4. 統計分析

記述統計はすべての変数に対して実行され、標準偏差を伴う平均として表されました。 血清および精液中の sLHCGR と結果変数 (ホルモン、思春期開始、精巣サイズ、年齢、および BMI) との関係は、回帰分析を使用して実行されました。 数値変数のガウス分布は、回帰モデルの妥当性を保証するために残差 pp プロットによって評価されました。 その結果、すべてのコホートで血清および尿中の sLHCGR が従属変数として使用され、若い健康な男性の精液中の sLHCGR が従属変数として使用され、精液/血清中の sLHCGR が従属変数として対数変換されました。組み合わせた分析。 検出限界未満のホルモンおよび sLHCGR の測定値は、検出限界の半分に設定されました。 大規模コホートでは、sLHCGR がさらに四分位に分割され、多重比較を調整するためにダン・ボンフェローニ事後検定を使用してクラスカル・ウォリスが実行されました。 思春期の長期的な測定、臨床介入の結果、および同じ男性の異なる体液中の sLHCGR の比較が、Wilcoxon 対応検定を使用して分析されました。 複数の対応のある検定が実行された場合、複数の検定の有意水準は Bonferroni 法を使用して補正されました。 インヒビン B/FSH、テストステロン/LH、およびテストステロン/エストラジオールの比率は、独立した回帰モデルで計算および分析されました。 すべての思春期前男児において、テストステロンとエストラジオールの分析（比率を含む）は、2 つを除くすべての測定値が検出限界を下回っていたため無視されました。 すべての分析で、p <0.05 が統計的に有意な差であるとみなされます。 提示されたすべての精液の品質分析は、射精禁欲期間に合わせて調整されました。

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結果

1. LHCGR のいくつかのアイソフォームが精巣で発現され、血清で検出される

エクソン 2-4 のプライマーを使用して、生殖組織で LHCGR のいくつかのアイソフォームが同定されました。 約 100 塩基対と 200 塩基対の 2 つの強力なバンドがヒト精巣サンプルと卵巣 RNA で検出され、ダイレクト シーケンスによって LHCGR であることが確認されました。 エクソン 11 は精巣と卵巣でも発現しました。 LHCGR はヒト精巣組織と 2 つの血清サンプルで検出されました。 OASG04237.WB に対する抗体を用いたウエスタンブロッティング (WB) 技術を用いた ELISA による高 sLHCGR 男性血清サンプルと低 sLHCGR 男性血清サンプルでは、​​精巣に 50 kDa と 75 kDa の 2 つのバンドが示され、血清サンプルと血清の両方で同様のサイズのより小さいバンドが示されました。サンプル 血清サンプルでは、​​約 75 kDa の円形のバンドが優勢でした。 LHCGR の細胞外部分に結合した LHR029 抗体を使用しても 50 kDa と 75 kDa の 2 つのバンドが検出されましたが、両方の血清サンプルの強度は精巣に比べて低く、血清サンプルでは 75 kDa のバンドが再び検出されました。 SC-26341 抗体は、LHCGR の細胞外構造ドメインの未知の部分を検出し、すべてのサンプルで約 50 kDa と 75 kDa のバンドを示し、75 kDa のバンドは血清サンプルよりも精巣ではるかに強かったです。 特に、血清中のコントロールの-2ミクログロブリンレベルは、精巣組織と比較して予想よりも大幅に低く、これが組織および血清中のLHCGRレベルの定量的な使用および比較を妨げています。 この研究では、ストリップとトリミングされていないブロットの濃度測定値が示されています。 ELISA アッセイと同じ抗体 (LHR029) を使用した、原位置胚細胞腫瘍と軽度のライディッヒ細胞過形成を有する成人男性の精巣組織の免疫組織化学では、ほとんどのライディッヒ細胞で膜結合と LHCGR の軽度の細胞質発現が示されました。

