議論

SNCA の細胞間伝達の研究のための定量的、リアルタイム技術を開発しました。線虫. このモデルは、SNCA 凝集体の漸進的な蓄積を含む、シヌクレイノパチーの多くの重要な特徴を示しています。神経変性,行動障害、 と減った寿命. 遺伝性と薬理学的操作の動物が強い相関関係を示しています。老化率、経細胞SNCA伝達、および神経変性表現型、および同様に、関連するさまざまな操作アンチエイジング効果これらのイベントの進行を遅らせることができます。シヌクレイノパシーの加齢依存性進行タンパク質分解の低下を伴います。アンチエイジング トリートメントタンパク質分解を仲介するシステムを復元できます。 さらに、リソソーム機能の回復は、これらの老化モデルにおける凝集体の伝播とそれに伴う神経変性を軽減しました。 BiFC は広く使用されているフロリダ生細胞におけるタンパク質間相互作用およびタンパク質二量体化および/またはオリゴマー化を評価するために正常に適用された蛍光技術。7 V1S-SV2 BiFC ペアは、フロリダこれらのタンパク質が哺乳動物細胞で共発現されると、SNCAの二量体化/オリゴマー化が起こります。7 以前の研究では、17 V1SおよびSV2のいずれかを発現する神経芽細胞腫細胞株を生成することにより、SNCAタンパク質の細胞間伝達および伝達されたタンパク質の共凝集を内因性 SNCA は BiFC で視覚化できますフロリダ蛍光これらの細胞の共培養中。

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BiFC システムの重要な技術的問題の 1 つは、各タンパク質の細胞型特異的な発現を検証することです。各細胞型における SNCA トランスジェニック発現の定量的分析は技術的に実行可能ではありませんが、SNCA が独占的であるという議論を裏付ける一連のデータがあります。意図した細胞タイプでのみ発現します。 まずはDsRed失敗癌はフリップでのみ検出されます-21 咽頭筋細胞にはまったくありません。 第二に、非常に特異的で感度の高い抗体を用いたSNCAの免疫蛍光染色は、目的の細胞で特異的にこのタンパク質の発現を示しました種類。 第三に、ワームにおける同じ BiFC ペアの発現とともにダイン-1変異シグニフィフィBiFCをカンタンに減らしましたフロリダBiFCの生成を示す蛍光シグナルフロリダウォレスエンドサイトーシスが必要です。 これは、BiFC シグナルが同じ細胞型での BiFC ペアの共発現に由来するのではなく、タンパク質の細胞間伝達に由来することを示唆しています。

新規遺伝子調節因子の同定のためのシステム。 さらに、C. elegans の咽頭の特徴的な構造により、遺伝的修飾因子および低分子修飾因子の大規模なスクリーニングにおいて、シヌクレイノパチーの伝達の変化を簡単に識別することができます。

老化の影響集計自体ではなく、「送信」に関するプロセスが、この論文の重要な主題です。 ここで、老化とリソソームの機能不全は、細胞自律凝集自体には影響せず、凝集の伝達のみに影響を与えると主張しようとしているわけではないことを明確にしたいと思います. 私たちの BiFC システムは、送信イベントを定量化するための優れたシステムですが、コール自律アグリゲーションを監視するようには設計されていません。 25-27私たち自身の研究を含む以前の研究では、細胞自律的 SNCA 凝集のクリアランスにおけるライソソーム機能不全の影響に取り組んでいます。 ただし、これらの研究が経細胞凝集体の伝達と増幅の影響を除外した細胞自律凝集のみを観察したという決定的な証拠がないことも指摘したいと思います。 また、アグリゲーションの開始は、アグリゲート送信の絶対要件であることを強調したいと思います。 実際、単一のトランスジェニック動物でも、基底レベルの細胞自律的凝集が自発的に起こることを示しています（図8F）。

のGlcNAcのアンチエイジング効果12 これは、GlcNAc が DAF-16 経路に直接影響を与えるのではなく、独立した老化経路を介して作用することにより、daf-16 表現型を救うことを示しています。 私たちが提示したデータは、SNCA 感染が特定の老化経路の制御下にあるのではなく、一般的な老化によって調節されていることを示唆しています。

