アルファナフチルイソチオシアネート（ANIT）肝毒性ラットモデルでの検証による胆汁うっ滞性肝炎の治療におけるオトギリソウの分子メカニズムのネットワーク薬理学研究

詳細については。 コンタクトtina.xiang@wecistanche.com

バックグラウンド：このネットワーク薬理学研究は、胆汁うっ滞性肝炎に対するオトギリソウの影響に関与する活性化合物と分子メカニズムを特定することを目的としています。 肝毒性のα-ナフチル-イソチオシアネート（ANIT）ラットモデルでの所見を検証しました。

材料/方法：以前に胆汁うっ滞性肝炎に関連していたH.japonicumの化学成分と標的、および標的遺伝子は、公開データベースから取得されました。 Cytoscape 3.7.2ソフトウェアを使用してネットワークを構築し、バイオインフォマティクスのパブリックプラットフォームに基づいてSTRINGデータベースと潜在的なタンパク質機能を分析しました。 ANITは、36匹のSprague-Dawleyラットを使用したラットモデルで胆汁うっ滞性肝炎を誘発するために使用され、このモデルは、3回の投与による介入を調査するために使用されました。ケルセチン（低用量、50 mg / kg、中用量、100 mg / kg、高用量、200 mg / kg）、H.japonicumの主成分。血清生化学的指標のレベルは、市販のキットで測定されました。肝臓およびミトコンドリア機能のマーカーのメッセンジャーRNA（mRNA）レベルおよび酸化ストレスリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）によって検出されました。

結果：H。japonicumの主な有効成分は、ケルセチン、ケンペロール、およびテトラメトキシルテオリンでした。 そしてそれらの主要な標的には、プロスタグランジンG / Hシンターゼ2（PTGS2）、B細胞リンパ腫-2（BCL2）、コレステロール7-アルファ-ヒドロキシラーゼ（CYP7A1）、およびファルネソイドX受容体（FXR）が含まれていました。 ケルセチンの介入は胆汁うっ滞性肝炎からの回復を促進しました。

この研究からの発見は、ケルセチン、ケンペロール、および

結論：ヒト肝疾患におけるテトラメトキシルテオリンおよび胆汁うっ滞性肝炎におけるPTGS2、BCL2、CYP7A1、およびFXR遺伝子の役割。

キーワード：胆汁うっ滞、肝内・遺伝子調節ネットワーク・オトギリソウ・医学、繁体字中国語・薬理学・ケルセチン

バックグラウンド

胆汁うっ滞は、異常な胆汁の形成、分泌、排泄によって引き起こされる肝病変を伴う臨床症候群です。 胆汁うっ滞性肝疾患は、胆汁酸の合成と輸送の障害と密接に関連しており、しばしば胆汁うっ滞性肝障害を引き起こし、最終的には肝線維症、肝硬変、肝不全に進行する可能性があります[1,2]。

胆汁うっ滞は胆汁うっ滞性肝炎の主な原因の1つであり、α-ナフチルイソチオシアネート（ANIT）によって誘発される胆汁うっ滞は、最終的に胆汁うっ滞性肝炎を引き起こす可能性があります。 ANITは、肝細胞壊死、胆管過形成、および肝線維症を誘発するために使用される化学毒素であり、実験動物モデルで肝損傷または胆汁うっ滞性肝炎を引き起こすために使用されます。 研究研究では、胆汁うっ滞性肝炎を再現するためにラットにANITを腹腔内注射します[3-5]。 胆汁うっ滞中の肝障害の組織病理学的特徴には、肝組織壊死、胆管増殖、水腫性変化、炎症、および線維症。 動物におけるANIT誘発性胆汁うっ滞は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALD）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）、アルカリホスファターゼ、およびγ-グルタミン酸-イルトランスペプチダーゼ（y-GGT）などの肝障害の血漿バイオマーカーの有意な上昇を示します。酸化ストレスまた、高レベルの活性酸素種、脂質過酸化、グルタチオン貯蔵庫の枯渇、肝臓の組織抗酸化能力の低下からも明らかなように、大幅に増加しています。 さらに重要なことに、ANITによって誘発された動物は、ミトコンドリアのデヒドロゲナーゼ活性の阻害、ミトコンドリア膜電位の崩壊、およびミトコンドリアの腫れを示します。 ANIT誘発胆汁うっ滞ラットのミトコンドリアは、ミトコンドリア透過性遷移孔の開口部に対する感受性の増加とATPase活性の再分極の減少を示します。 その結果、胆汁うっ滞性肝炎は、肝機能、酸化ストレス、およびミトコンドリアの構造と機能と密接に関連しています[6,7]。