2. sLHCGRは体液中では検出可能だが、異種移植マウスの血清中では検出できない

ベクター、LH、または hCG で in vivo で処理した TCam-2 異種移植腫瘍の有無にかかわらず、ヌードマウスの血清では sLHCGR は検出されませんでした。

しかし、培養 TCam-2 細胞培地では、低いながらも検出可能なレベルの sLHCGR が示され、この 2 つの組み合わせにより、ヒト ELISA が血清中のどのマウスタンパク質とも交差反応しないことが実証されました。 sLHCGR は、ウシ胎児血清を含む無調整培地でも検出されませんでした。

sLHCGRは、健康な性腺機能低下症の男性の尿から同等のレベルで検出可能でした（平均値{{0}.024 pmol/mL対{{20}}。{{ 28}}21 pmol/mL)。 尿中レベルは平均して血清より約 100 倍以上低く (平均 2.21 pmol/mL、性腺機能低下症は平均 1.80 pmol/mL)、このことは腎臓からの排泄は性腺機能低下症と関連しておらず、10 歳以上の年齢差の影響を受けないことを示唆しています。 さらに、尿中の濃度が低いことは、sLHCGRが他のタンパク質と同様に濾過されず、腎臓の再吸収能力を超える量が排泄されないことを示唆しています。 注目すべきことに、両方の精巣を切除した8人の男性におけるsLHCGRの平均血清濃度は、若い男性（平均2.04 pmol/mL対2.21 pmol/mL）および性腺機能低下症の男性（平均2.04 pmol/mL対平均）と同等であった。 1.80ピコモル/mL）。 さらに、ヒト胎児副腎およびヒト胎児腎臓組織の両方で sLHCGR レベルが検出されました (それぞれ平均 0.15 pmol/mL および 0.14 pmol/mL) (図 1E)。これは、TCam から放出される sLHCGR レベルよりも高かった{{23} } in vitro 細胞 (平均 0.03 pmol/mL)。 総 sLHCGR は、肝臓、腎臓、下肢の動脈相と静脈相から採取した 3 人の男性と 3 人の閉経後女性の血清で測定されました。 すべてのサンプルにおいて、男性 1 名と女性 2 名は検出限界を超えるレベルでしたが、残りは検出不可能なレベルでした。 どの臓器においても動脈側から静脈側へのsLHCGRの有意差は検出されなかったため、これらの臓器を起源部位として除外しました（t検定：p値すべて> 0.31）。

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3. ヒト血清の LC-MS/MS

正常な男性 (n:2)、精巣生殖細胞癌患者 (セミノーマ 1 例、非セミノーマ 1 例)、および妊婦 (n:2) の血清を、アルブミンおよびグロブリン枯渇後のタンパク質ゲル電気泳動に使用しました。 ここでシグナルが最も強かったため、75、60、50、および 35 kDa の 4 つのバンドが妊娠血清から抽出され、低感度 LC-MS/MS によって分析されました。 LC-MS/MS のいずれも LHCGR のトリプシンペプチドを検出しませんでした。 IgG とアルブミンを除去した後、タンパク質含量が最も高いペプチドはアルブミン、補体 C3、-1- アンチトリプシン、およびビタミン D 結合タンパク質であり、検出されたタンパク質はすべて血漿タンパク質でした。

4. 血清sLHCGR。 日内変動、安定性、再現性、凍結、解凍

NBCL ELISA アッセイからの 3 つの異なるバッチの LHCGR キットを使用しました。CV は 16 パーセントと 19 パーセント、濃度はそれぞれ 0.4 と 1.7 pmol/mL でした。 季節や採血の時間帯は、sLHCGR レベル (精液レベルまたは血清レベルのいずれか) に影響を与えませんでした。 成人クラインフェルター症候群男性患者 18 名を対象に、個人内変動が少なく、4-40 か月間継続的に測定されました。 sLHCGRレベルは、2名を除く全員で安定していた。 さらに、精巣を切除した23人の男性を対象に16-30か月間にわたる連続測定では、この期間中に血清sLHCGRレベルが有意に上昇したのは1人の男性のみであったが、残りの22人では血清sLHCGRレベルに全体的な差はなかったことが示された。男性。 凍結融解を複数回行うと、sLHCGR 濃度が約 40% 減少しました。