私たちの現在の研究は、PDおよび関連するシヌクレイノパシーの進行を停止または遅らせるための治療戦略として、一般的なアンチエイジングアプローチの使用を検討するための基礎を提供します. さらに、リソソーム機能のエンハンサーは、これらの疾患の進行を停止または遅延させることを目的とした治療法の候補と見なすことができます。 理論的には、同じアプローチを他の加齢性神経変性疾患にも適用できます。その多くは、特定のタンパク質凝集体の増殖を通じて進行すると考えられています。 さまざまなタンパク質凝集体の増殖が同じ基本原理を共有していると仮定すると、アンチエイジングおよびプロリソソーム戦略は、多くの神経変性疾患の進行を止めるための一般的な治療法に発展する可能性があると慎重に推測しています. この仮説は、BiFC ベースの動物モデルを、MAPT、ポリグルタミンタンパク質、および TARDBP を含む他の伝達モデルに適用することで対処できます。

材料および方法

線虫の菌株と培養 すべての菌株は、標準的な手順を使用して処理し、大腸菌 (E. coli) 株 OP50 の芝生を含む線虫増殖培地 (NGM) プレートで 20℃で増殖させました。 unc-119(ed3)、dyn-1(ky51)、および asp-4(ok2693) は、Caenorhabditis Genetics Center (CGC; ミネソタ州セントポールのミネソタ大学) から入手しました。 、米国）。 変異株 asp-1(tm666) は、C. elegans National BioResource Project (NBRP; 東京女子医科大学医学部、東京、日本) から提供されました。 変異株 daf-2 (e1370) と daf-16 (mu86) は、Kyuhyung Kim 教授 (DGIST、大邱、韓国) からの寛大な贈り物でした。

線虫のプラスミド構築

V1S および SV2 テンプレート プラスミドは、Dr. Pamela McLean (マサチューセッツ総合病院、ボストン、マサチューセッツ州、米国) からの寛大な贈り物でした。 1) Pmyo-2::EGFP myo-2 プロモーター (Pmyo-2) は、野生型 N2 線虫から得られたゲノム DNA から PCR 増幅されました。

HindIII サイトを含むセンス プライマー 50 -GACAAGCTTGGGGTTTTGTGCTGTG GACGTT-30、および BamHI サイトを含むアンチセンス プライマー 50 - GACGGATCCTTCTGTGTCTGACGATCGAGG-30 を使用しました。 Pmyo-2::EGFP は、PCR 産物を pFX_EGFPT ベクターの HindIII および BamHI サイトに挿入することによって生成されました.30 2) Pmyo-2::SNCA(Myc) センスSalI サイトを含むプライマー 50 - AGCGTCGACGC CACCATGGATGTATTCATGAAAGGAC-30 および myc タグ配列と BglII サイトを含むアンチセンス プライマー 50 - AGCA GATCTCTACAGATCCTCTTCAGAGATGAGTTTCTGCTCG GCTTCAGGTTCGTAGTCTTG-30 を使用して MYC- pcDNA3.1 MycHis SNCA ベクターから得られたタグ付きヒト SNCA。 （私のC）。 3) Pmyo-2::V1S SalIサイトを含むセンスプライマー50 -AGCGTCGACGCCACCATGGTGAGCAAGGCCGAGG-30と、BglIIサイトを含むアンチセンスプライマー50 -AGCAGATCTTTAGGCTT CAGGTTCGTAGTC{{ 25}} を使用して V1S を増幅しました。 さらに、Pmyo-2::EGFP の EGFP フラグメントを PCR 増幅された V1S フラグメントに置き換えて、Pmyo-2::V1S を構築しました。 4) Pmyo-2::V1Q25 claI 部位を含むセンスプライマー 50 - TAGGCAATCGA TATGGCGACCCTGGAAAAGCTG-30、および claI 部位を含むアンチセンスプライマー 50 -TGCTTAATCGATAGGTCGGTGCA GAGGCTCCTC{{ 38}} を使用して Q25 を増幅しました。 次に、Pmyo-2::V1S のヒト SNCA フラグメントを PCR 増幅 Q25 フラグメントに置き換えて、Pmyo-2::V1Q25 を構築しました。 4) Pflflp-21::SV2 pFX_EGFPT の EGFP 断片を PCR 増幅した SV2 断片に置き換え、SV2 ベクターを作成した。

