ニームの葉（Azadirachta Indica A. Juss）ラットの肝臓と腎臓の機能に関するエタノール抽出物
Mar 05, 2022
序章
天然物からの医薬品の開発は、今日世界の注目を集めています。 天然物は独特の化学構造を持ち、多様な生物活性を生み出し、薬物のような特性を持っています[1]。 加えて、天然物を使用した医療の実践は、さまざまな病気の予防と治療において先史時代から行われています。 天然物は、分子標的の効率と選択性の点で多くの利点を提供するため、医薬品の緊急の必要性を効果的に供給するために繰り返し使用することができます[2]。 天然物には、着床[8、9]、抗高血糖、抗潰瘍、抗真菌、抗菌、抗炎症、免疫調節、抗変異原性、抗癌、抗マラリア、抗ウイルス、抗酸化[10–12]、抗受精[13、14]、および避妊[9、11]。 ニーム植物のさまざまな部分がうまく分離され、140を超える化合物が含まれており[10]、何千年もの間漢方薬として使用されてきました[14]。 ニームには、脂肪誘導体、炭水化物、タンパク質などのさまざまな一次化合物と、フラボノイド、ステロイド、サポニン、テルペノイド、アルカロイド、グリコシド、タンニンなどの二次化合物が含まれています[7–15]。 ニーム植物は、副作用を示さずにその有効性のために世界的な関心を集めています。 さらに、ニーム植物の使用は伝統的に非常に安全であり、伝統的な薬の75パーセント以上がニームの葉の抽出物を使用しています。 加えて、既存の報告からのその使用の歴史は、ニームの葉からの副作用を示していません。 しかし、ニームの葉の製剤の使用に関する包括的な安全性評価はこれまで行われていません[11]。
以前の研究は、ニームの葉の抽出物が肝臓に毒性の影響を及ぼし、肝臓 [4、11]; しかし、他の報告は、ニームの葉の抽出物が肝臓を保護し、肝臓損傷から[16–18]。 インドネシアのアチェ県にあるアチェベサールリージェンシーでは、地元の人々がニームの葉を野菜として使用し、副作用を知らずに妊娠を防ぐために使用されてきました。 さらに、これまでのニームの葉の安全性はまだ不明です。 これまで、私たちの知る限り、ニームの葉のエタノール抽出物が肝臓と肝臓に及ぼす影響を評価する研究はまだ限られています。腎臓機能。 現在の研究では、目的は、ニームの葉のエタノール抽出物の投与が肝臓に及ぼす影響を調査することでした。腎機能AST、ALT、尿素、クレアチニン、および組織病理学的肝臓の濃度を調べることにより、肝臓雄ラットで。
キーワード：腎臓機能; 腎臓組織; 腎不全; 腎臓病; 腎臓
材料および方法
ニームリーフサンプルコレクション。ニームの葉は、2019年9月にインドネシアのアチェ県アチェベサールリージェンシーのカジュ村から収集されました。ニームの葉の識別は、インドネシアのボゴールにあるインドネシア科学研究所（LIPI）の生物学研究センターのボゴリエンセ植物園で行われました（1454年）。 /IPH.1.01/If.07/VII/2019）であり、Azadirachta indicaA.Jussとして示されます。ニームの葉のエタノール抽出物の調製。新鮮なニームの葉を集め、洗浄し、風乾し、粉砕して粗粉末を生成した。 さらに、粗粉末をエタノールで70％で7日間浸軟させた。 さらに、50度のロータリーエバポレーターを使用して濾液を蒸発させ、粘稠な抽出物を生成した。動物実験。実験動物は、体重15 0 – 250gの24匹のオスのウィスターラットでした。 ラットを7日間順応させ、各グループに6匹のラットが含まれていたため、ランダムに4つのグループ（T0、T1、T2、およびT3）に分けました。 T0は治療を受けていない対照群であり、T1、T2、およびT3は治療を受けた治療群です。
ニームの葉のエタノール抽出物をそれぞれ100、200、300 mg/kg体重で投与した。 抽出物を胃管を使用して48日間経口投与し、49日目に血液サンプルを採取して、AST、ALT、尿素、クレアチニン、次に肝臓とクレアチニンの濃度を測定しました。肝臓組織病理学を評価するために組織を収集した。 研究中、ラットには標準飼料と水を自由に与えた。
生化学的分析。血液サンプル（2〜3 ml）は、滅菌注射器を使用して心臓から採取されました。 さらに、血液をエッペンドルフチューブに移し、室温（30度）で10分間放置しました。 血液を3000rpmで10分間遠心分離しました。 さらに、e血清を分離し、冷蔵庫（0 20度）に保管しました。 さらに、化学分析装置（Rayto RT -1904 C）を使用して、AST、ALT、尿素、および血中クレアチニンを調べました。 さらに、AST、ALT、尿素、クレアチニン濃度の測定手順は、製造元のプロトコルに従って実行されました。