5. 血清および尿の LHCGR はヒト絨毛性ゴナドトロピンによる治療によって影響を受ける

5000 IU hCG の注射により、8 時間後に血清 sLHCGR が減少し (Wilcoxon 対応検定 p=0.031)、その減少は 24 時間後にさらに強化されました (Wilcoxon 対応検定 p=0) .016、ボンフェローニ補正、p <0.025）。 注射後 24 時間で血清中に検出されたのは、ベースライン sLHCGR 値が最も高かった男性 2 人だけでした。 循環 sLHCGR レベルに対する hCG の急速な効果は尿でも明らかであり、尿中 sLHCGR レベルは 24 時間後にはすべての男性で検出下限を下回りました (Wilcoxon 対応検定 p= 0.0078)。 hCG 注射前のベースライン血清 sLHCGR は、ベースライン尿 sLHCGR、血清テストステロン、または血清 LH レベル、あるいはδ血清テストステロンまたはδ血清 LH レベルと相関しませんでした。 尿中 sLHCGR は、年齢または血清生殖ホルモンのいずれとも相関しませんでした。 hCG は、24 時間後に血清テストステロンの増加を 19.6 nmol/L (3.3 SD) から 28.2 nmol/L (4.4 SD) に誘導し (Wilcoxon 対応検定: p= 0.001)、さらに 43.9 nmol/L (8.6 nmol/L) まで増加させました。 SD)は72時間後に減少したが、24LHは24時間後に有意に減少した(ウィルコクソン対応検定:8時間でp= 0.43、24時間でp= 0.001、p= 0。 72時間で001）。

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6. 小児における縦断的測定では、健康な男児のみ思春期におけるsLHCGRの低下が示されている

性腺刺激ホルモン分泌増加の思春期エピソードが sLHCGR にどのような影響を与えるかを決定するために、36 人の正常な少年を縦断的に追跡し、タナー病期分類を使用して思春期エピソードを評価しました。

個々の思春期後の sLHCGR レベルは、思春期前レベルよりも有意に低かった（思春期前対思春期後のウィルコクソン対応検定: 平均 (1.36 (2.2 SD) pmol/mL 対 0.6{{10} } (0.89 SD) pmol/mL p=0.0001). これは、sLHCGR が血清性腺刺激ホルモンの増加とともに減少する可能性があることを裏付けていますが、生殖ホルモンレベル、BMI、年齢、または精巣サイズはどの時点でも sLHCGR と関連していませんでした。したがって、sLHCGR と、思春期前後の尿中 LH または FSH との間に関連性は見出されませんでした。比較として、7 人の KS 少年を、テストステロン誘発性思春期なしで長期的に追跡調査しました。

KS グループの少年は、染色体異常のない少年と同様に、思春期中に sLHCGR の低下を示さなかった。 KS 男子全員 (1 名を除く) は思春期の開始時に sLHCGR 濃度のピークを経験しましたが、統計的有意性には達しませんでした。 クラインフェルター男児も性腺刺激ホルモンの増加を経験しましたが、理由は不明ですが、sLHCGRの同様の減少は経験しなかったことから、sLHCGRの高さが生殖腺機能の障害と関連している可能性があることが示唆されています。 血清sLHCGRレベルは、若い健常男性と比較して若いKS男性の方がわずかに低かった(0.92 pmol/mL対2.21 pmol/mL、p= 0.031、表1および3)。 血清sLHCGRレベルが最も高かった4人のKS男性は、残りのKS男性と表現型に違いはなかった。