SpeI サイトを含むセンス プライマー 50 -AGCACTAGTGCCACCATGGATG TATTCATGAAAGG-30、および BglII サイトを含むアンチセンス プライマー 50 -AGCAGATCTTACTTGTACAGCTCGTCCATGC CG-30 を使用しました。 Flip-21 プロモーター (Pflflp-21) を N2 ゲノム DNA から PCR 増幅し、SV2 ベクターの KpnI および SalI 部位にサブクローニングして、Pflflp-21::SV2 を生成しました。 KpnI サイトを含むセンス プライマー 50 - AGCGGTACCAACTAGGTCCAGTGACCGAAAG-30 および SalI サイトを含むアンチセンス プライマー 50 -AGCGTCGACGCCAC CATGGATGTATTCATGAAAGGAC-30 を使用して、flflp{{15}プロモーター。 5) Pfllflp-21::SV2-ICR-DsRed DsRedを咽頭ニューロンマーカーとして共発現するSV2ベクターを作成するために、Pflflp-21をpFXのKpnIおよびSalI部位にサブクローニングした{ {21}}DsRedxT vector30 で、名前は Pflflp-21::DsRed です。 flflp-21 プロモーター下での SV2 と DsRed の共発現は、N2.31 から PCR 増幅された SV2 と DsRed の間にシストロン間領域 (ICR) を配置することによって達成されました。SV2 フラグメントは融合によって ICR 領域と融合されました。 PCR32 および Pfllflp-21::DsRed にサブクローニングして、Pflflp-21::SV2-ICR DsRed を構築します。 PCR 反応には、SalI サイト 50 -AGCGTC GACGCCACCATGGATGTATTCATGAAAGGAC-30 を含むセンス プライマーと、ICR との重複領域を含むアンチセンス プライマー 50 -CGATCATTTTGGAGATTACTTGTACAGCTTGTCC-30 を使用しました。 SV2用。 ICR領域は、SV2との重複領域を含むセンスプライマー、50 -GGACGAGCTGTACAAGTAATCTCCAAAAT CATCG-30、およびSpeI部位を含むアンチセンスプライマー50 - AGCACTAGTTACCCTGTAATAATATATTAAAC-3で増幅されました。

BiFC トランスジェニック ワームの確立

Pmyo-2::V1S および Pfllflp-21::SV2-ICR-DsRed プラスミドは、選択マーカー pRF4 とともに後期 L4- ステージ N2 ワームの生殖腺に同時注入されましたこれは、BiFC ペアを発現する二重トランスジェニック系統を作るために、変異型コラーゲン遺伝子、rol- 6 (su1006)、33 を発現します。 BiFC のネガティブ コントロールとして、Pmyo-2::V1S のみを pRF4 とともに N2 ワームに注入し、Pfllflp-21::SV2-ICR DsRed のみを unc{{18 }}(ed3) unc-119(C) 遺伝子を発現する選択マーカー pCFJ151 を持つ突然変異体ワーム.34 プラスミド Pmyo-2::V1 は、 Quik Change Site-Directed Mutagenesis Kit (Stratagene、200521) を使用して、Pmyo-2::V1S の SNCA コード シーケンスの直前の終止コドン。 次に、Pmyo-2::V1 および Pflflp-21::SV2-ICR-DsRed プラスミドを pRF4 とともに N2 に同時注入しました。 プラスミド Pmyo-2::V1Q25 は、SNCA を Pmyo-2:: V1S の Q25 フラグメントに置き換えることにより、25 グルタミン ストレッチを持つハンチンチン エキソン 1 を発現するように生成されました。 次に、Pmyo-2::V1Q25 および Pflflp-21::SV2-ICR-DsRed プラスミドを pRF4 とともに N2 に同時注入しました。 さらに、Pflflp-21::DsRed は、ニューロンにおける一般的なタンパク質の過剰発現の影響のコントロールとして、pRF4 とともに N2 に注入されました。 導入されたプラスミドの染色体統合のために、注入された系統をUV照射にさらしました。 UV 照射後、各積分線を N2 で 4 回交差させました。 Pmyo-2::V1S および Pfllflp-21::SV2-ICR-DsRed を持つ二重トランスジェニック系統は、統合された Pmyo-2::V1S 系統と統合されたPflflp-21::SV2-ICR-DsRed 行。 これらのトランスジェニック ワームはすべて、ローラー表現型と DsRed の発現を示しました。