組織病理学的検査。 The肝臓と肝臓ラットの10％中性緩衝ホルマリン溶液で24時間固定し、一連のアルコールで脱水し、キシロール溶液で清澄化した後、パラフィンブロックに包埋しました。 パラフィンブロックに埋め込まれた組織を、回転式ミクロトームを使用して厚さ4 µmに切断し、スライドガラスにマウントし、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、光学顕微鏡で10×10の倍率で検査しました。統計分析。データは、分散分析（一元配置分散分析）と、それに続くSPSS24を使用したDuncanの事後検定を使用して分析されます。p値<0.05 was="" considered="" statistically="">
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結果と考察
6eASTおよびALT濃度。 さらに、T 0、T1、T2、およびT3のeAST濃度は290。9±20 2.5 U / L、277.2±167.2 U / L、421.3±2{でした。 {28}} 1.5 U / L、および366.3±276.9 U/L。 さらに、T2およびT3グループのAST濃度は、T {{3 0}}（対照グループ）と比較して増加する傾向がありました。 ただし、T1、T2、およびT3グループのAST濃度は、T0グループとの有意差を示しませんでした（p> 0.05）。 さらに、T0、T1、T2、およびT3のe ALT濃度は、それぞれ108.6±23.1 U / L、116.3±51.9 U / L、105.9±15.2 U / L、および95.9±36.2 U/Lでした。 さらに、T2およびT3グループのALT濃度は、T0（コントロールグループ）と比較して減少する傾向がありました。
ただし、T1、T2、およびT3グループのALT濃度は、T 0グループとの有意差を示しませんでした（p> 0。05）（表1）。 AST酵素は肝臓の損傷の存在を評価するために使用された1つのマーカーです。 さらに、酵素は糖新生の過程でアスパラギン酸アミノ基のケトグルタル酸への変換を触媒してオキサロ酢酸を生成する役割を果たしました。 AST酵素は、肝臓、骨格筋、心筋の細胞質およびミトコンドリアのアイソザイムに含まれています。腎臓、脳、膵臓、肺、白血球、および赤血球。 ただし、このAST酵素は、肝臓の損傷を評価するための感度と特異性が低くなっています[19]。 対照群（T 0）と比較して治療群（T1、T2、およびT3）のAST濃度に有意差はありませんでしたが、AST濃度はTと比較してT2およびT3群で増加する傾向がありました0（対照群）。 さらに、フラボノイド、タンニン、サポニン、アルカロイド、ステロイドなどのニームの葉抽出物の活性化合物が原因で増加が遅れた可能性がありますが、ニーム葉エタノール抽出物の活性化合物がASTを増加させることは確認されていません。 AST酵素の増加は、肝臓だけでなく他の体組織にも特異的であるため、必ずしも肝臓障害が続くとは限りません。
この研究では、ALT酵素は対照群（T 0）と比較して治療群（T1、T2、およびT3）で減少する傾向があることもわかりましたが、ALT酵素の減少は統計的に有意ではありませんでした。 ALT酵素はAST酵素よりも肝臓損傷のより良い予測因子でした。なぜなら、この細胞質ゾル酵素は肝臓で最も高い濃度で発見され、肝機能の損傷を評価するのにより特異的だったからです[20]。 さらに、酵素は、アラニンからケトグルタル酸へのアミノ基の移動を触媒してピルビン酸を生成することにより、糖新生において役割を果たしました[19]。 ALTは496アミノ酸で構成され、細胞質ゾル肝細胞で発見されました。 肝臓のALT酵素活性は血清活性の約3000倍であったため、肝細胞の損傷または死の場合、損傷した肝細胞から放出されたALTは血清中のALT酵素の測定された活性を増加させます[21]。
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モハメドら。 [22]は、ニームの葉のエタノール抽出物がラットのASTおよびALT酵素の減少を引き起こすことを発見しました。 ニームの葉のエタノール抽出物は肝臓に副作用がなく、肝臓の保護にもなります。 Haqueらによって実施された研究。 [23]はまた、ニームの葉の抽出物が雄ラットのASTおよびALT酵素の正常な血清活性に変化を引き起こさないことを発見しました。 Bhangraetal。 [24]は、パラセタモール誘発ラットに500 mg / kg体重のニーム葉抽出物を投与すると、正常なASTおよびALT濃度と組織病理学的観察によって示されるように、肝障害が減少したことを報告しました。 Dkhilらによって実施された研究の結果。 [17]は、シスプラチンによって誘発されたラットに対する500 mg/kg体重の肝臓へのニームの葉のメタノール抽出物の保護効果を示した。 マリック他 [25]は、ニームの葉のメタノール抽出物は、高用量でもラット肝臓に毒性作用を及ぼさなかったと報告しました。 ニームの葉の抽出物の抗酸化成分は、肝保護効果をもたらしました。 HartonoとPrabowoが実施した研究[26]は、高用量のパラセタモールを10日間誘導することにより、ラットにニームの葉のエタノール抽出物を投与すると、実験動物の酵素ALTの活性も低下する可能性があることを発見しました。 ALT酵素の減少は、酸化的肝障害を阻害することにより肝保護として機能したニーム葉抽出物の活性化合物によるものでした。 抗酸化剤は、膜リン脂質に毒性作用を及ぼし、広範囲の細胞損傷を引き起こす活性酸素種（ROS）の形成を減少させる直接スカベンジングによって、生成のためのフリーラジカルを減少させる可能性があります。 抗酸化物質は肝細胞への酸化ストレスを減らすことができ、血中のALT酵素の活性が低下します。