現在、ウルソデオキシコール酸（UCDA）などの少数の薬だけが治療に使用されています胆汁うっ滞[8,9]; しかし、これらの薬には、反応の悪さ、副作用、コンプライアンスの低さなどの欠点があります。 しかし、伝統的な漢方薬は、肝内胆汁うっ滞などの肝疾患の治療において長い歴史と豊富な臨床経験を持っています。 Hypericum japonicumは、HypericumjaponicumThunbの乾燥した草全体です。 元マレーは、ディエルカオまたはティアンジファンとしても知られ、清王朝以来黄疸治療に使用されてきました。 H. japonicumは、熱を取り除き、湿気を取り除き、肝臓を落ち着かせ、胆嚢を強化する機能があり、湿熱黄疸の臨床治療に一般的に使用されています[10]。 H. japonicumの化学組成には、フラボノイド、ランタノイド、クロモン配糖体、フロログルシノール誘導体、およびラクトンが含まれます。 フラボノイドの中で、ケルシトリン、イソケルシトリン、ケルセチン-7- O- -l-ラムノシドは肝保護作用のある成分です[11]。 Ning Wangらは、ケルセチン、イソケルセチン、ケルセチンを含むH.japonicumの水性抽出物が、四塩化炭素誘発性肝炎およびANIT誘発性胆汁うっ滞実験動物に対して抗肝毒性および抗胆汁うっ滞効果を有することを実証しました[12]。 ただし、肝内胆汁うっ滞の治療におけるH.japonicumのメカニズムとターゲットはまだ不明です。

この研究では、ネットワーク薬理学と薬理学的実験を組み合わせました。 最初に、H.japonicumの主要なアクティブなコンポーネントとターゲットがインシリコで識別され、コンポーネントとターゲットのネットワークを構築するために使用されました[13,14]。 胆汁うっ滞性肝炎の治療における可能な治療メカニズムを探求するために、標的遺伝子の機能的濃縮分析を実施した。 次に、ANITによって誘発された胆汁うっ滞性肝炎のラットモデルを使用して、胆汁うっ滞性肝炎の治療におけるH.japonicumの効果と肝臓に対するその保護効果の根底にあるメカニズムを明らかにしました。 具体的には、ミトコンドリア膜電位、肝細胞アポトーシス、肝内胆汁酸恒常性の調節、およびその他の経路を調査しました。