咽頭ニューロンの蛍光。

タグなし SNCA モデルの生成 Pmyo-2::SNCA および Pfllflp-21::SNCA プラスミドは、QuikChange Site-Directed Mutagenesis を使用して、SNCA コード配列の直後に終止コドンを導入することによってのみ SNCA を発現するように設計されました。キット。 ネガティブ コントロールとして、Pmyo-2::SNCA のみを pRF4 と共に N2 ワームに注射しました。 Pmyo-2::SNCA および Pflflp-21:: SNCA プラスミドは、後期 L4- 期の N2 線虫の生殖腺に pRF4 と共に注入されました。 これらのワームはすべてローラー表現型を示し、各遺伝子型の 3 つの代表的な系統を実験に使用しました。 老化に関連する BiFC モデルの生成-2(e1370) および daf-16 (mu86) pRF4 変異体ワーム。 加齢に関連する BiFC モデルのコントロールとして、Pmyo-2::V1S または Pfllflp-21::SV2-ICR-DsRed のみを後期 L{{30} の生殖腺に注入しました。 } 段階の N2 および daf-16(mu86) pRF4 変異体ワーム。 導入されたプラスミドを含むいくつかのトランスジェニック系統が得られた後、各変異体バックグラウンドの3つの代表的な系統が実験に使用されました。

hlh-30p::hlh-30 トランスジェニック系統の生成

hlh-30p::hlh-30::gfp を発現するプラスミドは、Dr. Malene Hansen (Sanford-Burnham Medical Research Institute, CA, USA) からの寛大な贈り物でした。 プラスミド hlh-30p::hlh-30 は、QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit を使用して GFP コード配列の前に停止コドンを導入し、GFP 発現を阻害するように設計されています。 コントロールとして、各 Pmyo-2::V1S または Pflflp-21::SV2-ICRDsRed および hlh-30p::hlh-30 をpRF4 を持つ後期 L4- ステージ N2 ワームの生殖腺。 Pmyo-2::V1S、Pfllflp-21::SV2-ICR-DsRed および hlh-30p::hlh-30 を発現するプラスミドを、 pRF4を持つL4-ステージのdaf-16(mu86)突然変異体ワームの生殖腺。 リソソーム機能不全を分析するために、リソソーム酵素カテプシン遺伝子が不活性化されている asp-4(ok2693) および asp-1(tm666) 変異線虫が使用されました。 Pmyo-2::V1S および Pfllflp-21::SV2-ICR-DsRed プラスミドは、後期 L4- 段階の突然変異体線虫の生殖腺に pRF4 とともに同時注入されました。 導入されたプラスミドを含むトランスジェニック系統が得られた後、各遺伝子型の代表的な3系統を実験に使用した。

免疫蛍光顕微鏡法

ワームの免疫蛍光染色のために、野生型 N2 およびトランスジェニックワームを収集し、M9 バッファー (22 mM KH2PO4、22 mM Na2HPO4、85 mM NaCl、1 mM MgSO4) で洗浄し、MRWB 中の 4% パラホルムアルデヒドで前固定しました ( 80 mM KCl、20 mM NaCl、1{{60}} mM EGTA、5 mM スペルミジン [Sigma-Aldrich、S0266]、50パーセントメタノール）。 浸透のためにキューティクル層の剛性を下げるために、ワームを液体窒素を使用して数回の凍結/解凍サイクルにかけ、4℃で2時間攪拌しながらインキュベートしました。 還元と酸化のステップはワームの透過性を高めるため、ワームは Tris-Triton バッファー (100 mM Tris-HCl、pH 7.4、1% Triton X-100 [Bio-Rad Laboratories Inc., 161– ０４０７］、１ｍＭ ＥＤＴＡ）、トリス－トリトン緩衝液中の１パーセントｂ－メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍ７５２２）と共に室温（ＲＴ）で２時間インキュベートした。 続いて、ワームをコラゲナーゼ溶液 (100 mM Tris-HCl、pH 7.4、1 mM CaCl2、0.1% トリトン X-100 中の IV 型コラゲナーゼ [Worthington Biochemical Co.、LS004188] 100 単位) で回転させながらインキュベートしました。 RTで4時間。 次に、0.3% H2O2 を添加した Tris-Triton 緩衝液 (Sigma-Aldrich、H1009) で線虫を室温で 15 分間インキュベートしました。 ブロッキングバッファー (0.1% ウシ血清アルブミン [BSA; Sigma-Aldrich, A7906]、0.5% Triton X-100、リン酸緩衝生理食塩水中 1 mM EDTA [PBS; GenDEPOT、CAP08-050) でのインキュベーション後])、一次抗体溶液 (PBS 中 1% BSA、0.5% Triton X-100、1 mM EDTA) 中、モノクローナル抗体 274 mAb10 とともに線虫を 4℃ で一晩インキュベートしました。 翌日、ワームをブロッキングバッファーで洗浄し、ローダミンレッド X 結合ヤギ抗マウス IgG (1:100; Jackson Immunoresearch Laboratories、115-295-166) と 2 時間インキュベートしました。 次にワームをブロッキングバッファーで洗浄し、Antifade 試薬 (Invitrogen、P36930) にマウントしました。 サンプルは、Olympus FV1000 共焦点レーザー走査型顕微鏡 (Olympus、東京、日本) を使用して分析しました。

