ジャスモン酸メチルは、ザクロ（Punica Granatum L.）の葉で特徴的な加水分解型タンニン、ファボノイド、およびフィトオキシリピン応答を誘発しますパート1
Mar 18, 2022
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概要：植物で生成されるジャスモン酸メチル（MeJA）は、環境ストレスへの応答を仲介することができます。 MeJAの外因性アプリケーションは、シグナル伝達経路を活性化し、多くの植物種でファイトアレキシンの蓄積を誘導することも示されています。 ザクロの植物が環境ストレスに生化学的にどのように反応するかを理解するために、MeJAを適用したザクロの葉で代謝物分析を行い、加水分解型タンニン、フラボノイド、およびフィトオキシリピンの独特の変化を明らかにしました。 さらに、モックおよびMeJAで処理されたザクロの葉のトランスクリプトームおよびリアルタイムqPCR分析により、加水分解性タンニン、フラボノイド、およびフィトオキシリピン経路。 唯一の分子的、生化学的、および生物情報学的特性評価リポキシゲナーゼ持続的なMeJA誘導発現により、非ジャスモン酸（非JA）フィトオキシリピンが生成された細胞内コンパートメントには存在しませんが、多価不飽和脂肪酸を酸化できることが示されました。 これらの結果は、フラボノイドとアントシアニンの広範な抑制が転写レベルで少なくとも部分的に制御されている一方で、非JAの生合成を誘導することをまとめて示唆しました。植物性オキシリピン転写的に調節されていない可能性があります。 全体として、ザクロの葉が環境ストレスにどのように反応するかをよりよく理解することは、植物の健康と生産性を促進するだけでなく、ザクロ植物によって生産される果物は栄養化合物の豊富な供給源であるため、人間の健康にも影響を与えます。
キーワード：ジャスモン酸メチル。フラボノイド・アントシアニン・脂肪酸。植物性オキシリピン・リポキシゲナーゼ
序章
草食動物や病原体によって負傷または攻撃されると、植物はジャスモン酸メチル（MeJA）を生成および放出します。これは、負傷していない植物組織および隣接する植物によって認識され、防御反応を活性化します（Cheong and Choi2003）。 さらに、植物へのMeJAの外因性の適用は、シグナル伝達経路、ならびにファイトアレキシンとして知られる病原性関連タンパク質および防御化学物質の産生を誘発することが示されています。 フラボノイドやアントシアニンなどのフェノール性フィトアレキシンは、Arabidopsisthaliana、ブドウ（Vitis vinifera）、バナナ（Musa acuminate）、リンゴ（Malusdomestica）、赤いラズベリー（Rubus idaeus）などのさまざまな植物でMeJA処理に応答して蓄積の増加を示しました）（Pandey et al.2016; Portu et al.2015; De Geyteret al.2012; Shafiq et al.2011; Flo-res and Ruiz del Castillo 2014）。 フラボノイドとアントシアニンの生合成は、カルコンシンターゼ（CHS）によって触媒されるクマロイルCoAと3分子のマロニルCoAからのナリンゲニンカルコンの形成と、それに続くカルコンイソメラーゼ（CHI）によるナリンゲニンカルコンのナリンゲニンへの異性化から始まります。 次に、ナリンゲニンを使用してコアフラボノイドおよびアントシアニン骨格を生成します。これらの骨格は、グリコシル、メチル、ヒドロキシル、およびプレニル官能基でさらに修飾され、多様な構造と機能を生み出します（Tian et al.2008）。
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In addition to phenolic phytoalexins, the production of Phyto-oxylipins upon MeJA induction has also been reported in a few plant species (Deboever et al.2020). Phyto-oxylipins are oxygenated fatty acids and derivatives that play a role in plant growth, development, stress response, and innate immunity(Wasternack and Feussner 2018). The initial step of Phyto-oxylipin biosynthesis involves oxidation of polyunsaturated fatty acids(PUFAs) to fatty acid hydroperoxides (HPOs)by lipoxygenases(LOXs)(Andreou and Feussner 2009). Plant LOXs are grouped into two subfamilies according to their protein sequences; type ILOXs are highly homologous(>75％の類似性）そしてシグナルペプチドを含まないのに対し、II型LOXは全体的に低い配列類似性を持っています（<35%)but all="" contain="" a="" chloroplast="" target="" peptide="" (feussner="" and="" wasternack="" 2002).