材料と方法

化学薬品および試薬

H.japonicumThunb。 ex Murrayは、Kangmei Pharmaceutical Co.、Ltd.（中国、普寧市）から購入しました。 -イソチオシアネートナフチル（ANIT、98％）は、Shanghai Macklin Biochemical Co.、Ltd.（Shanghai、China）から購入しました。ケルセチン(>98.0%)and ursodeoxycholic acid (UCDA,>98％）はDalian Melone Biology Technology Co.、Ltd.（Dalian、China）から購入しました。 オリーブオイルはSigmaAldrichTrading Co.、Ltd.（上海、中国）から購入しました。 マロンジアルデヒド（MDA）、スーパーオキシドジスムターゼ（SOD）、直接ビリルビン（DBI）、総ビリルビン（TBIL）、総胆汁酸（TBA）、ALT、およびASTアッセイキット、およびグルタチオンペルオキシダーゼ（GSH-Px）キットは南京建城生物工学研究所（南京、中国）。 Bio-Rad DCタンパク質アッセイ試薬パッケージはBio-RadLaboratories（CA、USA）から購入しました。HyPure分子生物学グレードの水、FastStart Universal SYBR Green Master mix（Rox）、およびRevertAid FirstStrandcDNA合成キットはThermoFisherから購入しました。 Scientific Co.、Ltd.（上海、中国）。 プライマー-PTGS2、B細胞リンパ腫-2（BCL2）、コレステロール7-アルファヒドロキシラーゼ（CYP7A1）、ファルネソイドX受容体（FXR）、インターロイキン-1ベータ（L {{ 13}} B）、および腫瘍壊死因子-α（TNF-o）は、Service bio Technology Co.、Ltd.（Wuhan、China）から購入しました。 他のすべての化学物質および試薬は分析グレード以上であり、商業的供給元から購入しました。

動物

体重180gから220gのオスのSprague-Dawleyラットは、Southam Medical Universityの実験動物センター（SCXK（YUE）2018-0085）から購入しました。 ラットをケージに収容し、餌と水を自由に与え、各実験の前に1週間実験室に順応させた。 動物と世話を含むすべての手順は、広州医科大学の教育研究部門の人間と動物の被験者の使用に関する委員会によって承認されました。 動物認証番号は44002100016560でした。

H.japonicumのコンポーネントとターゲットのスクリーニング

検索キーワードとして「Di-er-cao」を使用して、漢方薬のシステム薬理学研究のための貴重なプラットフォームである漢方薬システム薬理学データベースでH.japonicumの化学成分と関連するターゲットを検索しました。薬物、標的、および疾患間のネットワーク関係のデータベース[15]。 ターゲットに対応する遺伝子名は、タンパク質の機能情報を収集するための中央ハブであるUniPortナレッジベースを使用して取得されました[16]。 オルガン主義は「人間」として選ばれました。

治療標的予測とネットワーク構築

「胆汁うっ滞性肝炎」は、無数のデータソースからヒトの遺伝子中心の情報を自動的にマイニングおよび統合するGeneCardsデータベースで胆汁うっ滞性肝炎のタンパク質ターゲットおよび対応する遺伝子名を取得するためのキーワードとして使用されました[17]。 胆汁うっ滞性肝炎の治療標的として、「ギフト230」の標的が選択されました。 胆汁うっ滞性肝炎の治療のためのH.japonicumの潜在的な標的を得るために、「遺伝子名」に従って、薬剤標的と疾患標的を交差させました。 Cytoscape 3.7.2ソフトウェア[18]を使用してcomponent-tar-getネットワークを構築し、ネットワークアナライザー機能を使用してネットワークトポロジパラメーターを分析しました。

ターゲットタンパク質相互作用分析

H.japonicumと胆汁うっ滞性肝炎の交差標的はStringデータベースにインポートされ、直接的（物理的）および間接的（機能的）なタンパク質間相互作用（PPI）を明らかにすることができます[19]。 スクリーニング条件として高い信頼性（0 .9）を使用し、孤立したターゲットを削除し、種を人間として定義することで、PPIネットワークが作成されました。 上記のデータをCytoscapeにインポートした後、cytoHubbaプラグインのMaximal Clique Centrality（MCC）分析方法を使用して、PPIネットワークの主要な規制対象を分析しました。

