物生産ライセンス番号：SCXK（xin）2023-0001。この実験は、新jiang自治地域Uygur Medicine Research Instituteの動物倫理委員会によって承認され、動物倫理承認番号：iacuc-（Zhun）-2024-009。
1.2薬と試薬
フェニルエタノイドグリコシド抽出物（ASおよびECH）からCistanche Tubulosa (purity >98％、高性能液体クロマトグラフィーによって検証された）は、Uygur製剤科学の主要な研究所である新jiang自治区Uygur Medicine Research Instituteによって抽出、精製、および調製されました。バッチ番号：20220617（AS）および20220526（ECH）。
アロプリノール錠剤、バッチ番号：62208726、Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co.、Ltd。
オックス語カリウムそしてアデニン、バッチ番号：I2130050およびC2202255、Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co.、Ltd。から購入。
CREA（クレアチニン）、UA（尿酸）、尿素、およびADA（アデノシンデアミナーゼ）アッセイキット、バッチ番号：141123010、141223004、141323008、および043624005、Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co.、Ltd。
XOD（キサンチンオキシダーゼ）活性アッセイキット、バッチ番号：Y10001219、Shanghai Macklin Biochemical Technology Co.、Ltd。から購入。
抗体（URAT1、GLUT9、OAT1、OAT3）、バッチ番号：3I5723 0、92F0296/4、0F33081/2I44618、アフィニティバイオサイエンスから購入。
HRP標識ヤギ抗ウサギIgG、バッチ番号：245440113、ZSGB-Bioから購入。
ヘマトキシリン染色溶液、バッチ番号：24135741H、Beijing Lanjieke Technology Co.、Ltdから購入。
DAB発色試薬キット、バッチ番号：240010512、ZSGB-Bioから購入。
DEPC（ピオラボネートジエチル）、カタログ番号：d 60029-500 ml、Amresco（USA）から購入。
M5 HICLEAR DL2000 DNAマーカー、カタログ番号：MF025、Beijing Genomics Biotechnology Co.、Ltdから購入。
Trizol™試薬、カタログ番号：15596026、Thermo Fisher Scientific（USA）から購入。
5xオールインワンRT MasterMixそしてEvagreen Express 2×QPCR MasterMix-lowRox、カタログ番号：G492とG891、どちらもApplied Biological Materials Inc.（ABM）から購入しました。
2つの方法
2.1モデルの確立とグループ化
70人のオスのSprague-Dawley（SD）ラットが順応し、通常のコントロールグループ（1 {0ラット）とモデルコントロールグループ（60ラット）の2つのグループに分割されました。正常なコントロールグループは、Gavageを介して0.5％CMC-NAを投与されました。モデルコントロールグループは、10 mL・kg⁻¹の用量でアデニン（100 mg・kg⁻¹）と組み合わせて、14日間連続して1日1回、アデニン（100 mg・kg⁻¹）と組み合わせて投与されました。生化学分析装置によって測定されたように、尿素、CREA、およびSUAレベルが大幅に増加した場合、モデルは正常に確立されたと見なされました。