="" plant="" loxs="" can="" also="" be="" classified="" based="" on="" enzymatic="" activities;9-loxs="" and="" 13-loxs="" target="" the="" c-9="" and="" c-13="" position="" of="" the="" fatty="" acid="" substrate,="" respectively="" (feussner="" and="" wasternack="" 2002).="" hpos="" generated="" by="" loxs="" can="" be="" further="" transformed="" to="" various="" phyto-oxylipins,="" such="" as="" hydroxy="" fatty="" acids="" by="" reductases,="" keto="" fatty="" acids="" by="" loxs,="" epoxy="" fatty="" acids="" by="" per-oxygenases(pxgs),="" and="" dihydroxy="" fatty="" acids="" by="" loxs="" or="" α-dioxygenase="" α-doxs).="" notably,13-hydroperoxy-linolenic="" acid(an="" hpo)produced="" from="" linolenic="" acid="" by="" 13-lox="" can="" initiate="" a="" series="" of="" reactions="" to="" form="" jasmonic="" acid(ja),="" meja,="" and="" the="" bioactive="" ja-isoleucine="">
ザクロ（Punica granatum L.）は、シキミ酸経路の中間体に由来するフラボノイド、アントシアニン、加水分解型タンニン（HT）など、果実に豊富に含まれるフェノール化合物で評価される特殊な園芸作物です（Ono et al.2016 ）。 これまで多くの研究が、人間のストレスや病気を緩和する上でのザクロのフェノール類の役割に焦点を当ててきました（Wu and Tian 2017）。対照的に、非生物的および生物的要因からザクロを守るためのフェノール類や他の植物化学物質の機能についてはほとんど知られていません（例：葉や果実の傷、病原体、MeJA誘導）。 最近の2つの報告では、ザクロ果実の収穫後の品質に関する収穫前のMeJA処理が評価されました（Koushesh Saba and Zarei 2019; Garcia-Pastor et al.2020）。 葉ではなく、MeJAで処理した果実の総アントシアニン、フラボノイド、およびフェノール類を、分光光度計を使用してまとめて分析しました。 研究の1つでは、質量分析を使用して個々のアントシアニンも分析しました（Garcia-Pastor et al.2020）。 しかし、葉または果実のザクロの植物組織が、結実する前に環境ストレスにどのように反応するかは不明なままです。
ザクロ植物と環境要因との相互作用の分析を開始するために、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）および液体クロマトグラフィー-エレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析（LC-ESI-MS / MS）を使用して、外因性MeJAアプリケーションに対するザクロの葉の代謝応答を調査しました。 。 MeJAで処理したザクロの葉では、HT、フラボノイド、アントシアニンのユニークな変化、脂質、脂肪酸、フィトオキシリピンの変化が観察されました。 リアルタイムqPCR分析によって検証された比較トランスクリプトーム分析は、HT、フラボノイド、アントシアニン、およびフィトオキシリピン代謝に関与する構造遺伝子および/または調節遺伝子が、モックおよびMeJA処理ザクロの葉で差次的に発現されることを明らかにしました。 MeJAで処理された葉で持続的なアップレギュレーション発現を示した唯一のLOX遺伝子は、さらなる分子的、生化学的、および系統学的特性評価を受けました。
材料および方法
化学薬品
-グルコガリンおよびペンタガロイルグルコース標準は、Shanghai Yuanye Bio-Technology Co. Ltd（Shanghai、China）から購入しました。 LOXアッセイで使用される化学物質は、次のベンダーから入手しました：3-（ジメチルアミノ）安息香酸（DMAB）（Adamas Reagent、Co.、Ltd.、Shanghai、China）、リノール酸（Sigma-Aldrich、St. Louis、MO、USA）、3-メチル-2-ベンゾチアゾリノン（MBTH）およびヘモグロビン（Sangon Biotech Co.、Ltd.、Shanghai、China）。
植物材料