ターゲット機能と経路濃縮分析

標的タンパク質遺伝子の生物学的プロセスとシグナル伝達経路をさらに理解するために、H。japonicumによる胆汁うっ滞性肝炎の治療の標的を強力な遺伝子注釈分析ツールであるMetascapeに入力しました[20]。 種は人間に限定されていました、そしてP<0.01 was="" set="" as="" the="" significance="" threshold.="" gene="" ontology="" (go)="" functional="" annotation="" and="" kyoto="" encyclopedia="" of="" genes="" and="" genomes="" (kegg)pathway="" enrichment="" analyses="" were="" carried="" out,="" and="" the="" first="" 20="" cluster="" analysis="" results="" were="" drawn="" into="" a="" bar="" chart="" for="" visual="" processing="" using="" the="" omicshare="" tools,="" a="" free="" online="" platform="" for="" data="" analysis="" and="" detailed="" implementation="" process,="" as="" shown="" in="" figure="">

ANIT誘発ラット胆汁うっ滞性肝炎に対するケルセチンの治療効果

36匹のオスのSprague-Dawleyラットをランダムに6つのグループに分けました（グループあたりn =6）：グループは7日間ブランクビヒクルを局所投与し、5日目にオリーブオイル（2 mL / kg体重）を腹腔内注射しました。 ; グループllは7日間空の車両を口頭で受け取りました。 グループIIはUCDA（50 mg / kg体重）で7日間経口投与されました。 グループVは、高用量ケルセチン（Que H; 200 mg / kg体重）で7日間経口投与されました。 グループVは、中用量のケルセチン（QueM; 100 mg / kg体重）で7日間経口投与されました。 グループVIは、低用量ケルセチン（Quel、50 mg / kg体重）で7日間経口投与されました。 グループI1〜VI1のラットには、5日目にUCDAまたはケルセチンを投与してから2時間後にANIT-オリーブオイル溶液（100 mg / kg、ip、2 mL / kg体重）を投与しました。モデルグループとコントロールグループは経口投与しました。毎日ブランク溶媒[21,22]。

ANITの最後の投与から48時間後、腹腔内注射（100 mg / kgペントバルビタール）による麻酔によって動物を安楽死させた。 生化学的評価のために腹部大動脈から血液を採取した。 肝臓をすぐに取り出して秤量した。 肝臓の大部分を液体窒素で急速凍結し、残りの組織を4％パラホルムアルデヒドで固定し、処理し、ヘマトキシリンおよびエオシン（H＆E）染色後の組織学的検査のためにパラフィンに包埋しました。 肝障害は、Chemray 240自動生化学分析装置（Rayto Life and Analytical Sciences Co.、Ltd.、深セン、中国）を使用して、ALT、AST、DBIL、TBIL、TBA、およびy-GGTのレベルに基づいて評価されました。 MDA、GSH-Px、およびSODのレベルは、製造元の指示に従って市販のキットを使用して評価され、組織学的評価およびスコアリングは、研究を知らされていない病理学者による標準化された基準に従って実施されました。 リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）分析では、肝臓組織を液体窒素で急速に凍結し、分析まで-80度で保存しました。

RT-PCRによるPTGS2、BCL2、CYP7A1、FXR、Il -1、およびTNF-mRNAの分析

全RNAは、製造元の指示（Service bio、Wuhan、China）に従って、TRlzolを使用して肝臓組織から抽出されました。 全RNA（1 0μLl）はcDNAに逆転写されました。GAPDH、PTGS2、BCL2、CYP7A1、FXR、TNF-、およびIL -1のPCR反応（20ul）には2μLのcDNAが含まれていました。 、2μL2.5μMprimer、10μLgPCRミックス、および6μLddH、O。反応を65度で10分間、次に42度で60分間インキュベートし、72度で15分間終了させた。 PCRプライマー配列を表1に示します。RT-PCR反応は次のように行いました：95℃で10分間のプレサイクリング段階、続いて95℃で30秒間の変性、および60℃でのアニーリングの40サイクル。 60秒間。 融解曲線は65度から95度で、ランプ速度は0.3℃/15秒でした。 各アニーリングステップの最後に蛍光を測定し、融解曲線をモニターしてPCR産物の特異性を確認しました。 2-一CT法を使用して、コントロール遺伝子GAPDHと比較したPTGS2、BCL2、CYP7A1、FXR、IL -1 B、およびTNF-mRNAのmRNA発現レベルを決定しました。