尿素とクレアチニンの濃度。T {{0}}、T1、T2、およびT3の尿素濃度は51.1±7。0 mg / dl、55.6±8.5 mg / dl、44.5±5.4 mg / dl、およびそれぞれ48.4±3.4mg/dl。 T1、T2、およびT3グループの尿素濃度はT 0グループとの有意差を示しました（p<0。{{30}} 5）。="" t="" 0、t1、t2、およびt3のクレアチニン濃度は0。22±0。{{4="" 0}}="" 4="" mg="" dl、{{44="" }}。24±0。0それぞれ3mg/="" dl、0.21±0.03="" mg="" dl、0.25±0.03="" mg/dl。="" t1、t2、およびt3グループのクレアチニン濃度はt0グループとの有意差を示さなかった（p=""> 0.05）（図1）。 The肝臓尿素、クレアチニン、尿酸などの老廃物や毒素の排泄に重要な役割を果たしています。 また、細胞外液量、浸透圧、電解質濃度、およびホルモン産生の調節にも機能します。 プラスe機能ユニット肝臓糸球体、近位尿細管、遠位尿細管、集合管からなるネフロンです[27]。 さらに、eの結果は、対照群（T 0）と比較して治療群（T1、T2、およびT3）で尿素濃度に有意差があり、T2およびT3群で尿素濃度が減少したことを示しました。 T 0（対照群）へ。 尿素は、タンパク質代謝と尿素回路の最終生成物として肝臓で形成される窒素含有化合物です。 面積の約85％が腎臓、そして残りは消化管から排泄されます。 血清尿素は、急性および慢性のように腎臓の浄化状態で増加します腎不全。 尿素は、上部消化管出血、脱水症、異化作用、高タンパク食などの他の症状でも増加する可能性があります[27]。この研究では、対照群と比較して、治療群の尿素濃度が低下しました。 ニームの葉のエタノール抽出物が影響を与えなかったことを示しています腎機能オスのラットの。 Guyton and Hall [28]によると、血中の総尿素は食事性タンパク質とその能力によって決定されました。腎臓尿素を排出します。 腎臓が損傷すると、尿素が血液中に蓄積します。 血漿中の尿素の増加が示されている腎不全そのろ過機能を実行する際に。 プラスe条件腎不全非常に高い血漿尿素レベルを特徴とする、尿毒症として知られています。
尿素は、タンパク質とアミノ酸の異化作用に由来する窒素の最終生成物であり、肝臓によって生成され、すべての細胞内液と細胞外液に分配されます。 の中に肝臓、尿素は糸球体によって血液からろ過され、部分的に水によって再吸収されます。 尿素の増加は、糸球体濾過率が低いことを示しています。 尿素濃度の上昇は、腎臓病または失敗、尿路閉塞による肝臓石、うっ血性心不全、脱水症、発熱、ショック、消化管の出血。この研究では、対照群（T 0）と比較して、治療群（T1、T2、およびT3）のクレアチニン濃度に有意差がないこともわかりました。 ニームの葉のエタノール抽出物がラットに損傷を与えなかったことを示しています肝臓。クレアチニンは一般的にの尺度として使用されます腎臓機能。 クレアチニン濃度は、筋肉量の積だけでなく、筋肉機能、筋肉組成、活動、食事、健康状態にも影響されます。 クレアチニン濃度の上昇は、筋ジストロフィー、貧血、白血病、甲状腺機能亢進症にも見られます[29]。 クレアチニンは、評価のために最も一般的に使用されるマーカーです腎機能。クレアチニン濃度は、糸球体の作用の指標を提供します。 クレアチニンは筋肉中のクレアチンリン酸の副産物であり、体によって一定の速度で生成されます。 ほとんどの場合、クレアチニンは血液から完全に除去されます腎臓。 クレアチニンの増加は、クレンジングの減少を示しています腎臓。 クレアチニン血清は、より正確な評価です腎臓機能尿素より[27]。
Moneimetal。 [16]は、ニームの葉の抽出物を500 mg / kg体重の用量でラットに5日間投与しても、ラットの尿素およびクレアチニン濃度に変化が生じないことを発見しました。 Kepalaetal。 [30]はまた、500 mg / kg体重の用量でニーム葉抽出物を14日間与えられたラットが、シスプラチンによって誘発されたラットの尿素およびクレアチニン濃度の低下を引き起こしたことを発見しました。腎臓の損傷。 ニームの葉のエタノール抽出物は、腎臓の損傷。Somsakらによって実施された研究。 [18]は、1000および2000 mg/kg体重のニーム葉水抽出物がラットに毒性作用を及ぼさないことを発見しました。 ニームの葉の抽出物は、損傷に対する腎保護の候補として使用することができます腎臓.