ザクロの果実と種子（cv。Wonderful）は、Panzhihua Academy of Agricultural and Forest Sciencesから惜しみなく提供され、上海辰山植物園のBinjieGe博士によって特定されました。 バウチャー標本（No. CSHO173966）は、中国の上海にある上海辰山植物園の植物標本室に寄託されました。 ザクロの実生は、温度管理された成長室で、25度で6週間、16時間明期/8時間暗期で育てられました。 植物組織へのスプレー適用のMeJA濃度は、100〜250μMの範囲であると報告されています（Ku et al.2014; Hickman et al.2017）。 さまざまな濃度のMeJAが最初にザクロの葉に適用され、そのうち200μMのMeJAは予備分析で識別可能な代謝応答をもたらし、この研究で説明する代謝物および遺伝子発現分析に使用されました。 MeJA処理の前に、ザクロの半分は同様の条件で別の栽培室に移されました。 一方の成長室の植物には200μMMeJAを噴霧し、もう一方の成長室の植物には水を噴霧しました（つまり、模擬対照）。2- h、3- h、6- h、12- h、24- h、30- h、36- h、48- h、および72- h処理後、3から離れます1つの生物学的複製を構成する5つの模擬またはMeJA処理植物をプールしました。 模擬およびMeJA処理実験のために3つの生物学的複製が収集されました。 各生物学的複製は、代謝物プロファイリングと遺伝子発現分析のためにアリコートに分けられました。
代謝物プロファイリング分析
ザクロの葉を凍結乾燥し、秤量し、ビーズビーター（Mixer Mill MM 400、Retsch GmbH、ハーン、ドイツ）でジルコニアビーズを使用して30Hzで90秒間微粉末に粉砕しました。 HPLC分析では、葉のサンプルを超音波処理下で70％メタノールで60分間抽出し、13、000rpmで10分間遠心分離しました。 上清をHPLCバイアルに移し、その30μLを逆相HPLC（Agilent 1200、Agilent Technologies、米国サンタクララ）に注入し、前述のように分析しました（Wil-son et al.2019）。 代謝物は、254 nm、280 nm、320 nm、および360nmでのUV吸収によって検出されました。 -グルコガリンとペンタガロイルグルコースの標準検量線を作成しました。 それらは、-グルコガリンとペンタガロイルグルコースの保持時間と吸収スペクトルに一致するピークの面積をそれぞれの濃度に変換するために使用されました。
LC-ESI-MS / MS分析では、均質化した葉のサンプル（1 0 0 mg）を1 mLの70％メタノールで、4度のカバーナイトで抽出しました。翌日、メタノール抽出物を10℃で遠心分離しました。 、000×gを10分間行い、上澄み液をCNWBOND Carbon-GCB SPEカートリッジ（ANPEL、上海、中国）および0。22-μmシリンジフィルター（ANPEL）に通しました。代謝物分析。
抽出物（2μL）は、LC-ESI-MS / MS（Shim-pack UFLC、島津、京都、日本; QTRAP65 0 0、Applied Biosystems、フォスターシティ、カリフォルニア、米国）を使用して分析しました。逆相C1sカラム（ACQUITY UPLC HSS T3,1.8 m、2.1mm×1 0 0 mm、Waters、ミルフォード、マサチューセッツ州、米国）。0.04パーセントの酢酸を含む溶媒（A）水を使用して代謝物を溶出しました。 、および（B）アセトニトリルを含む0.04パーセントの酢酸を0-11分、95-5パーセントA; 11-12分、5パーセントA;12-12。1分、5-95パーセントA;12。1-15分、95パーセントA。流量は0.4mL分-1に維持されました。 リニアイオントラップ（LIT）およびトリプル四重極（QQQ）MSスキャンは、正および負イオンモードで取得されました。 ターボスプレーイオン源は、5500 Vのイオン化電圧で500℃で動作しました。イオン源ガスI、ガスI、およびカーテンガスは、それぞれ55 psi、60 psi、および25psiに設定されました。 衝突ガス（窒素）は5psiに設定されました。 MRM分析では、デクラスタリングポテンシャル（DP）と衝突エネルギー（CE）が、各プリカーサー-プロダクトイオン遷移に対して最適化されました。
For metabolite identification, the LC-ESI-MS/MS data were compared with an MS2T library of commercial standards and previously identified compounds published in mass spectral databases (when commercial standards are not available)(Chen et al.2013). Pomegranate metabolites were annotated based on the retention times, accumulate m/z values and fragmentation patterns that match the MS2T library entries(Chen et al.2013). Metabolite quantification was performed using the MRM method as described by Dresen et al. (Dresen et al.2010). The biological replicates of each treatment (mock or MeJA)were averaged for comparative metabolite analysis. The Variable Importance in Projection(VIP) value was obtained from the Orthogonal Partial Least Squares Discriminant Analysis(OPLS-DA)model. Metabolites with ILog, FCl>1, and VIP>=1は大幅に変更されたと見なされました。
トランスクリプトーム解析