統計分析

すべてのデータは平均±標準偏差（SD）として表されました。 統計分析は、GraphPadPrism8を使用して実行されました。

3. 0（GraphPad Software Inc.、米国カリフォルニア州サンディエゴ）。 データは、一元配置分散分析（ANOVA）と、それに続くダネット検定によって分析されました。<0.05 was="" considered="" statistically="">

結果

H.japonicumのコンポーネントとターゲット

H. japonicumの成分を完全に調査するために、経口バイオアベイラビリティやドラッグライクネスなどの薬物動態パラメータをスクリーニング基準として設定しませんでした。 TCMSPデータベースを通じて、49のアクティブコンポーネントと499の対応するH.japonicumのターゲットが取得されました。 重複を削除し、Uniprotで名前を修正した後、269個のターゲットが保持されました。 H.japonicumの有効成分とパラメーター情報を表2に示します。

胆汁うっ滞性肝炎の治療におけるH.japonicumの標的

GeneCardsデータベースでは、胆汁うっ滞性肝炎の682のターゲットがスクリーニングされました。 最後に、胆汁うっ滞性肝炎のH. japonicum治療に関連する可能性のある93の標的が、活性成分と疾患の標的を交差させることによって得られました（図2）。

複合ターゲットネットワーク

胆汁うっ滞性肝炎の治療におけるH.japonicumのコンポーネント-ターゲットネットワークは、115個のノードと175個のエッジで構成され、22個の六角形ノードがアクティブなコンポーネントを表し、93個のV字型ノードがターゲットを表します（図3）。

ノードのサイズと透明度は、次数に応じて設定されました。 次数の値が高いほど、ノードが大きくなり、色が暗くなるほど、接続性と重要性が高くなります。 結果に示されているように、H。japonicumには複数のコンポーネントと複数のターゲットのアクションがありました。 つまり、1つの化合物が複数のターゲットと相互作用し、異なる化合物が同じターゲットと相互作用します。 程度、中間性、近さなどのネットワークトポロジーパラメータによると、主な有効成分はケルセチン、ケンペロール、およびテトラメトキシルテオリンであり（表3）、コアターゲットはPTGS2、一酸化窒素シンターゼ（NOS3）でした。ペルオキシソーム増殖性活性化受容体ガンマ（PPARG）、ジペプチジルペプチダーゼV（DPP4）、BCL2、およびTNF（表4）。

PPIネットワーク

STRINGデータベースを使用して、93の薬剤と疾患の交差するターゲットの相互作用を分析しました。 高信頼度（0 .9）が設定され、分離されたターゲットが非表示になり、81個のターゲットと299個の相互作用リンクを持つPPIネットワークが取得されました（図4A）。 サイトハバのMCCアルゴリズムを適用すると、PPIネットワークの上位10のコア規制ターゲットは、TNF、IL6、IL1B、CXCL8、IL10、CCL2、ICAM1、NFKB1、NFKBIA、およびMYCでした（図4B）。

ターゲット機能と経路の強化

Metascapeを使用して、GO機能アノテーションと治療標的のKEGGパスウェイ濃縮分析を実施しました.41項目の細胞組成、105項目の分子機能、1753項目の生物学的プロセスを含む合計1899項目のGO項目が得られました。 H. japonicumが関与した主な生物学的プロセスと細胞成分には、リポ多糖への応答、サイトカインを介したシグナル伝達、アポトーシスシグナル伝達、膜ラフト（図5A、5B）、およびサイトカイン受容体結合、転写因子結合、セリンなどの分子機能が含まれていました。タイプのエンドペプチダーゼ活性（図5C）合計で146のKEGGシグナル伝達経路が分析され、最も注目すべきはAGE-RAGEおよびTNFシグナル伝達経路とB型肝炎、アルギニン生合成、および胆汁分泌です。 （図5D）。