生きた虫の蛍光顕微鏡

ワームは、M9 バッファー中の 10 mM アジ化ナトリウムで固定化され、カバースリップで覆われました。 ワームの画像は、オリンパス FV1000 共焦点レーザー走査型顕微鏡を使用して取得されました。

ウェスタンブロッティング

成虫を M9 バッファーで洗浄し、続いて 1% の Triton X-100 を含む PBS で洗浄しました。 ワームのペレットは、1 パーセントの Triton X-100、1 パーセント (vol/vol) のプロテアーゼ阻害剤カクテル (Sigma-Aldrich、P8340) を含む PBS で超音波処理し、遠心分離して Triton 可溶性 (上清) を得ました。 ) および不溶性 (ペレット) 画分。 タンパク質濃度は、BCAタンパク質アッセイ（Pierce Biotechnology、23223および23224）を使用して測定しました。 タンパク質サンプル (SNCA 発現試験用に 3 mg、ポリユビキチンタンパク質の検出用に 50 mg、SNCA の溶解度差用に 20 mg (V1S、V1SCSV2 系統) および 40 mg (SV2 系統)) を 12% SDS-PAGE ゲルにロードしました。 ウェスタンブロッティングに使用した一次抗体は、モノクローナル抗 SNCA 抗体、274 mAb (1:1,500) および Syn-1 (1:1,500; BD BioScience、610787)、および抗ユビキチン抗体 (1:3、{ {35}}; アブカム、ab7254)。 化学発光検出は、LAS-3000 ルミネッセンス イメージ アナライザー (富士フイルム、東京、日本) および Amersham imager 600 (Ge Healthcare Life Sciences、マールボロ、マサチューセッツ州、米国)、および Multi Gauge (v3.0) ソフトウェア (富士フイルム) を使用して実行されました。 、 東京、日本）。

ドットブロッティング

各系統の成虫を M9 バッファーで洗浄し、続いて 1% の Triton X-100 を含む PBS で洗浄しました。 ワームのペレットは、1 パーセントの Triton X-100 と 1 パーセント (vol/vol) のプロテアーゼ阻害剤カクテルを含む PBS で超音波処理されました。 タンパク質サンプル (50 0 ng) をニトロセルロース膜にロードし、乾燥させてブロッキング溶液でインキュベートしました。 ドットブロッティングに使用した一次抗体は、モノクローナル抗 SNCA 抗体 274 mAb と Syn-O2 で、後者は SNCA 凝集体に特異的です。 化学発光検出は、LAS-3000 発光​​イメージ アナライザーと Amersham imager 600、および Multi Gauge (v3.0) ソフトウェアを使用して実行されました。

老化防止剤治療

N-アセチルグルコサミン (GlcNAc) (Sigma-Aldrich、A8625) を蒸留水に溶解し、原液として 1 M にしました。 ストック溶液を LB 液体培地 (Sigma-Aldrich、L3022) で希釈しました。 各トランスジェニック系統の L4- 期の線虫を、最終濃度 10 mM GlcNAc を含む NGM プレートに移しました。 シングル ワーム PCR 各系統からの妊娠したシングル ワームを溶解バッファー (50 mM KCl、10 mM Tris-HCl、pH 8.3、2.5 mM MgCl2、0.45% NP-40 [IGEPAL; Sigma-Aldrich、I3021]、0.45% Tween 20 [Sigma-Aldrich、P1379]) と 0.1 mg/ml プロテイナーゼ K (Sigma Aldrich、P4850)。 バッファー内の 1 匹のワームを液体窒素を使用して数回の凍結融解サイクルにかけ、65 C で 1 時間インキュベートしてゲノム DNA を放出させ、95 C で 15 分間加熱してプロテイナーゼ K を不活化しました。 Bio-Rad MyCycler PCRサーマルサイクラーシステム（Bio-Rad Laboratories Inc.、Hercules、CA、USA）でEx TaqTMポリメラーゼ（Takara Biotechnology、RR001A）を使用して実行しました。