全RNAは、TRIzol試薬（Invitrogen、米国カリフォルニア州カールズバッド）を使用してザクロの葉から抽出し、Nanodrop2000（ThermoFisher Scientific、米国マサチューセッツ州ウォルサム）を使用して定量しました。 RNAサンプルの完全性は、アガロースゲルでの分離（目に見える分解なし）およびNanodrop2000を使用したOD20 / 28o比（1.8〜2.2）の測定によって検証されました。 全RNAからのmRNAの濃縮は、オリゴ（dT）磁気ビーズ（Invitrogen）を使用して実施しました。mRNA-Seqライブラリーは、Truseq RNAライブラリー調製キット（イルミナ、サンディエゴ、カリフォルニア州、米国）を使用して構築しました。 トランスクリプトーム解析はイルミナHiSeq4000で実施され、55-60百万の150- bpペアエンドリード（PE150）が各サンプルライブラリで取得されました。
生のシーケンスデータは、アダプターシーケンスとshort（<50 bp),="" low="" quality=""><30), and="" poly(="">10%)reads using SeqPrep (https://github.com/jstjohn/seqprep)and Sickle (HTTPS:GitHub. com/Joshi/sickle).Over 95% of the cleaned reads were uniquely mapped to the reference pomegranate genome for each sample library using HISAT2(Kim et al.2015) and the mapped reads were assembled using StringTie(Pertea et al.2015). The assembled transcriptome sequences were annotated using NCBI NR(ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/db/). Transcript abundance was determined by the RNA-Seq by Expectation-Maximization(RSEM) method and expressed as Transcripts Per Kilobase Million(TPM)(Li and Dewey 2011). Differential gene expression analysis was performed using DESeq2 (Love et al.2014), with a thresh-old of the log, FCl>1、および調整されたP値<>
リアルタイムqPCR分析
RNAprep Pure Plant Kit（Tiangen Biotech Co.、Ltd.、Beijing、China）を使用して、モックおよびMeJAで処理したザクロの葉からトータルRNAを抽出しました。 全RNAとPrimeScriptTMRT試薬キット（タカラバイオ株式会社、草津、日本）を使用して逆転写（RT）を実行し、TB GreenTM Premix Ex Taq TM（Tli RNaseH Plus）キット（Tli RNaseH Plus）キットを使用して定量PCR（qPCR）を実行しました。タカラ）およびStepOnePlusリアルタイムPCRシステム（Ther-moFisherScientific）。 融解曲線分析が実施され、各プライマーペアに対して単一の増幅産物が示された。 RT-qPCR分析では、3つの生物学的複製とそれぞれ3つの技術的複製を、模擬およびMeJA処理サンプルについて調べました。 比較C、（△AC）法（Livak and Schmittgen 2001）を使用して遺伝子発現を分析し、両側スチューデントのt検定を使用して有意水準を決定しました。 リアルタイムqPCR分析用のプライマー配列とプライマーペアの増幅効率を表S1に示します。
組換えタンパク質の発現と精製および酵素アッセイ
Pgr 0 25417（推定LOXをコードする）のオープンリーディングフレームは、大腸菌（Genewiz、蘇州、中国）での最適なコドン使用のために合成され、pET28aでクローン化されました。組換えプラスミドは大腸菌BL21に形質転換されました。 （DE3）細胞。 5 0 ugmL-イカナマイシンを含む5-mLルリアベルターニ（LB）培養を単一コロニーから開始し、37℃で振とうしながら一晩インキュベートしました。 一晩培養物を使用して、100- mLLB培地に50ugmL-カナマイシンを接種し、OD600が0.5になるまで増殖させました。 次に、イソプロピル- - D-チオガラクトシド（IPTG）を最終濃度0.1 mMになるように添加して、タンパク質発現を誘導しました。 16度で18時間振とうしながらインキュベートした後、遠心分離により細胞を回収した。 細胞ペレットを溶解バッファー（50 mM NaH、PO、pH 7.4,300 mM NaCl、10 mMイミダゾール）に再懸濁し、セルディスラプター（Constant Systems Ltd、Northants、UK）を使用してホモジナイズしました。洗浄バッファー（50 mM NaH、PO、pH 7.4,300 mM NaCl、25 mMイミダゾール）および溶出バッファー（50 mM NaH、PO、pH 7.4,300 mM NaCl、500 mM）を含むNi-NTAビーズ（ThermoFisher Scientific）精製されたタンパク質は、タンパク質の純度を視覚化するために、10％SDS-PAGEゲルで分離されました。 精製されたタンパク質の濃度は、ブラッドフォードアッセイ（ブラッドフォード1976）を使用して決定されました。