7. 血清sLHCGRは、健康な男性の性腺マーカーのインヒビン/FSH比およびエストラジオールと関連している

一般集団の男性 148 人のベースライン特性。 血清 sLHCGR は、生殖腺マーカーのインヒビン B/FSH 比 (-0.004、p=0.027) と負の相関があり、右端の 2 つの外れ値を除去しても相関関係は変化しませんでした。 : -0.003、p=0.018)。 その後のスライサー四分位層別化では、多重比較の調整後、最も低い sLHCGR 四分位の男性は、最高の sLHCGR 四分位の男性と比較して、インヒビン B/FSH の比率が有意に高く、有意な下降傾向が見られました。 ただし、血清 sLHCGR は、他のホルモンや精液の質、年齢、BMI、または精巣サイズとは関連していませんでした。 比較のために、重篤な併存疾患のない不妊男性 297 人が横断検査を受け、平均血清 sLHCGR は 1.05 pmol/mL (SD 3.15) であり、男性 297 人中 117 人は検出不可能な sLHCGR レベルでさえありました。 このコホートでは、sLHCGR とインヒビン B/FSH 比 (-0.0010、p=0.28)、または測定されたホルモン、精巣サイズ、BMI、年齢との関連性は見つかりませんでした。 男性をsLHCGR四分位に分けた場合、インヒビンB/FSH比に差はなかった(Kruskal-Wallis p=0.56)。 我々は、使用したコホートから、正常な性染色体と思春期発症を持つすべての男性をプールしました。 これにより、利用可能な血清sLHCGRを有する症例の総数（n=488）が増加し、年齢範囲（11.7-58.0歳）とBMI範囲（16.3-56.3歳）が増加しました。 ）。 血清sLHCGRはエストラジオール（-0.009、p=0.020）、年齢（-0.060、p=2.11 × 10-7）と負の相関があった。 )、BMI (-0.072、p=0.004) ですが、他のホルモンとは独立して異なります。 上記すべてのコホートの健康な男性のみを分析した場合、インヒビン B/FSH 比 (-0.003,p=0.045) についても同じ負の相関が見つかりました。

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結論

結論として、この研究は、sLHCGR が血清および一部の体液に放出されることを示しています。 sLHCGR 血清レベルは思春期の発育および生殖腺機能に関連しており、高レベルの血清 hCG によって一時的に抑制されます。 血清 sLHCGR は、生殖腺機能のマーカーとして予後的価値を持つ可能性があります。 sLHCGRは精巣や他の器官を介して血清中に放出され、これは男児や男性におけるLHまたはhCGの性腺外での役割を示唆している可能性がある。

シスタンケ腎臓病に苦しんでいる人、または腎臓の健康を改善したい人にとって優れたサプリメントです。 腎臓の機能を改善し、酸化ストレスから保護し、炎症を軽減し、穏やかな利尿効果があるため、腎臓関連の症状と戦うための貴重なツールとなります。 他のサプリメントと同様に、Cistancheの摂取を開始する前に医療専門家に相談することが不可欠です。

参考文献

1. ブコフスキー、A. インドラピチャテ、Ｋ． 藤原弘； チェカノバ、M. メイン州アヤラ。 ドミンゲス、R. コードル氏、MR。 ウィマルセナ、J. 長老、RF;コパス、P. 他。 複数の黄体形成ホルモン受容体 (LHR) タンパク質変異体、抗 LHR mAb クローン 3B5 の種間反応性、ヒト胎盤、骨盤底、脳における LHR の細胞内局在、異常妊娠の発症における LHR の役割の可能性。再現。 バイオル。 内分泌。2003, 1, 46.

2. ボゾン、V. クチュール、L. パジョ＝オージー、E. リチャード、F. レミー、J.-J. Salesse, R. 細胞内に捕捉されたルトロピン受容体エキソドメインのエンドドメインによる救済と機能的な膜受容体の再構成: エキソドメインとエンドドメイン間の相互作用。 タンパク質指数 プリフ。2002, 25, 114–123.