高尿酸血症モデルラットは、SUA、尿素、およびCREAレベルに基づいて次のグループにさらに分割されました：モデルコントロールグループ、アロプリノールグループ（3 0 mg・kg⁻¹）、低用量ASグループ（50 mg・kg⁻¹）、高用量Asグループ（100 mg・Kg⁻¹） ECH群（100 mg・kg⁻¹）、各グループに10匹のラットがあります。安定した高尿酸症を維持するために、正常対照群を除くすべてのグループに、午前中にgavageを介してアデニン（100 mg・kg⁻¹）と組み合わせたオックス語（500 mg・kg⁻¹）を投与し、午後に各治療群でそれぞれの薬物を投与しました。通常の対照群は、午前中に0.5％CMC-NA溶液を受け、午後には10 mL・kg⁻¹の用量で水を飲み、14日間連続して1日1回。その後、モデリング剤の投与を停止し、それぞれの薬物をさらに14日間毎日継続的に投与しました。
2.2サンプルコレクション
最終用量の後、ラットは一晩断食しました（水は制限されていませんでした）。各グループの尿を尿酸試験のために収集しました。断食後に体重を測定し、麻酔下で血液サンプルを収集しました。血清を遠心分離により分離し、将来の使用のために保存しました。腎臓組織を収集し、計量しました。 1つの腎臓は4％パラホルムアルデヒド溶液で固定され、もう1つの腎臓はさらなる分析のために液体窒素がスナップフローゼンでした。
2.3ラット尿中の尿酸の測定
各グループの尿サンプルを遠心分離し（3、000 r・min⁻¹、10分、半径14 cm）、上清を収集しました。尿サンプルを生理食塩水で1：9で希釈し、生化学分析器を使用して尿酸含有量を分析しました。
2.4ラット血清中のADA、尿素、CREA、およびSUAの測定
各グループの血液サンプルを遠心分離し（3、000 r・min⁻¹、10分、半径14 cm）、血清を収集しました。血清中のADA、尿素、CREA、およびSUAレベルは、生化学分析装置を使用して測定されました。
2.5ラット血清中のXODの測定
ラット血清のXODレベルの変化は、製造元の指示に従って酵素アッセイを使用して測定されました。 290 nmでの初期吸光度（a₁）および最終吸光度（a₂）を記録し、Δa（Δa{=a₂ -a₁）を計算しました。 ΔAは式に置き換えられました。
xod（nmol⁻¹・min⁻¹・ml⁻¹）= [Δa×反応システムの総体積÷（尿酸×光学経路長のモル絶滅係数]÷サンプル体積÷時間= 4262××ΔA,
セラムのミリリットルあたり1分あたり触媒される尿酸の量を計算します。
2.6腎臓係数測定
腎臓組織を収集し、生理食塩水で洗浄し、余分な水を除去しました。臓器の重量を正確に測定し、腎臓係数を次のように計算しました。
腎臓係数=腎臓の体重（mg） /体重（g）。
2.7彼の染色による腎臓組織の組織病理学的観察
4％パラホルムアルデヒド溶液に固定された腎臓組織を、段階的なエタノール濃度で脱水し、キシレンで除去し、パラフィンに埋め込み、4-μmスライスに切断しました。切片をキシレンで脱パラフィンし、等級のエタノールで水分補給し、ヘマトキシリンとエオシン（HE）で染色し、中性ガムで密封しました。腎臓組織の形態学的変化は光学顕微鏡下で観察され、画像は400倍の倍率でキャプチャされました。
2.8 IHCによる腎臓組織におけるURAT1、GLUT9、OAT1、およびOAT3タンパク質発現の検出
4％パラホルムアルデヒド溶液に固定された腎臓組織を、等級のエタノール濃度で脱水し、キシレンで除去し、パラフィンに埋め込み、切片を脱水しました。抗原回復とヤギの血清ブロッキングが行われました。一次抗体（URAT1、GLUT9、OAT1、OAT3）を1：200希釈で添加し、4度で一晩インキュベートしました。翌日、切片をPBSで洗浄し、風乾し、ビオチン標識ヤギ抗ウサギIgGと37度30分間インキュベートしました。切片をPBSで洗浄し、DAB発色剤試薬と10分間インキュベートし、続いてPBSリンシング、ヘマトキシリン染色、塩酸エタノール溶液、炭酸リチウム青色、勾配エタノールとの脱水、キシレンの除去、および中性グムとの封印を伴う脱水症で溶解しました。
各ラットについて、腎臓切片の2つのランダム4 0 0×フィールドが選択されました。正の染色（茶色黄色）を分析し、各フィールドの統合された光学密度（IOD）を統計分析のためにImage-Pro Plus 6.0を使用して測定しました。