LOXアッセイでは、わずかな変更を加えた2段階の比色法でリノール酸を基質として使用しました（Anthon and Barrett 2 0 0 8）。 5 0 mMリン酸ナトリウム、pH 6、10 mM DMAB、0.5 mMリノール酸、およびさまざまな量の精製組換えタンパク質（1.5 mg mL-）を含む500-μL反応混合物をインキュベートしました。 25度で10分間、0.2mMMBTHと0.1mgmL-'ヘモグロビンを含む2番目の溶液（500μL）を反応混合物に添加し、さらに5分間インキュベートしました。 500μLの1パーセント（w / v）ラウリル硫酸ナトリウムを加えることにより反応を停止させた。 598nmでの吸光度を測定しました。
細胞内局在および系統発生分析
注釈付きザクロゲノムの検索（Qinetal。2017）は、Pgr025413、Pgr020032、Pgr025418、Pgr025417、PgrO18982、PgrO18980、PgrO16852（ GenBank XP _031395793）、Pgr009839、Pgr008562、Pgr025678、およびPgrO13780の完全長シーケンス。 ザクロLOXのシグナルペプチドの細胞内局在および切断部位は、TargetP 2.0（http://www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/)(Almagro Armenteros et al.2019）を使用して予測されました。
TF結合部位分析
TFの結合部位を予測するために、ターゲット遺伝子のATG開始コドンの1000 bp上流をGenBankから取得し、PlantRegMap（バージョン5）でEucalyptus Grandis TFに対して検索しました（Tian et al.2020）。結合のしきい値サイトIDはP以下le-4に設定されました。
統計分析
代謝物の定量、トランスクリプトーム、およびリアルタイムqPCRデータの統計分析については、それぞれのセクションで説明します。
結果
MeJAはザクロの葉の細胞シグナル伝達と代謝経路を調節します
MeJAの誘発に対するザクロのゲノム全体の転写応答を理解するために、ザクロのトランスクリプトームは、MeJAまたは72-hの後に2-h、6- h、24- h、および72-hで葉を出します。模擬処理（それぞれ3つの生物学的複製）を分析しました（図S1）。 GC含量が約52％、Q30値が91.6〜95％のトランスクリプトームごとに、約5,500万の生のシーケンスリード（2×150 bpペアエンド）が得られました（表S2）。 すべてのトランスクリプトームについて、クリーンアップされたシーケンスリードの96％以上が参照ザクロゲノムにマッピングされました（Qin et al.2017）（表S3）。アセンブルされた転写物の大部分は1000 bp（34.3％）、1000bp未満でした。 2000 bp（32.9パーセント）、または2000 bp〜3000 bp（18.1パーセント）（表S4）。
To identify pathways that are significantly enriched with differentially expressed genes (DEGs)at the above-mentioned time points, genes that show significantly different expression(log, FCl>1、調整済みP<0.05)between meja-="" and="" mock-treated="" leaves="" were="" compared="" to="" the="" kyoto="" encyclopedia="" of="" genes="" and="" genomes(kegg)database="" (fig.s1).="" application="" of="" meja="" modulated="" the="" expression="" of="" genes="" in="" plant="" hormone="" and="" mitogen-activated="" protein="" kinase="" (mapk)signaling="" pathways="" as="" well="" as="" fatty="" acid="" metabolism="" at="" all="" time="" points,="" with="" the="" only="" exception="" of="" those="" in="" plant="" hormone="" pathways="" at="" 24-h="" (fig.="" s1).="" while="" changes="" in="" aromatic="" amino="" acid="" metabolic="" (including="" the="" shikimate="" pathway)genes="" became="" evident="" at="" 6-h="" after="" meja="" treatment="" (fig.s1b),a="" surge="" of="" modified="" expression="" of="" flavonoid="" metabolic="" genes="" was="" observed="" for="" the="" 24-h="" and="" 72-h="" post-meja="" treatment="" leaves="" (figs.="" slc="" and="">