PCR制限断片長多型ジェノタイピング

重力 各系統から 5 匹の線虫を 0.1 mg/ml プロテイナーゼ K を含む溶解バッファーで溶解した。 PCRを行った後、PCR産物をNcoI酵素（New England Biolabs Inc.、R3193S）で37℃で一晩消化し、電気泳動して制限を検出しました。フラグメント長多型。

定量的 PCR (qPCR)

成虫のトランスジェニック ワームを収集し、M9 バッファーで洗浄しました。 バッファー内のワームを超音波処理し、サンプルを液体窒素を使用して数回の凍結融解サイクルにかけました。 Trizol Reagent (Invitrogen、15596-026) で RNA を抽出し、RNeasy ミニキット (Qiagen、74106) を使用して精製しました。 iScript cDNA合成キット（Bio-Rad Laboratories Inc.、170–8891）を使用して、500 ngの全RNAから各cDNAを合成しました。 リアルタイム PCR では、標的遺伝子と特定のプライマーを SYBR Premix Ex Taq II (Takara Biotechnology、RR081A) と 96- ウェル プレートで混合しました。 他のグループによって以前に設計された特定のプライマーが使用されました.14 DNA産物は、7500リアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems、Foster City、CA、USA）を使用して分析されました。 標的遺伝子の相対的なmRNAレベルは、作用するように正規化されました-1。

dyn-1変異体の熱ショック処理

二重トランスジェニック ワーム (Pmyo-2::V1S C Pfllflp-21::SV2-ICR DsRed) は、dyn-1(ky51) 変異ワームと交配されました.20 成人dyn-1(ky51) 変異の有無にかかわらず、二重トランスジェニック系統の母線虫を、大腸菌 OP50 を含む NGM プレートで 20 C で 4 時間培養して産卵し、その後除去しました。 L4-期の各系統の同調後代を30℃で培養して観察した。

咽頭ポンピング分析

咽頭ポンピングは、蛍光顕微鏡を使用して室温で 1 分間カウントされました。 野生型 N2、変異体、およびトランスジェニック ワームを分析しました。 データは、PPM (1 分あたりのポンプ数) として表されました。

寿命アッセイ

成虫の母虫が産んだ卵は、20℃で大腸菌 OP50 を播種した NGM プレート上で L4 幼虫期まで同期的に成長させました。L4- 期の虫を、100 mM 5- を含む NGM プレートに移しました。フルオロ-20 -デオキシウリジン (Sigma-Aldrich、F0503) を使用して、子孫の生成を防ぎます。 生きているか死んでいるワームの数は、1 日または 2 日ごとに記録されました。 破裂したり、穴を掘ったり、プレートから這い出たりしたワームは検閲されましたが、検閲された動物として寿命分析に含まれていました。 生存データは、OASIS (寿命アッセイの生存分析のためのオンライン アプリケーション) を使用して分析されました。

統計分析

すべての実験はブラインド コードで実行され、少なくとも 3 回繰り返されました。 図中の値は平均として表される。Ｐ値が±ＳＥＭである場合、差は有意であると見なされた。 0.05. グラフは、Prism 5 ソフトウェア (Graphpad Software Inc.、米国カリフォルニア州サンディエゴ) を使用して描画されました。 値は、InStat (バージョン 3.05) ソフトウェア (Graphpad Software Inc.、San Diego、CA、USA) を使用して、Tukey 事後検定と一元配置分散分析によって比較されました。

略語

ACTB アクチン、b

AD アルツハイマー病

Ab アミロイド b

ALS 筋萎縮性側索硬化症

BiFC 二分子蛍光補完

GlcNAc N-アセチルグルコサミン

PD パーキンソン病

潜在的な利益相反の開示

潜在的な利益相反は開示されませんでした。

資金調達

この作品は、韓国政府 (MEST) (NRF-2015R1A2A1A10052540、NRF-2015R1A2A1A15053661)、および韓国保健技術研究開発プロジェクト、保健省によって資金提供された国立研究財団 (NRF) 助成金によって支援されました。 & 福祉、大韓民国 (HI14C0093)、および建国大学の 2014 KU ブレイン プール プログラム。

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