ラットにおけるANIT誘発性胆汁うっ滞性肝炎から保護されたケルセチン

肝内胆汁うっ滞ラットモデルでは、ケルセチンは胆汁うっ滞を伴う肝障害において肝臓/体重比を回復させました（図6）。 肝内胆管増殖および肝細胞損傷に関連する胆汁うっ滞を評価するために使用された血清ALT、AST、DBIL、TBIL、TBA、およびY-GGTは、モデルラットで劇的に増加しました。 対照的に、ケルセチンは用量依存的に血清ALT、AST、DBIL、TBIL、TBA、およびGGTレベルを低下させました。 同様に、ケルセチン治療は、ANITによって誘発される肝臓の酸化ストレスを改善し、血清SODおよびGSH-Pxレベルを増加させ、MDAレベルを減少させました（図7）。

H＆E染色による組織学的評価は、ANIT誘発性肝内胆汁うっ滞に対するケルセチンの予防的および治療的効果の直接的な証拠を提供しました。 H＆E染色は、対照群の肝組織が正常な微細構造を示し、肝小葉が透明であり、肝細胞ケーブルが正常で整然としており、異常な形態学的変化がないことを示した。 対照的に、ANITで処理された肝臓切片は、不明瞭な肝小葉構造、肝索の混乱、肝腫脹、充血、および壊死を示しました（図8A）。 ただし、ケルセチンは、肝臓の腐敗と炎症性細胞の浸潤の程度を大幅に減衰させ、用量効果関係を示しました。 これらの結果は、ケルセチンがラットの肝内胆汁うっ滞に起因するANIT誘発性肝障害から保護することを明らかにした。

ケルセチン保護PTGS2、BCL2、CYP7A1、FXR I -1 B、およびTNF-mRNA発現

ANIT誘発肝内胆汁うっ滞性肝障害ラットの肝細胞に対するケルセチンの保護効果をさらに評価するために、PTGS2、BCL2、CYP7A1、FXR、IL -1、およびTNF-のmRNAレベルをRT-PCRを使用して測定しました。 図8Bに示すように、コントロールマウスと比較して、PTGS2、CYP7A1、IL -1、およびTNF-はANITモデルグループでアップレギュレーションされましたが、BCL2とFXRはダウンレギュレーションされました。 ただし、ケルセチン（50、100、および200 mg / kgの用量で）およびUCDAの投与

PTGS2、CYP7A1、IL -1、およびTNF-mRNAの発現を44.4％有意に減少させました（P<><><0.05), and=""><0.05), respectively,="" and="" increased="" the="" expression="" of="" bcl2="" and="" fxr="" mrna="" by="" 92.9%="" and=""><0.01), respectively,="" was="" the="" anit="" model="" group.="" these="" results="" showed="" that="" quercetin="" could="" protect="" hepatocytes="" by="" accelerating="" the="" excretion="" and="" transport="" of="" bile="" acids,="" maintaining="" the="" mitochondrial="" membrane="" potential="" of="" hepatocytes,="" and="" inhibiting="">

討論

まとめて、H.japonicumが胆汁うっ滞性肝炎の治療になり得ることを示したANIT誘発ラットモデルを使用しました。 ネットワーク薬理学と薬力学実験は、胆汁うっ滞性肝炎の治療におけるH. japonicumの効果と分子メカニズムを解明し、ハーブのさらなる研究と臨床応用のための理論的基礎を提供しました。