シキミ酸およびHT経路遺伝子とHT代謝産物はMeJA処理したザクロの葉で誘導されたトランスクリプトームとKEGG経路濃縮分析で明らかになったように、3つのシキミ酸生合成経路遺伝子は{{3 }} h、3-デオキシ-D-アラビノース-ヘプツロソネート-7-リン酸シンターゼ（DAHPS）、3-デヒドロゲネートシンターゼ（DHS）、および二官能性3-デヒドロゲネートデヒドラターゼ/シキミ酸デヒドロゲナーゼ（DHQ / SDH; SDHと略記）（図S1bおよびla）特に、ザクロSDHの3つのアイソフォームが同定され、トランスクリプトーム解析で差次的発現を示しました、Pgr020271、Pgr019030、およびPgr019029、
シキミ酸およびHT生合成遺伝子転写物の量の変化がこれらの経路に由来する代謝物のレベルに影響を与える可能性があるかどうかを判断するために、フェノール代謝物を24- h、30-hで収穫された葉から抽出しました。 MeJAまたは模擬アプリケーションの36-h、48- h、および72- h後、HPLCで分析します（図2）。 これらの時点は、6- hでシキミ酸およびHT生合成遺伝子の発現変化が観察された後、タンパク質合成および代謝産物の生成と蓄積に必要な時間を考慮して選択されたことに注意してください。 4.57分（ピーク1）と24.98分（ピーク2）で溶出された2つの代謝物の保持時間と吸収スペクトルは、HT経路中間体-グルコガリンとペンタ合金-グルコースのそれぞれと一致しました（図1aと2a）。 両方のピークは、複数の時点で統合されたピーク面積に有意な変化を示しました（図2b）。 具体的には、ピーク1は、30- h、36- h、および48- hのモックコントロールと比較して、MeJA処理した葉で増加しました（図2b）。 興味深いことに、MeJAで処理した葉のピーク2は、最初は24- hで減少しましたが、その後30-hと36-hで増加してから、48-の模擬対照と同様のレベルに戻りました。 hおよび72-h（図2b）。
ほとんどのフラボノイドとアントシアニンの減少、およびメチル化フラボンとフラボノールの増加は、MeJAで処理されたザクロの葉で明らかでした。
To investigate whether exogenous application of MeJA may trigger broad-scale metabolic changes in pomegranate, metabolite profiling analysis was conducted on leaves collected at 72-h after mock- or MeJA treatment using LC-ESI-MS/MS. Metabolite annotation and quantification were performed using an MS/MS spectral tag (MS2T)library and multiple reaction monitoring(MRM), respectively. Of the 658 metabolites that were detected,29 showed increased and 73 exhibited decreased accumulation in MeJA-treated leaves compared to the mock controls (ILog, FCl>1; 表S5およびS6）。 蓄積の異なる代謝物については、植物の二次/特殊代謝に関与する代謝物（67/102）、特にフェノール化合物（63/102）が全体的に濃縮されていました（表S6）。
フェノール類の中で、広範囲のフラボノイドとアントシアニン（73の減少した化合物のうち42）の協調的な減少がMeJA処理した葉で明らかでした（図3;表S6）。 興味深いことに、ジ-O-メチルケルセチン、クリソベリルO-ヘキソシル-O-ヘキソシド、および5- O-ヘキソシドの販売を含む、3つのモノまたはジ-O-メチル化フラボンおよびフラボノールがMeJA処理葉で増加しました（図3;表S6）。 ルテオリン、クリソベリル、ジヒドロケンフェロール、ジヒドロケルセチン、ジヒドロミリセチン、エピカテキン、デルフィニジン、ペラルゴニジンなど、フラボノイドとアントシアニン経路のいくつかの中間体が検出されましたが、MeJA処理した葉では有意な変化は見られませんでした（図3;表S5）。 ヒドロキシシン-ナモイル誘導体、イソフラボン、およびクマリンは、MeJA誘導時に蓄積の減少を示した他のフェノール類の中にありました（表S6）。 対照的に、2つのフェノール酸、2、3-ジヒドロキシ安息香酸とプロトカテク酸（3、4-ジヒドロキシ安息香酸）、およびクマリン、6-メチルクマリンは、MeJA処理した葉で増加しました（表S6）。
MeJAで処理されたザクロの葉で大幅に減少したフラボノイドとアントシアニンと一致して、フラボノイドとアントシアニンの生合成のための2つの重要な酵素の転写産物。 CHS（Pgr005566）とCHI（Pgr025966）は、トランスクリプトーム解析によると、MeJA適用後の6-hと24-hで有意に減少しました（図4）。 リアルタイムqPCR分析を実行して、2- h、3- h、6- h、12- h、{{ 11}} h、48- h、および72- h（図4）。CHSトランスクリプトは3- hでMeJA処理された葉に落下し、モックのものよりも大幅に低いままでした。 72- hまで制御し、12-hで最大の減少を示します。 対照的に、CHI発現の低下は、MeJA治療後の24- h、48- h、および72- hでのみ有意でした（図4）。
この記事はPlanta（2021）254:89https://doi.org/10.1007/s00425-021-03735-9から抜粋したものです。