3. フナロ、A. サピノ、A. フェランティ、B. アラバマ州ホーレンスタイン。 カステラーノ、I. バーニ、B. ガロッタ、G. Malavasi, F. マウスモノクローナル抗体を使用した絨毛性ゴナドトロピン受容体の機能、構造、分布解析。Ｊ．クリン． 内分泌。 メタブ。2003, 88, 5537–5546.

4. リベロ＝ミュラー、A. チョウ、Y.-Y. ジ、私。 ラジック、S. ハンヤログル、AC; ジョナス、K。 ラーマン、N. ジ、TH; Huhtaniemi, I. 欠陥のある G タンパク質共役受容体機能の救済生体内分子間の協力によって。手順 国立 アカド。 科学。 アメリカ合衆国2010, 107, 2319–2324.

5. ディキンソン、レバノン州。 スチュワート、AJ。 マイヤーズ、M. ミラー、RP; Duncan, WC ヒト黄体細胞における黄体形成ホルモン受容体スプライス変異体の示差的発現と機能的特徴付け: 黄体溶解への影響。内分泌学2009, 150, 2873–2881.

6. ヤマシタ、S. 中村和也； 大森裕也; 恒川和也; 村上正人; Minegishi, T. ヒトフォリトロピン (FSH) 受容体とヒトルトロピン/脈絡ゴナドトロピン受容体のスプライシング変異体との結合は、ヒト​​ FSH 受容体の発現を負に制御します。モル。 内分泌。2005, 19, 2099–2111.

7. コロール、P. ハラノフスカ、M. Pawlikowski, M. 非腫瘍性ヒト副腎皮質および副腎皮質腫瘍における LH/CG 受容体の免疫組織化学的実証。フォリア・ヒストケム。 サイトビオール。2019, 57, 23–27.

8. ダンケル、L. ライヴィオ、T. レイン、J. Holmberg, C. 慢性腎不全の男児における循環黄体形成ホルモン受容体阻害剤。腎臓内科1997, 51, 777–784.

9. ラオ、CV; Lei, ZM 生殖生物学および生殖医学における非生殖腺 LH/hCG 作用の過去、現在、未来。モル。 細胞。 内分泌。2007, 269, 2–8.

10. マサチューセッツ州アブダラ。 レイ、ZM。 リー、X。 グリーンウォルド、N. 中島、ST; ジョニオー、E. Rao, CV ヒト胎児の非性腺組織には、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン/黄体形成ホルモン受容体が含まれています。Ｊ．クリン． 内分泌。 メタブ。2004, 89, 952–956.

リー・ジュエル・モーテンセン¹、メッテ・ローレンツェン¹、アン・ヨルゲンセン²、ヤコブ・アルブレッセン²、ニールス・ヨルゲンセン²、ソーレン・モラー^3,4、アンナ・マリア・アンダーソン²、アンダース・ジュール^2,4とマーティン・ブロンバーグ・ジェンセン^1,5

1. デンマーク、コペンハーゲン2100、リグショスピタレット大学成長生殖学部、骨格、ミネラル、生殖腺内分泌学のグループ。 li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ミリリットル)

2. 成長生殖部門および男性生殖の内分泌かく乱と児童の健康に関する研究および研究研修国際センター (EDMaRC)、リグショスピタレット、コペンハーゲン大学、Blegdamsvej 9、2100 コペンハーゲン、デンマーク; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (ニュージャージー州); アンナ-Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)

3. 機能的画像診断および研究センター、臨床生理学および核医学部門 260、ヴィドーヴレ病院、2650 コペンハーゲン、デンマーク; Soeren.Moeller@regionh.dk

4. コペンハーゲン大学健康科学部臨床医学科、2200 コペンハーゲン、デンマーク

5. ハーバード大学歯学部/ハーバード大学医学部骨鉱物研究部門、ボストン、マサチューセッツ州 02115、米国