H. japonicumの主な化学成分は、フラボノイド[23]、フロログルシノール誘導体、およびジペプチドなどです[11]。 Puthur et alは、腹水細胞に対するH.japon-icumアセトニック抽出物のIC50は29.30 ug / mLであり、その結果はin vitroで良好な抗腫瘍活性を示し、H.japonicumのメタノール抽出物はいくつかの重要な酵素の阻害による害虫。 彼らの実験により、H。japonicumにはさらなる調査が必要なさまざまな生物活性があることが明らかになりました[24,25]。 現代の薬理学的研究は、H。ja-ponicumの抽出物が、肝保護、抗酸化、抗炎症薬、および抗腫瘍効果。H.japonicumおよびその主成分は、四塩化炭素誘発性肝炎、ANIT誘発性胆汁うっ滞、および抗アヒル肝炎ウイルス活性から保護し、肝機能および酸化的損傷を改善します[12,26]。 イソクエルシトリンとクエルセチン7-ラムノシドは、主要な活性肝保護成分です[11,27]。 本研究は、H.japonicumの主成分であるケルセチンが、ANITによって誘発される肝細胞の変性と壊死を軽減し、肝障害の程度を軽減できることを示しました。 H＆Eの結果は、胆汁うっ滞性肝炎に対するケルセチンの保護効果をさらに確認しました。

本研究では、ネットワーク薬理学研究と動物薬理学実験を組み合わせました。 まず、胆汁うっ滞性肝炎の治療におけるH.japonicumの主要な有効成分と標的をスクリーニングしました。 次に、「コンポーネント-ターゲット」ネットワークを構築し、ターゲットの機能強化を分析して、胆汁うっ滞性肝炎に対する治療作用の考えられるメカニズムを調査しました。 最後に、動物実験を通じてこれらのターゲットと分子メカニズムを検証しました。 私たちが観察した肝内胆汁うっ滞の生化学的指標と病理学的特徴は、ヒトの疾患と一致しており、胆汁うっ滞性肝炎のラットモデルの臨床的関連性を裏付けています。

胆汁酸の血清レベルは、肝内胆汁うっ滞障害とその結果として生じる肝障害の臨床診断の重要な証拠と見なされます。 肝内胆汁うっ滞は、胆汁および肝機能の正常な排泄の閉塞につながります

酵素は、血清TBIL、DBIL、およびTBAの増加をもたらし、ケルセチンがANIT誘発性の胆汁酸調節不全を逆転させることを示しました。 さらに、ケルセチンはAST、ALT、およびy-GGTの血清レベルを大幅に低下させましたが、これらは肝細胞の変性と壊死および肝細胞膜の損傷により劇的に上昇しました。

脂質過酸化は、ANIT誘発性胆汁うっ滞性肝炎の重要な病理学的メカニズムの1つであり、肝細胞の損傷を引き起こします|28-30]。 体内の酸化ストレスのレベルは胆汁うっ滞性肝炎の重症度を反映しているため、過酸化脂質レベルの評価に使用されるGSH-Px、SOD、およびMDAが重要な指標です。 本研究では、各ケルセチン投与グループは、SODおよびGSH-Px活性の増加とともに、MDAの有意な減少を示しました。 これらの結果は、ケルセチンによる小胞体細胞の損傷の軽減が、フリーラジカルの除去、脂質過酸化の阻害、および過酸化脂質の生成の減少に関連していることを示しています。

ネットワーク薬理学の結果は、H。japonicumによる胆汁うっ滞性肝炎の治療に関連する主な標的には、PTGS2、NOS3、PPARG、DPP4、BCL2、およびTNFが含まれることを示しました。 本研究では、5つのターゲット、PTGS2、BCL2、TNF-、FXR、およびCYP7A1。 胆汁うっ滞性肝炎、肝線維症、および肝障害に関連するものが、分子レベルの研究のために選択されました。 PTGS2はシクロオキシゲナーゼ2としても知られ、NF-KB経路の下流分子です[31,32]。PTGS2は、細胞増殖を促進し、細胞アポトーシスを阻害し、血管新生を促進し、免疫機能を阻害することにより、炎症の発生に関与します。 TNF-は胆汁うっ滞のプロセスに関与する重要な炎症性メディエーターです。 私たちの研究では、PTGS2、TNF-タンパク質、およびmRNAの発現レベルは、ANIT誘発性胆汁うっ滞性肝障害モデルラットの肝臓組織でアップレギュレートされ、PTGS2の過剰発現が急性肝障害と胆汁うっ滞。