肝臓と腎臓の組織病理学。対照群（図2（a）および100mg / kg（図2（b））、200mg / kg（図2（c））、および300mg / kgの用量での治療群における肝臓の組織病理学的観察） （図2（d））は、肝臓、中心静脈、および肝細胞が正常に見えることを示しました（図2）。肝臓100 mg / kg（図3（b））、200 mg / kg（図3（c））、および300 mg / kg（図3（c））の用量での対照群（図3（a））および治療群における組織病理学的観察図3（d））は、糸球体と近位尿細管および遠位尿細管の正常な外観を示しています。 加えて、組織学的変化はありませんでした肝臓（図3）。
肝臓と腎臓薬物や他の物質の代謝と排泄に重要な役割を果たす器官です。 この研究では、ニームの葉のエタノール抽出物を100、200、および300 mg / kgの用量で投与しても、ラットの肝臓に異常や損傷を引き起こさないことが示されました。 さらに、処理されたラットの肝臓は、肝臓の正常な一般構造と中心静脈および肝細胞の正常な外観を示しました。 さらに、肝臓の組織病理学は、ASTおよびALT酵素の分析結果に従っており、対照群と治療群の間に有意差がないことを示しています。 対照群と比較して200および300mg/kg群でAST酵素の増加があったが、肝臓の組織病理学は正常に見えた。 AST酵素は肝障害に特異的ではありません。 ASTは主に赤血球、心臓および骨格筋、および腎臓。 ASTはALTよりも肝臓に対する感受性が低い[19]。
The肝臓インドセンダンの葉のエタノール抽出物を100、200、および300 mg / kgの用量で投与した後の組織病理学的観察では、対照と比較して差は見られませんでした。 The肝臓治療されたラットにおいて、正常な一般を示したの構造肝臓糸球体と尿細管の正常な外観。 この発見は、対照群と治療群の間に有意差を示さなかったラット血液中の尿素とクレアチニンの分析によって裏付けられています。 尿素とクレアチニンは、の主な指標である生化学的パラメータです腎臓機能。 ただし、クレアチニンはより正確な評価です腎臓機能尿素より[27]。 これは、ニームの葉の抽出物が潜在的な肝保護および腎保護効果を持っているという以前の報告のいくつかと一致しています[31]。 楠間ほか [32]は、ニームの葉のエタノール抽出物が、ラットの肝細胞の直径、肝小葉の直径、および肝臓の重量に影響を与えないことを発見しました。 対照的に、Katsayalらの研究。 [33]は、500、1000、および2000 mg / kgの用量でニームの葉のメタノール抽出物を投与すると、対照と比較して、治療したラットの肝臓と腎臓に異常が生じることを発見しました。 結果のこの違いは、おそらくニームの葉の抽出物の投与量が異なるためでした。 Theこの研究の結果は、カジュからのニームの葉のエタノール抽出物が肝臓に損傷を与えなかったことを示しています。腎臓雄ラットの。 プラスは、抗酸化物質であるニームの葉のエタノール抽出物の活性化合物によるものです。 以前の研究は、カジュからのニームの葉のエタノール抽出物がフラボノイド、アルカロイド、タンニン、サポニン、およびステロイドを含むことを示しています[34]。 さらに、抗酸化剤として作用する活性化合物はフラボノイドです。 さらに、ニームの葉のエタノール抽出物は強力な抗酸化作用を持っています[35]。 さらに、Kajhuからのニームの葉のエタノール抽出物は、オスのラットの肝臓と腎臓に安全です。
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結論
インドセンダンの葉のエタノール抽出物は肝臓に損傷を与えず、肝臓AST、ALT酵素、尿素、クレアチニン濃度および組織病理学的肝臓の分析によって示される雄ラットの肝臓。 しかし、薬用ニームの葉の安全性を明確に把握するために、さまざまな用量でのニーム葉抽出物の包括的な安全性評価には、さらなる調査が必要です。