BCL2は細胞アポトーシスを阻害するタンパク質です。 細胞成分の酸化的損傷とDNA断片化を防ぎ、抗酸化経路を調節します[33]。 また、ミトコンドリア膜電位を改善し、細胞膜輸送に影響を与えることによってシトクロムCとアポトーシス誘導因子のミトコンドリア放出を阻害し、それによって肝細胞アポトーシスおよびその他の効果を阻害します[34,35]。

FXRは、肝臓での胆汁酸の恒常性を調節する胆汁酸受容体です[36]。 それは、小さなヘテロダイマーシャペロンによって媒介される負のフィードバック調節を介して胆汁酸合成速度制限酵素CYP7A1の活性を阻害し、胆汁酸の合成を減少させます。 同時に、FXRは肝細胞胆管の側壁にあるトランスポーターBSEPとMRP2の発現をアップレギュレートし、肝細胞を保護するために胆汁酸の排出と輸送を促進します[37,38]。

我々の結果は、モデルラットがANITの作用下で大量のコール酸うっ滞を有し、FXR発現のダウンレギュレーションとその結果としてのCYP7A1発現の増加をもたらすことを示した。 また、FXRのダウンレギュレーションされた発現は、それが調節する下流遺伝子BSEPおよびMRP2の発現の減少を引き起こしました。 ケルセチンの介入は、ラット肝臓組織におけるFXRの発現レベルを有意に回復させ、モデルグループの反対方向にその下流遺伝子CYP7A1、BSEP、およびMRP2の発現を調節しました。 この研究の結果は、以前の研究の結論と一致しています。

ANIT誘発性胆汁うっ滞性肝炎には、ヒトと同様の生化学的および病理学的変化があります。 しかし、本研究では、単一のANIT治療の病理学的プロセスは短く、通常48〜72時間のより長い実験期間を必要とする研究を制限していました。 ANITを複数回断続的に投与することで、この欠点を克服できます。 繁体字中国語医学のネットワーク薬理学は、研究対象として医薬品に見られる化学組成を取ります。 しかし、漢方薬の薬効に関与する化学物質は、薬力学的成分のグループである可能性があるため、必ずしも単一の成分であるとは限りません。 繁体字中国語医学における物質の標的と経路は通常知られているため、新しいメカニズムの発見には限界があります。 将来的には、人工知能アルゴリズムをネットワーク薬理学と組み合わせて、より包括的で客観的な情報を取得できるようになります。

結論

要約すると、ケルセチンなどの有効成分の助けを借りて、H。japonicumはFXRを活性化し、CYP7A1を阻害し、肝細胞での胆汁酸の合成を減らし、胆汁酸の肝外排泄を増加させることができます。 また、BCL2を調節してミトコンドリア膜電位を改善し、肝細胞アポトーシスを阻害し、肝臓での胆汁酸の恒常性を調節することができます。 さらに、PTGS2、IL -1、およびTNF-の発現を阻害することにより、炎症反応を妨げる可能性があります。 簡単に言えば、ネットワーク薬理学分析によれば、ケルセチン、ケンペロール、およびテトラメトキシルテオリンは、胆汁うっ滞性肝炎を改善するためのH.japonicumの主な有効成分です。 この研究の結果は、ヒト肝疾患におけるケルセチン、ケンペロール、およびテトラメトキシルテオリンの役割と、胆汁うっ滞性肝炎におけるPTGS2、BCL2、CYP7A1、およびFXR遺伝子の役割に関する将来の研究をサポートする可能性があります。